匹拉米洞与联苯胺在血痕预实验中的灵敏性及DNA损伤检测研究

目的血液痕迹是暴力犯罪现场最易遗留的一类痕迹,是法医学检验中最常见和最重要的一类物证。血痕预实验是利用化学检测的方法从现场大量分布的可疑斑迹中初步筛选可能是血痕的重要方法,是法医学鉴定的重要前提。本文比较匹拉米洞法和联苯胺法的灵敏度、对DNA-STR检验的影响以及对细胞核的损伤情况,以探索匹拉米洞法应用于血痕预实验的可行性。方法对新鲜全血进行梯度稀释,观察比较检测灵敏度;利用Chelex-100提取匹拉米洞、联苯胺等试剂预检后的血痕样本中的DNA,应用PCR-STR技术及荧光检测技术检测样本的STR分型,观察STR分型结果,比较两种方法对后续DNA-STR检验的影响;在细胞培养液中加入联苯胺、匹拉米洞,应用彗星电泳技术评价细胞核DNA的损伤。结果匹拉米洞法可检测的最低血红蛋白浓度为25μg/m L,灵敏度低于联苯胺法(5μg/m L);DNA-STR有效分型率为96.67%,远高于联苯胺法(18.09%);联苯胺组彗星尾长为52.40±9.21、尾距为43.29±4.85、尾部DNA含量为16.25±2.35,显著高于匹拉米洞组。结论匹拉米洞法可用于血痕预实验,对血痕中DNA的损伤、对DNA-STR分型的影响均低于联苯胺法,可替代联苯胺作为新的法医学血痕预实验方法。     

联苯胺试验对血痕DNA检验的影响

目的探讨联苯胺试验及相关试剂对血痕DNA检验的影响。方法制作含1μL静脉血的滤纸血痕970份,其中10份为对照样本,960份经联苯胺试验及相关试剂分别处理后,采用Chelex-100法和硅珠法提取DNA,Amp F詛STR~(TM)Identifiler~(TM)Plus PCR扩增试剂盒进行复合扩增,对比各组STR分型结果。结果联苯胺试验后立即提取DNA,硅珠法的STR基因座检出数为(3.80±1.34)个,而Chelex-100法均未获得STR分型结果;联苯胺试验后干燥处理,硅珠法有13例(21.7%)获得全部STR基因座分型结果,且STR基因座检出数[(12.90±1.49)个]远高于Chelex-100法[(4.70±1.96)个](P0.05);加入冰醋酸后立即提取DNA,硅珠法的STR基因座检出数为(9.40±2.09)个,而Chelex-100法均未获得STR分型结果;只加冰醋酸后干燥处理以及只加四甲基联苯胺乙醇饱和溶液或3%过氧化氢溶液,两种方法均获得完整15个STR基因座分型结果。结论联苯胺试验对血痕的后续DNA检验有很大的影响,Chelex-100法不适合联苯胺试验后血痕的DNA检验,联苯胺试验后干燥处理及采用硅珠纯化的方法可有效提升联苯胺试验后血痕的STR基因座检出数。     

联苯胺预试验处理血痕后样本DNA定量的研究

目的探讨联苯胺血痕预试验处理后样本DNA含量的变化及对STR分型检测的影响。方法选取10名无关个体EDTA抗凝血液制成滤纸血痕,保存干燥时间分0．5h、1h、3h、6h、12h、24h六个实验组,并采用磁珠提取法、QIAcubeDNA提取纯化法、chelex-100提取法提取样本DNA,应用RT-PCR定量技术检测样本DNA含量,同时应用PCR-STR技术和Idfiler-plus试剂盒检测相应样本STR分型。结果联苯胺血痕预试验后处理样本,随保存时间的延长,其样本DNA含量显示逐渐降低的趋势。回归线性对数分析显示,磁珠提取法：Y=-0．40871n（x）＋0．7044R0—0．7633;QIAcubeDNA提取纯化法：Y=-0．23931n（x）＋0．4764R0—0．8715;chelex-100提取法：Y=-0．11781n（x）＋0．2302R2=0．9571。不同DNA提取方法对同一保存时间的联苯胺血痕预试验试剂处理样本DNA含量间差异有极显著性,P〈O．01。结论联苯胺血痕预试验后对后续STR分型影响较大,联苯胺血痕预实验后的血痕不能继续进行STR分型检测。     

