可控制开放系统培育清洁级小鼠的研究初报

我国《实验动物质量控制标准》规定 ,普通级小鼠只限于教学实验使用 ,其它试验研究均需使用清洁级以上小鼠。为尽快满足科学实验的急需 ,我们进行了可控制开放系统培育清洁级小鼠的试验研究 ,以期探讨一条适合西北地区实验动物发展水平的培育清洁级小鼠的生产模式。1　设施改造、设备配置和管理制度1.1　饲育环境控制　按照清洁级动物饲育间设施的要求 ,将普通级小鼠饲育间改造成以下几部分 :污染区、缓冲区、净化区 ,共计 80ｍ2 。密封饲育间门窗 ,在每个饲育间的进风口安装空气净化器 ,在排风口安装换气扇 ,控制通风量及空气流向 ,在保种…     

链球菌群特异性IHA的建立和应用

采用链球菌C、D、E 和R 4 个血清群的参考菌株分别经十二烷基硫酸钠(SDS) 法制备群抗原致敏绵羊红细胞与相应的群特异性兔抗血清进行IHA 试验,均能发生特异性血凝反应,并有良好的重复性。血凝反应能够被致敏用的SDS抗原所抑制。IHA 试验中4 个血清群之间血清学反应与环状沉淀试验的结果一致。用以上两种方法对湖北省8 个疫区猪场共222 份血样群特异性抗体检测结果,二者总符合率为85 .78 % 。     

寄生虫microRNA的研究方法

对目前寄生虫microRNA(miRNA)的研究方法,包括经典遗传学方法、分子生物学方法、高通量测序与生物信息学方法进行了综述,分析了各种研究方法的优缺点和未来的研究趋势,旨在为进一步研究寄生虫miRNA提供参考.     

新疆叶城县驴胃肠道寄生虫感染情况的调查

为了解塔里木盆地驴胃肠道寄生虫的感染情况,2011年7月下旬至9月中旬,在驴屠宰车间随机选取60头驴,应用系统剖检法对其胃肠道寄生虫的感染情况进行了调查,依据形态学鉴定虫体种类。结果显示,胃肠道寄生虫的感染率为100%,均为混合感染,感染2种寄生虫的驴占5%,感染3种以上寄生虫的驴占95%;共鉴定出7(亚)科13属28种寄生虫,其中圆线属占100%,杯环属占71.7%,盅口属占65.0%,胃蝇属占53.3%,冠环属占40.0%,柔线属占28.3%,杯冠属占21.7%,副蛔属占16.7%,三齿属占13.3%,尖尾属占8.3%,普氏属占3.3%,毛圆属占1.6%,裸头属占1.6%。建议养殖者提高管理水平,相关部门也应重视对驴进行消化道线虫和胃蝇的驱虫工作。     

Ⅰ群禽腺病毒抗体间接hexon-ELISA检测方法的建立

为建立一种检测Ⅰ群禽腺病毒(FAVⅠ)抗体的间接ELISA方法,以FAVⅠhexon重组蛋白作为包被抗原,优化反应条件,建立了FAVⅠ抗体间接hexon-ELISA检测方法。抗原最佳包被浓度为10.0μg/mL,最适包被条件为37℃2h加4℃过夜;最佳封闭液为50g/L脱脂乳;血清最佳稀释度为1∶100,最佳作用时间为75min;酶标二抗最佳工作浓度为1∶2 000,最佳作用时间为45min;hexon-ELISA阴性、阳性临界值为0.379。用建立的hexon-ELISA方法检测100份鸡血清样品,阳性率为45%。结果表明,建立的hexon-ELISA方法简便、快捷,可大批量检测,具有良好的特异性、敏感性和重复性,适用于FAVⅠ的诊断、抗体水平监测及流行病学调查。     

禽白血病病毒K亚群RT-LAMP检测方法的建立

根据Gen Bank数据库中禽白血病病毒(ALV)K亚群特异性的gp85基因序列,设计了特异性检测ALV K亚群(ALV-K)的RT-LAMP引物。对内、外引物浓度组合和反应温度进行优化,建立了ALV-K的RT-LAMP检测方法。特异性试验结果显示,本方法只对ALV-K进行特异性扩增,而对禽白血病的其他亚群以及NDV、REV、AIV、MDV、IBV等常见禽病病原未见扩增。敏感性试验表明,本方法最低能够检测到3.4×104copies/L的质粒。     

