佐剂及其在基因免疫研究中的应用

论述了免疫佐剂的作用机理及细胞因子、CpGDNA、化学佐剂、共刺激信号分子、化学因子、黏附分子等佐剂在基因疫苗中的应用概况,并对免疫佐剂在基因疫苗中的应用前景进行了展望。     

猪瘟病毒E2囊膜糖蛋白在昆虫细胞中的分泌表达与免疫特性研究

以猪瘟病毒石门株E2囊膜糖蛋白基因序列为基础,构建了3种重组杆状病毒rAc-E2、rAc-E2oKm和rAc-HE2oKm。Western-blot和间接免疫荧光试验结果显示,这3种重组杆状病毒均可正确表达重组E2蛋白,与E2蛋白和His的单克隆抗体均有良好的抗原反应特性,其中rAc-HE2oKm可分泌表达重组E2蛋白,可形成病毒样颗粒,可诱导免疫仔猪产生高水平抗体和中和抗体,免疫效果与猪瘟活疫苗相当,为猪瘟病毒E2蛋白亚单位疫苗研究奠定了重要基础。     

动物针灸免疫研究现状

近年来,免疫学已成为生物学和医学的最重要的基础学科之一。由于现代免疫学的飞速发展,新的免疫学分支不断涌现。针灸在免疫方面的研究,不仅在人体上,同时在动物机体上进行了大量的实验研究。实验证明,针灸对机体特异性和非特异性免疫均能产生影响。更令人感兴趣的是现代免疫学理论和祖国医学理论关于抗病机理方面,有不少一致的地方。这就是探讨兽医针灸治病机理,对于沟通中西兽医理论,开拓临床新领域,提供了理论根据。本文仅就国内多年来发表的有动物针灸免疫研究资料综述如后。     

乳牛乳腺炎多联苗免疫母鼠的乳腺抗感染试验研究

用泌乳母鼠乳腺作疾病模型,研究了乳牛乳腺炎多联苗对乳腺组织抗金黄色葡萄球菌感染的免疫保护作用.试验发现,将金黄色葡萄球菌(84184)接种于母鼠乳腺内,可使乳腺出现较为明显的急性炎症,在攻菌后24、36 h免疫组的乳腺发病率均明显低于对照组;取乳腺组织匀浆后进行细菌计数,免疫组攻菌后24 h的细菌数与攻菌细菌数接近,而对照组则比攻菌细菌数明显增多(P＜0.01).攻菌后36 h两个组的细菌数均比攻菌数增加,对照组增加更为明显(P＜0.05);组织学检查可见,免疫组乳腺的上皮组织病变程度比对照组明显轻微,而其乳淋巴组织则比对照组表现出更为强烈的免疫反应.结果表明,多联苗全身免疫泌乳母鼠后可显著增强乳腺局部的抗感染能力,延缓乳腺组织的病变进程.     

吕氏泰勒虫TlSP基因多态性免疫区在毕赤酵母中的高效分泌表达

为研制具有完整抗原性和天然结构的吕氏泰勒虫表面蛋白TlSP(Theileria luwenshuni surface protein),采用RT-PCR方法从吕氏泰勒虫裂殖子总RNA反转录获得TlSP基因的c DNA序列,将其多态性免疫区域克隆至毕赤酵母表达载体p PIC9K,构建重组质粒p PIC9K-TlSP。p PIC9K-TlSP经SalⅠ酶切线性化后,电转化导入毕赤酵母菌株GS115和KM71中,经遗传霉素G-418筛选后得到高拷贝菌株,对PCR鉴定为阳性的菌株进行甲醇诱导表达。对GS115和KM71两种菌株表达重组蛋白TlSP的效果进行评估,并对TlSP的反应原性进行了分析。结果表明,反转录获得的TlSP基因的c DNA序列长为888 bp,其中多态性免疫区域长为552 bp;筛选得到抗遗传霉素G-418(4.0 mg/m L)的GS115菌株5株,KM71菌株7株,经PCR鉴定为阳性的2种菌株均成功表达了分泌型重组蛋白TlSP,GS115菌株的蛋白表达效果较好;重组蛋白TlSP能与吕氏泰勒虫、尤氏泰勒虫、绵羊泰勒虫及环形泰勒虫阳性血清发生反应,而与巴贝斯虫、绵羊无浆体阳性血清无反应。本研究为深入研究TlSP蛋白在羊泰勒虫病免疫学诊断和亚单位疫苗中的应用奠定了基础。     