四甲基联苯胺重复显现血手印的影响因素

近年来，四甲基联苯胺显现血手印的方法大量地用于犯罪现场遗留血手印的显现。由于受到四甲基联苯胺和过氧化氢配制的浓度过浓或过淡，以及照相取景角度，配光方向，曝光量和反应形成的四甲基联苯胺蓝易褪色等因素影响，有时会给手印的检验鉴定工作带来了一定的难度。笔者通过用四甲基联苯胺对血手印重复显现，较好解决了实际工作中遇到的具体的问题，介绍如下。１原理新鲜的血手印经四甲基联苯胺显现、褪色（四甲基联苯胺蓝易褪色）之后，形成陈旧的血手印。由于陈旧的血手印的血液中的过氧化酶失去活性，不能参与反应，但在血红蛋白分子内…     

5种免提取试剂盒检验滤纸血痕结果的比较

目的探讨5种免提取试剂盒对滤纸血痕样本检验的效果。方法陈旧滤纸血痕(存放时间12～14个月)及新鲜滤纸血痕(存放时间小于1个月)各920份,分别随机分为5组。应用AGCU 17+1、Goldeneye 20A、Powerplex16HS、Identifiler Plus、Identifiler Direct 5种免提取试剂盒进行检验,对比各组检验结果。结果陈旧滤纸血痕5种试剂盒的检验成功率为98.91%～100%,各组间无差异(P>0.05);新鲜滤纸血痕,Identifiler Plus和Identifiler Direct试剂盒检验成功率高于AGCU17+1、Goldeneye 20A及Powerplex 16HS试剂盒(P<0.01);将样本做陈旧化处理后再用成功率较低的3种试剂盒进行检验,成功率分别升至100%、99.46%、99.46%;Identifiler Plus试剂盒扩增循环27次效果优于28次。结论本文5种试剂盒均可用于滤纸血痕的直接扩增检验,但使用AGCU17+1、Goldeneye 20A及Powerplex 16HS试剂盒需将新鲜血痕做陈旧化处理;Identifiler Plus试剂盒需将循环次数降为27次。     

苯酚4-氨基安替比林法做血痕预试验的改进

笔者根据用苯酚4-氨基安替比林法做血痕预试验的研究报告,进行试验,结果表明此法确实在反应效果上能够与联苯胺试验相近,而所用药品成本相对较低,配制、操作方法简便易行,本法尤其适用于新鲜血痕,由于血红蛋白易溶于所用试剂,故阳性反应红色较易观察,试验效果较好。陈旧性血痕,血红蛋白难以溶于所用试剂中,而其本身颜色与阳性反应颜色相近,因此不易观察,相对而言联苯胺试验阳性反应颜色为翠蓝色,与检材颜色反差明显,但因其具有致癌性,许多国家已     

尼龙植绒拭子与棉拭子血痕DNA分型效果比较

目的探讨尼龙植绒拭子与棉拭子血痕DNA分型检验的效果。方法取抗凝全血用去离子水倍量稀释2、4、8、16、32、64、128倍,各取1μL分别滴加于尼龙植绒拭子与棉拭子头部,干燥制成血痕,应用Chelex-100提取每个浓度两种材质拭子的血痕样本DNA,采用Identifiler Plus试剂盒进行复合扩增,3500XL型遗传分析仪进行检测,对比各组DNA分型检验成功率。结果 1检验成功率:稀释16~64倍尼龙植绒拭子血痕均明显高于相同稀释倍数的棉拭子血痕(P0.001);其余浓度血痕两种材质拭子的检验成功率无明显差异;2分型图谱峰高和均衡性:不同浓度尼龙植绒拭子血痕峰高多为棉拭子血痕的2倍以上,16~64倍稀释血痕尼龙植绒拭子均衡性更好。结论尼龙植绒血痕拭子的检验效果优于棉拭子血痕,在微量血痕检验时优势更明显。     