分泌抗布氏锥虫群共同抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用DEAE-纤维素分离的布氏锥虫伊氏亚种JG克隆株虫体按Segura 氏法制备抗原,常规免疫BALB/c鼠、融合、筛选和克隆。筛选时除使用免疫抗原外,还使用按同法制备的我国不同地区分离的3株布氏锥虫伊氏亚种(JX、ZJ、GY株),1个布氏锥虫马媾疫亚种虫株和培养的1株布氏锥虫指名亚种发育前期型虫体的抗原,以及泰氏锥虫和弓形虫抗原。共获得8个杂交瘤细胞株(4A_(11)、2D_6、5C_8、2E_3、1H_8、1C_9、1F_(11)、4F_6。它们分泌的单克隆抗体与泰氏锥虫、弓形虫抗原均无反应。4A_(11)、2D_6在ELISA和间接免疫荧光试验中只与免疫克隆株抗原反应。其余6株在ELISA中不仅与免疫株抗原反应,而且与其他锥虫虫株抗原呈明显交叉反应,免疫荧光试验则全部阴性。在ID试验中,1C_9、1F_(11)腹水与上述6种抗原呈现明显沉淀线,另6株则均无反应。4A_(11)和2D_6是针对伊氏锥虫群JG克隆株特异抗原,而5C_8、2E_3、1H_8、1C_9、1F_(11)、4F_6则是抗布氏锥虫群共同抗原。     

Ⅰ群禽腺病毒环介导等温扩增检测方法的建立

根据Ⅰ群禽腺病毒Hexon基因保守区序列,设计了一套特异性环介导等温扩增(LAMP)引物,建立了一种适用于Ⅰ群禽腺病毒的LAMP快速检测方法。经检测,该方法的敏感性可达1×101copies/μL;对Ⅰ群禽腺病毒12个血清型的检测结果均为阳性,而对产蛋下降综合征病毒(EDSV)、禽呼肠孤病毒(ARV)、禽传染性法氏囊病病毒(IBDV)和禽传染性支气管炎病毒(IBV)的检测结果均为阴性;分别用建立的LAMP方法与常规PCR方法对24份临床疑似样品进行检测,结果检出阳性率分别为58.3%和37.5%。表明建立的LAMP方法简便、快速、灵敏、特异性高,可用于Ⅰ群禽腺病毒感染的快速诊断。     

中国清洁发展的新机遇

美国清洁技术产业投资集团中国区首席代表刘晓雨谈：从数据看中国的清洁技术市场清洁技术是一个非常宽泛的名词,包括新能源方向、能源储存方向、电网技术、电动车技术、电池技术等等一系列对环境没有污染、对生态没有破坏的高新技术。对于中国来说,清洁技术市场有没有机遇？     

I群禽腺病毒SYBR Green Ⅰ荧光PCR检测方法的建立

根据GenBank中Ⅰ群禽腺病毒六邻体基因的保守序列设计了1对引物,建立了检测Ⅰ群禽腺病毒12个血清型的SYBR GreenⅠ荧光PCR方法.用Ⅰ群禽腺病毒阳性样品进行了特异性、敏感性和重复性试验.结果显示,该方法可检测到每个反应相当于1×102个拷贝的标准品DNA,与鸡减蛋综合征病毒、禽呼肠孤病毒、传染性腔上囊炎病毒和传染性支气管炎病毒等非Ⅰ群禽腺病毒不发生交叉反应,具有良好的重复性.对保存的3份Ⅰ群禽腺病毒的细胞培养物进行荧光定量PCR检测,结果都为阳性,检测的病毒含量为1×106～1×108拷贝/μL.表明,建立的实时荧光定量PCR具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点,可用于临床上Ⅰ群禽腺病毒感染的检测.     

PrP基因在金黄地鼠淋巴和外周组织中表达水平的动态检测

利用实时荧光定量RT-PCR技术,构建了标准重组质粒,制备了标准曲线,对不同年龄金黄地鼠腹股沟浅淋巴结、脾、心、肝、肺和肾提取总RNA,反转录后进行PrP基因的表达定量。结果发现,淋巴组织呈现高的表达量,外周组织的表达量比较低;不同组织在不同年龄出现表达高峰。     

氟苯尼考对鲫鱼CYP2E1活性影响的药代动力学评价

采用以氯唑沙宗为底物探针的药代动力学方法研究氟苯尼考对鲫鱼细胞色素P450 2E1活性的影响。试验组鲫鱼每日经口给予氟苯尼考100 mg/kg(按体重给药,下同),连续5 d后,与对照组鲫鱼同时一次性腹腔注射氯唑沙宗10 mg/kg,用高效液相色谱法测定氯唑沙宗在鲫鱼体内不同时间点的血药浓度,并计算药代动力学参数。结果表明,氯唑沙宗在两组鲫鱼体内代谢的药时数据均符合二室模型;与对照组相比,试验组氯唑沙宗的半衰期增加了5倍(P<0.01),药时曲线下面积增加了3.3倍(P<0.01),总清除率减少了83.8%(P<0.01)。提示,氟苯尼考对鲫鱼CYP2E1具有显著的抑制作用。其他药物与氟苯尼考合用时,其有效性和安全性可能会受到影响。     

