抗猪瘟高免血清的制造与应用

猪瘟目前尚无特效药物治疗,主要靠注射疫苗预防。若采用被动免疫方法,即注射抗猪瘟高免血清亦能奏效。近年来,我们对新购猪苗使用自制抗猪瘟高免血清作预防及对病猪进行治疗试验,取得了良好效果。现介绍如下。 (一)抗猪瘟高免血清的制造方法 1.动物选择:凡准备在2～3周后屠宰的健肥猪或淘汰的健康母猪均可选用。 2.疫苗:兽医生物药品制造厂出售的猪瘟弱毒疫苗。 3.基础免疫:经健康检查,精神、食欲、体温、运动及粪便正常,体重160市斤以上的猪为合格。用猪瘟疫苗10头剂量(作1:50倍稀释,5毫升)肌注。     

人工接种猪瘟强毒发生病变退化及其原因探讨

猪瘟是兽医工作者熟悉的传染病。但作者作抗猪瘟血清效力试验及参与猪瘟免疫程序试验时,人工接种猪瘟石门系强毒,其死亡猪的病理变化,与文献记载及作者过去从事猪瘟血清效力试验时所观察到的均不一致,病变大为退化。为了探讨其原因,作者选择部分猪瘟病死猪的病变材料进行整理,并提出肤浅的见解,目的是抛砖引玉,引起注意。     

读《抗猪瘟高免血清的制造与应用》后与作者商榷

在《抗猪瘟高免血清的制造与应用》(兽医科技杂志,1984年第7期)一文中,岑德光同志用猪瘟兔化毒作抗原,自制猪瘟高免血清,较生物药品厂用猪瘟石门系强毒作抗原免疫生产高免血清,具有工艺简单、易控制、无散毒、成本低廉等优点。用于猪瘟的早期治疗和紧急预防是非常可取的。但是,作者向读者推荐,对新购仔猪先注射该抗血清,进行被动免疫,隔2～3周再补注猪瘟疫苗。笔者认为不妥,就此与岑德光同志商榷。     

免疫吸附去除猪瘟免疫血清中非相关抗体

当用聚乙二醇沉淀法从猪瘟兔化弱毒牛睾丸细胞培养物上清液制备部分纯化抗原,进行猪瘟免疫检测时,因免疫血清中存在抗牛睾丸细胞和抗牛血清成分的抗体,会产生非相关性反应而 干扰对抗病毒特异性抗体的检测。在血清稀释液中加入牛睾丸细胞培养物抗原可有效地抑制这种非相关抗体引起的反应,保证猪瘟免疫抗体检测的特异性。     

苗原二联血清的效力检验

苗原血清于1972年问世,据称治疗猪瘟、猪丹毒、猪肺疫和仔猪副伤寒的临床疗效可达90％左右。但据有关单位检验,苗原猪瘟血清的效价仅为国家标准血清的1/8左右。有的甚至认为没有保护力。因此,有人对苗原血清的疗效和安全都提出了疑问。我们于1978年进行了苗原二联血清的无菌检验、安全试验和效力检验,现将结果报告如下。 (一)材料和方法 1.1978年4～6月在温江县食品公司屠宰场选择健康肥猪连续制做猪瘟、仔猪副伤寒苗原二联血清三批。试验前健康观察7天,并测其体温,心跳和呼吸,正常者供试。     

应用PPA-ELISA诊断猪瘟

酶联葡萄球菌A蛋白(PPA)作为一种广谱的免疫酶试剂,用于家畜多种传染病和寄生虫病的诊断已收到良好的效果。我们试用PPA-ELISA进行猪瘟诊断,结果令人满意。该试验尚未见报道。 (一)材料 1.固相载体:平底40孔聚苯乙烯微量培养板,系上海塑料三厂产品,用前需经鞣酸处理。 2.抗原:猪瘟石门系强毒系中国兽药监察所提供。 3.猪抗猪瘟高免血清:用猪瘟石门系血清毒制成结晶紫灭活苗作基础免疫健康猪2     

猪瘟荧光抗体的制备及应用

用硫酸铵盐析法从抗猪瘟血清中提取免疫球蛋白 ,应用搅拌法标记荧光素 ,硫酸铵盐析、SephadexG 2 5层析和肝粉吸收三法结合去除标记物之游离荧光素 ,制备猪瘟荧光抗体。经测定 ,标记的荧光抗体工作稀释度为 1∶16～ 1∶32。用标记的荧光抗体诊断猪瘟 ,从 39份可疑病料中检出阳性病例 12份。     

猪瘟病毒石门株与兔化弱毒疫苗株之间抗原差异的单克隆抗体分析

采用间接免疫荧光方法,用19株抗猪瘟病毒单克隆抗体对猪瘟病毒石门株与疫苗株(兔化弱毒株)的抗原性进行分析.结果显示,9株抗猪瘟病毒E2蛋白的单抗中有4株与2株病毒均反应,但反应程度略有差别;9株抗猪瘟病毒Erns蛋白的单抗中只有3株与2株病毒都反应,其他6株在识别石门株与兔化弱毒株之间存在差别;抗猪瘟病毒NS2/3蛋白的单抗只识别弱毒株.表明,抗猪瘟病毒单抗可用于猪瘟病毒石门株与兔化弱毒疫苗株抗原性差异的分析.     