补妆法提取血指印

1995年6月,笔者检验了一直径3.6cm,长52cm的一截被黄泥水浸透的木棍.木棍系在一凶杀案嫌疑人家中提取.在距木棍末端5cm有一片7cm×3.14cm×3.6cm的血痕,血痕上有一枚血液加层指印.木棍上血痕和木棍颜色基本一致,因该地区6月份空气较     

血痕预试验的改进

在法医物证检验中鉴定血痕首先应进行预试验,从而确定下一步检验.实验检查血痕一直沿用血红蛋白(以下缩写为Hb)有过氧化酶活性的原理来进行检验的.但是现场提取的检材中往往含有植物氧化酶、化学触酶或其它氧化剂,它们同样具有过氧化酶的活性,对血痕预试验有强烈的干扰作用,给血痕的认定带来了很大困难.为解决这一     

DNA指纹在一起杀人案中的应用

<正> 本文报导的是利用 DNA 指纹术对一起刑事案件鉴定的情况。案情:1988年2月,北京的王某被杀。经血型检验,死者王某、嫌疑人马某及马某大衣上血痕的血型均为 A 型;经 EsD检验,王某的血和马某大衣上的血痕均为2-1型,马某的血为1-1型。此结果,只能说明大衣上的血痕不是马某的血,但无法确定该血痕是     

反向间接血凝(RPHA)法应用在血痕检验中的研究

血痕检验目前采用的方法有肉眼观察、预试验、确证试验、种属鉴别、血型检查及出血部位检验等.用免疫法制备抗人血红蛋白(Hb)的抗血清进行人血液的法医学种属鉴别已沿用很久,但国内还未见到RPHA法应用在血痕检验中的报导.本实验室建立了该法检测人粪便隐血,并对模拟血痕的检测也作了研究.认为本法对微量血痕     

微量血痕纤维用于连续检验MN和ABO血型的报告

<正> 本文报告用连续检验血的方法检测100例保存1～9年的血瘳,并对50例保存3年的血痕进行盲测,证明用同一根0.6cm 长的血痕纤维检验完 MN 血型后,尚能准确检验出 ABO 血型。     

毛干mtDNA单倍型母系家系排查法侦破命案

笔者在实践工作中遇到利用受害者指尖粘附微量毛干线粒体DNA(m tDNA)测序的多态信息,最终成功侦破一起命案,现报道如下。1材料与方法1.1简要案件及样本DNA的提取2008年9月某市发生一命案,现场提取死者(杨某,女)指尖粘附约1cm长毛干及胸部、膝关节上毛发各1份;杨某丈夫(王某)和杨某血痕,编号1~5。按母系遗传关系排查的杨、金、何、刘姓嫌疑人血痕各1份,编号6~9。参照张纯斌等人[1]的方法提取毛干m tDNA;有机法提取血痕m tDNA。1.2巢式PCR扩增m tDNA高变区I(HVRI)15996-16401区域长片段的PCR扩增,上、下游引物序列为L15996:5-′CTCCAC-CATTAGCACCCAAAGC-3;′H16401:5-′TGTTTCACG-GAGGATGGTG-3′。15μL反应体系包括含镁离子10×PCR缓冲液1.5μL,5mmol/L dNTP1μL,1μmol/L正反向引物各1μL,0·2μL(5U/μL)TaqDNA聚合酶,0·5μLDNA(50ng/μL),余量用水补足。PCR反应条件:95°C变性2m in,94°C变性20s,58°C退火20m in,72°C...     