伊维菌素干混悬剂对绵羊寄生虫的驱杀效果与安全性研究

选择1.5~2.0岁自然感染线虫和外寄生虫绵羊150只,分别按体重0.1、0.2、0.3mg/kg剂量口服伊维菌素干混悬剂,同时设口服伊维菌素片剂对照。结果显示,口服伊维菌素干混悬剂0.2、0.3 mg/kg组绵羊的消化道线虫虫卵转阴率分别为93.3%和100%,减少率分别为99.2%和100%;原圆科线虫幼虫转阴率分别为90.0%和100%,减少率分别为94.5%和100%;平均驱虫率分别为98.4%和99.9%;绵羊颚虱、绵羊足颚虱全部被杀死,羊蜱蝇的转阴率分别为83.3%和87.5%。口服0.1 mg/kg组绵羊的线虫虫卵(幼虫)转阴率、减少率、驱虫率均次于0.2、0.3 mg/kg剂量组,对绵羊颚虱、羊蜱蝇的杀虫率较低。绵羊口服0.5 mg/kg伊维菌素干混悬剂未出现明显异常反应。表明伊维菌素干混悬剂与片剂有同等的驱虫效果与安全性。     

DNA条形码技术在兽医寄生虫学研究中的应用

阐述了DNA条形码的概念、DNA条形码基因的筛选方法、DNA条形码的优势与劣势和分析方法,概述了近几年DNA条形码在兽医寄生虫方面的应用情况,旨在引起广大读者对该技术的关注。     

鲫鱼ghrelin基因的克隆和生物信息学分析

从鲫鱼的肠道内提取总RNA,运用RT-PCR扩增ghrelin基因并测序,用生物信息学软件预测其结构,并构建系统进化树,探讨了鲫鱼ghrelin基因的生物学功能,为进一步研究该基因对鲫鱼摄食的影响奠定基础。结果显示,获得了长490bp的ghrelin基因(GenBank登录号为HM567312),其序列含有1个312bp的完整开放阅读框,编码103个氨基酸;ghrelin蛋白分子质量为11 519.48u,等电点为5.20,半衰期为1.20h,不稳定系数为31.29,总平均亲水性为0.727,疏水性为-2.900～2.856;1～26位氨基酸可能是信号肽序列;在ghrelin的分子序列中存在44处α螺旋富集区域,8处β折叠区域,集中于成熟肽部分,有43处无规则卷曲。系统进化树分析显示鲫鱼ghrelin基因与金鱼的进化距离最近。     

寄生虫microRNA研究的新进展

综述了国内外寄生蠕虫(曼氏血吸虫、日本血吸虫、华支睾吸虫、旋毛虫、广州管圆线虫、细粒棘球绦虫)、原虫(蓝氏贾第鞭毛虫、阴道毛滴虫)及节肢动物(伊蚊和微小牛蜱)microRNA研究的最新进展,展望了寄生虫microRNA研究的前景,以期为寄生虫病防治药物的研制和开发提供参考。     

寄生虫谷胱甘肽转移酶的研究进展

谷胱甘肽转移酶(glutathione S-transferase,GST)是由多基因编码、具有多种功能的超基因家族酶,是细胞内转运的"通用"载体蛋白.哺乳动物的GST可调控细胞增殖和死亡信号通路,具有参与运输、新陈代谢和生理反应等的能力.已有研究表明,多种寄生虫的GST参与虫体的生命活动.综述了有关寄生虫GST的研究...     

试析独联体国家间多边支付结算体系的构建

进入21世纪以来,独联体经济一体化中仍然存在非一体化趋势。独联体国家间现行的双边结算体系在很大程度上阻碍了独联体经济、贸易一体化的进一步发展。改革和完善现行支付结算体系,建立多边结算体系不仅是必要的,而且也是可行的。     

新城疫病毒cDNA文库的构建研究

本文报道了用人工合成的28聚寡核苷酸为“引物”,以强毒株新城疫 病毒(NDV)基因组PNA为模板,在逆转录酶作用下成功地合成了NDV- cDNA。后者经琼脂糖凝胶电泳观察,其大小约为0.5～14kb。从凝胶上收集 大于1.0kb以上的cDNA,用Hpa Ⅰ对其进行限制性酶切,然后将酶切片段克隆到pBR322的ScaI位点上,得到的克隆产物即为构建的NDV-cDNA文库。经用少量文库转化E.Coli HB101,得到氨苄青霉素敏感而四环素抗性的转化菌落(Amp基因因外源DNA的插入而失活)。从随机挑出的5个转化菌株中提取重组质粒,经琼脂糖凝胶电泳检测,其插入片段的大小分别为0.8～3.0kb不等。说明所构建的NDV-cDNA文库有效。