弓形虫病免疫的研究——弓形虫排泄分泌抗原对猪的免疫效果

弓形虫病免疫的研究——弓形虫排泄分泌抗原对猪的免疫效果张德林杜重波李惠萍马军武（中国农业科学院兰州兽医研究所７３００４６）弓形虫（Ｔｏｘｏｐｌａｍａｇｏｎｄｉ）是人畜弓形虫病（Ｔｏｘｏｐｌａｓ－ｍｏｓｉｓ）的病原，该病呈世界性分布和流行，对人类健康和...     

口蹄疫O-A-AsiaⅠ型三价灭活疫苗免疫效力和最小免疫剂量的研究

为确定口蹄疫O-A-AsiaⅠ型三价灭活疫苗的安全性和免疫效果,按OIE口蹄疫疫苗效检标准和我国口蹄疫灭活疫苗质量标准,对实验室条件下制备的4批疫苗进行了安全性试验、免疫效力试验、免疫持续期试验、疫苗保存期试验和最小免疫剂量试验。结果显示,4批疫苗均对靶动物和实验动物安全,无任何毒副反应;对O、A、AsiaⅠ型口蹄疫的平均免疫效力分别为4.73、6.84和8.10 PD50/头份;一次接种的有效免疫期达6个月;2~8℃下的疫苗保存期为12个月;适宜的免疫剂量为,6月龄以上牛每头3.0 mL,6月龄以下牛每头1.5 mL。该疫苗对接种动物安全,免疫效果良好,一次接种可同时预防O、A、AsiaⅠ型3个血清型的口蹄疫。     

不同免疫途径对蛋用鸡分泌型免疫球蛋白A细胞分布的影响

用鸡新城疫弱毒疫苗通过饮水、滴鼻和肌肉注射免疫蛋用鸡，以葡萄球菌Ａ蛋白辣根过氧化酶和兔抗鸡分泌型免疫球蛋白Ａ（ＳＩｇＡ）间接组织化学染色，显示消化道相关淋巴组织（ＧＡＬＴ）和呼吸道相关淋巴组织（ＲＡＬＴ）中ＳＩｇＡ细胞的生成及分布。结果表明，滴鼻和饮水免疫组蛋用鸡ＧＡＬＴ和ＲＡＬＴ中产生ＳＩｇＡ细胞较早且多，并于首免后２８ｄ达最高峰，一直持续到首免后５６ｄ。肌肉注射组蛋用鸡ＳＩｇＡ细胞在各相应部位数量较少，且持续时间较短。     

鸡α干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其抗病毒活性的测定

将克隆的鸡α干扰素(ChIFNα)基因亚克隆至酵母表达载体pPICZα-A中,构建重组质粒pPIC-ChIFNα,线性化后电转化整合到毕赤酵母菌株X-33基因组中,得到阳性菌株。经1%甲醇连续诱导4 d,SDS-PAGE检测结果表明鸡α干扰素在酵母中获得了分泌型表达,表达产物分子质量约为18 ku。细胞病变抑制法检测其效价为1×10~(7.69)U/mL;在鸡胚中能有效抑制禽流感病毒H9N2的增殖。针对Ⅰ群4型禽腺病毒YBAV-4株强毒的动物攻毒保护试验结果显示,表达的蛋白具有较好的抗病毒活性。     