血痕识凶

"110吗?这里有打斗的痕迹,地上和墙上有血痕。我怀疑这里曾经发生过凶杀案。你们是不是能派人过来查看一下。我现在的位置是……"110报警中心有时会接到这样的报警电话。电话中提到的血痕是法医实践中最常见的生物物证,是法医物证检验的主要对象之一。警方抵达疑似案发现场后,会对血痕进行搜集和检验,首先要确定是否是真的血痕,接着要判断血痕是人留下的还是动物留下的。在确定是人的血痕之后,通过科学的检验方法,可能判断出留下血痕者的真实身份,为侦破刑事案件提供十分有用的线索。     

中国人血清GM2、3、5、21因子分布及血痕GM型检验

<正> 本文介绍了血痕Gm型检验和测定了中国人400名Gm3、5、因子;204名Gm2因子;180名Gm21因子。应用血凝抑制试验方法。     

微量生物物证提取套装在现场微量血痕DNA检验中的应用

目的 探讨微量生物物证提取套装应用于提取现场微量血痕DNA的检验效果.方法 将静脉血制成地面血痕.分别应用微量生物物证提取套装法和普通法提取血痕.分别于恒温摇床放置2、24、48、72、96 h(每组50份)进行血痕DNA检验,对比各组检验结果.结果 恒温摇床上分别放置24、48、72、96 h后,微量生物物证提取套装...     

新鲜血痕样本直接扩增试验条件比较

目的探讨新鲜血痕在不同直接扩增试剂盒的试验条件。方法存放2d内的新鲜血痕FTA卡540份和存放1~3m的陈旧性血痕FTA卡270份,各分别随机均分为3组,每份血痕打3片1.0mm纸片,分别用DNATyperTM15Plus试剂盒、GoldeyeTM20A试剂盒和华夏TM试剂盒在标准条件(说明书条件)、优化条件1(标准条件+1μL DMSO)和优化条件2(标准条件+室温浸泡1h)扩增检验,比较在3种条件下各组STR检验成功率。结果陈旧血痕样本用3种直扩试剂盒,在3种条件下,检验成功率均97.00%,且均高于新鲜血痕。新鲜血痕在标准条件和优化条件1下,成功率为27.22%~31.67%,在优化条件2下,检验成功率相似(97.00%),与标准条件和优化条件1比较,有统计学差异(P0.01)。结论新鲜血痕在加入直接扩增试剂后于室温浸泡1h,可有效提高STR检验成功率。     

5种磁珠检验滤纸血痕自动化工作站检验结果比较

近年来,采用自动化工作站结合磁珠法提取滤纸血痕的DNA,在法庭科学DNA数据库建设中得到广泛应用[1-2]。但由于生产工艺等因素的差异,不同厂家磁珠的DNA提取效率不尽相同。本研究选择常见的5种商品化磁珠,在自动化工作站上对滤纸血痕进行检验,以验证其DNA提取的效率。     

新鲜血痕样本直接扩增试验条件比较

目的探讨新鲜血痕在不同直接扩增试剂盒的试验条件。方法存放2d内的新鲜血痕FTA卡540份和存放1～3m的陈旧性血痕FTA卡270份,各分别随机均分为3组,每份血痕打3片1．0mm纸片,分别用ONATyper^TM15Plus试剂盒、Goldeye^TM20A试剂盒和华夏。”试剂盒在标准条件（说明书条件）、优化条件1（标准条件＋1μLDMSO）和优化条件2（标准条件＋室温浸泡1h）扩增检验,比较在3种条件下各组STR检验成功率。结果陈旧血痕样本用3种直扩试剂盒,在3种条件下,检验成功率均〉97．00％,且均高于新鲜血痕。新鲜血痕在标准条件和优化条件1下,成功率为27．22％～31．67％,在优化条件2下,检验成功率相似（〉97．00％）,与标准条件和优化条件1比较,有统计学差异（P〈0．01）。结论新鲜血痕在加入直接扩增试剂后于室温浸泡1h,可有效提高STR检验成功率。     

红细胞和血痕酸性磷酸酶(EAP)表型及广东人群EAP基因频率的调查

本文采用薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳检测红细胞及血痕酸性磷酸酶表型,并对不同条件下的血痕标本进行检测,发现室温下(15～33℃)保存的110例纱布血痕7周内可全部正确分型,21例磁板血痕9周内均可正确分型;含血量≥5λl 的血痕可被正确检出 EAP 表型;日晒、水洗、发霉等因素可影响血痕 EAP 型的正确检出。同时调查了广东人群的 EAP 表型分布,基因频率为 p~a=0. 2338,p~b=0. 7662,发现 EAP 基因频率分布存在着地区差异。