分泌型表达EDA-EmIMP1的重组枯草芽胞杆菌的构建及其免疫原性研究

枯草芽胞杆菌有着异源蛋白表达系统,纤维连接蛋白外域A(EDA)是一种能够提高相关蛋白的抗原性的佐剂,为了增强巨型艾美耳球虫的免疫相关蛋白1(IMP1)的抗原性,笔者对枯草芽胞杆菌分泌表达载体作为EDA分子佐剂重组亚单位疫苗的递呈载体的功能进行了研究,构建质粒pHT43-EDA-EmIMP1和pHT43-EmIMP1,将获得的重组质粒转化到枯草芽胞杆菌感受态中。将该重组菌对鸡饲喂,进行免疫学试验并做免疫效果评价。结果显示,该重组枯草芽胞杆菌可以成功表达目的蛋白,蛋白大小为70 ku。ELISA检测EDA组的效价最高,其滴度在3 200左右;三免EDA组的IFN-γ浓度显著高于其他组(P0.05);三免EDA组和EmIMP1组的IL-12/70浓度显著高于PBS组(P0.05);CD4+T细胞群的检测显示,EDA组的CD4+T细胞群比例显著高于枯草芽胞杆菌组和PBS组(P0.05);EDA组、枯草芽胞杆菌组和EmIMP1组的卵囊排出量都显著低于攻虫组(P0.05);病变计分可以看出,EDA组对肠道保护效果显著优于除空白组外的其他组(P0.05)。以上各项免疫学指标表明,枯草芽胞杆菌分泌型表达载体作为EmIMP1的抗原递呈载体可以有效提高免疫原性,其中EDA佐剂组的免疫效果最好。     

寄生虫免疫——Ⅰ.寄生虫免疫研究的必要性及其免疫机理

(一)寄生虫免疫研究的必要性 自六十午代对免疫学赋予新的概念以来,免疫学研究有了很大的发展,目前已发展成为一个新的独立学科,其许多分支学科也应运而生,如免疫病理学、免疫生理学、免疫遗传学、免疫生物学、免疫血液学、免疫产科学、免疫化学、放射免疫学以及肿瘤免疫学等。但是,在人们争相探寻新的免疫理论、揭示新的免疫现象时,却忽视了寄生虫的免疫研究,使它仍处于落后的状态。究其故,可能是由于寄生虫病原体太大,不能产生足够的免疫保护,或因寄生虫有较多的低毒、广谱、廉价的驱虫药,治疗比较方便,从而使得免疫学家们很少去考虑和从事寄生虫的免疫研究工作。     

马外周血Ir-β-Ep的测定及其在针刺免疫穴位筛选中的应用研究

对25匹健康马在大椎穴、伏免穴,后海穴注射马传贫驴白细胞弱毒疫苗后用RIA法测试外周血中Ir-β-Ep(β-内啡肽免疫活性物质)的含量变化,其灵敏度为10pg,直线化标准曲线为Y=1.4x 4.2,Ir-β-Ep的含量与国外报道的其他动物的相似。提示:该方法可用于检测马体内Ir-β-Ep的含量变化。     

番鸭IFN-α基因在毕赤酵母中的分泌表达

利用PCR从质粒pGEM TEasy/MDIFN扩增出番鸭IFN α基因cDNA ,将其插入到含AOX1启动子和α分泌信号肽序列的Pichiapastoris表达载体pPICZαC 3.6kb中 ,测序 ,待其结果正确后 ,将重组质粒转化至酵母X 33,PCR法筛选出Mut+ 表型的转化子置于BMMY培养基中培养。用 5mL/L甲醇诱导表达 4d后 ,经SDS PAGE分析可见 1条约 2 5ku的清晰蛋白条带。试验结果表明pPICZαC3.6kb/MDIFN质粒构建成功 ,并且实现重组酵母高效分泌表达     

浅谈初乳在幼畜免疫中的作用

众所周知,新生仔畜的免疫功能不够完善。因此,初生仔畜在其从母体分娩后的一段时间内主要由母体被动获得一定的抗体以确保其正常的生命活动和抗御某些疾病是不可少的。这种被动的抗体即母源抗体,主要是仔畜生后由母畜的初乳中所获取的。初乳的获得与否、初乳的质和量以及初乳获取的时间都直接影响着仔畜的生命活动。这一浅鲜的知识,尽管有所了解,但在实际生产中忽视这种现象仍十分严重。由于初生仔畜延误了初乳的哺给或量不足时,则直接影响仔畜的健康并易使其罹患细菌性的感染。 (一)胎儿和新生仔畜的免疫机理 胎儿期的免疫系统虽不健全,但也可以产生一定的免疫应答。已知72日龄的胎猪可以对细小病毒产生抗体,主要是IgM,74日龄的胎猪可产生抗绵羊红细胞抗体,在其胚胎的     

放射性同位素示踪技术在寄生虫免疫和治疗研究上的应用

为什么寄生虫不像细菌或病毒那样,通常都能诱发高度有效的免疫应答?寄生虫在致敏的宿主体内是如何得以存活的?为什么宿主对侵入的或已经存在体内的寄生虫不能产生有效的保护性免疫?对于这些问题,国内外学者以很大的兴趣开展了寄生虫与宿主相互关系的研究,而同位素技术为之提供了广泛而有效的手段。由于接触寄生虫的抗原物质而产生的免疫反应过程具有明显的规律性,而从抗原或寄生虫开始侵入宿主之后到血液中出现抗体之前是产生免疫的活跃时期,因此,如果应用同位素标记宿主细胞成份的前体等方法,就有可能查明抗体形成和免疫应答的规律。     

貂圆环病毒Cap蛋白在毕赤酵母中的分泌表达

为研制水貂圆环病毒(MiCV)亚单位疫苗或建立相关诊断技术,利用常规PCR扩增出优化后的貂圆环病毒Cap蛋白基因序列,并插入毕赤酵母分泌型表达载体pPICZαA中。获得的重组表达载体pPICZαA-Cap以SacⅠ进行线性化后,经电击转化整合入毕赤酵母GS115菌株中,用含Zeocin的YPD平板筛选出重组子pPICZαA-Cap-GS115。PCR、SDS-PAGE和Western-blot分析鉴定的结果显示,貂圆环病毒Cap蛋白成功在毕赤酵母中分泌表达。     

猪圆环病毒3型研究现状

作为猪的新发传染病,猪圆环病毒3型(porcine circovirus type 3,PCV3)介导的疾病症候群严重危害养猪业的健康发展.鉴于PCV3在世界范围内的流行且缺乏有效的防控措施,本文对该病毒的遗传和进化特性、流行特征、检测方法、致病机制等进行了详细的分析,对今后的研究重点进行了展望,以期为深入研究该病的发...     

一种新发病毒病在欧洲反刍动物中的流行现状及其研究进展

施马伦贝格病是自2011年8月以来在欧洲牛、绵羊和山羊等动物中发生和流行的一种危害严重的新发病毒性传染病,已对欧洲的经济特别是养殖业造成了巨大的影响。本文从疫病发生和流行情况、病原学、流行病学和应对措施等几个方面对其进行了介绍,旨在引起我国政府和人医、兽医及其海关检疫机构的高度重视,加强相关技术的储备,做好海关、边境地区对施马伦贝格病的检疫和防范。     

斑点试验在寄生虫病免疫诊断学中的应用

Hawkes等(1982)根据硝基纤维素纸等固相载体具有较强吸附蛋白质的能力的特点,建立了斑点免疫结合试验(以下简称斑点试验),用于筛选单光隆抗体具有很高的敏感性。由于这种方法不需任何特殊的仪器、电力,不需要严格控制温度;仅需要少量的全血或血清,试验成本低,容易推广,能眼观快速判定结果,定结果快,因而在其建立后的几年中就在生物学、医学和兽医学等领域得到了广泛的应用。