基于重组E2蛋白的猪瘟病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

根据昆虫细胞密码子偏嗜性,对猪瘟病毒E2基因进行密码子优化,并利用昆虫杆状病毒表达系统进行了表达,表达水平约为野生型E2基因的3倍.将表达的重组E2蛋白纯化后作为ELISA包被抗原,建立了一种基于重组E2蛋白的问接ELISA方法,并对此方法的反应条件进行了优化.确定的ELISA最佳条件为抗原包被浓度为2 μg/mL,封闭液为10 g/L聚乙烯醇PBS溶液,被检血清1∶160稀释,辣根过氧化物酶标记的兔抗猪IgG(二抗)1∶5 000稀释.确定的阴性血清临界D450 nm值为0.30,阳性血清临界D450 nm值为0.35.将该ELISA方法与IDEXX公司生产的猪瘟病毒抗体检测试剂盒做相关比较,结果符合率为82.3%.表明,该方法可以用于猪瘟病毒抗体的检测.     

猪瘟间接血凝试验的研究

猪瘟兔化弱毒珠的细胞培养物浓缩纯化后,致敏戊二醛鞣酸处理 的健康绵羊红细胞,制成冻干猪瘟间接血凝诊断液,用以检测血清中的抗猪 瘟抗体效价。经室内外376份免疫猪、45份非免疫猪血清检测结果表明符合 率高达98％。检测猪瘟抗体消长动态的结果证明,接种冻干猪瘟弱毒疫苗后第3～4天出现特异抗体,第15天抗体效价进入高峰期并维持到接种后的第3个月,然后缓慢地下降,于接种后的第11个月消失。该法操作简便,无需特殊仪器设备;特异性强不与其他传染病阳性血清发生交叉凝集;快速,2小时内可判定检测结果;重复性好,不同批次诊断液检测同一血清样品结果一致;保存期长,冻干的诊断液4℃贮存一年半有效。液体诊断液4℃贮存6个月效价不降,37℃存放14天对诊断液质量无影响。适合广大基层现地进行猪瘟弱毒冻干苗免疫猪群的抗体水平和仔猪母源抗体水平监测,以便制定合理的免疫程序,充分发挥疫苗的预防效果,确保养猪业的安生生产。     

用正向间接血凝试验检测猪瘟免疫抗体

为监测本地区猪瘟免疫效果 ,笔者于 2 0 0 1年 8月对广西宜州市和环江县共 790份猪血清进行了猪瘟免疫抗体检测。检测结果表明 ,两地的猪瘟免疫抗体效价较高 ,与实际免疫情况基本相符。1　材料被检血清为在宜州、环江两市 (县 )屠宰场采集的屠宰猪血清 ,共 790份 ;猪瘟正向间接血凝诊断液 (包括阴性、阳性血清和稀释液 )由中国农业科学院兰州兽医研究所生产 ,批号2 0 0 10 5 3 1;96孔 110°Ｖ型医用血凝板、微量移液器、微量振荡器等。2　检测方法和判定标准参照猪瘟正向间接血凝诊断试剂使用说明书 ,被检血清只稀释到第 6孔 ,稀释倍数依次…     

广西部分种猪场猪瘟抗体监测和免疫效果分析

猪瘟是严重威胁养猪业发展的重要疫病之一 ,多年来 ,广西壮族自治区各级兽医业务部门一直把猪瘟的免疫作为全区畜禽疫病防制的重点 ,使该地区猪瘟的暴发流行基本得到控制。但零星发生的猪瘟特别是免疫种猪的隐性感染带毒现象仍然存在 ,给养猪业造成严重的经济损失。为摸清广西种猪场猪瘟免疫的确切效果 ,笔者在 1999～ 2 0 0 0年对全区内部分种猪场进行了猪瘟抗体监测。1　材料与方法1.1　血清样品　为采自全区 2 8个种猪场猪瘟免疫期内的猪血清 ,共 10 65份 ,其中种母猪 482份、后备母猪 2 0 6份、种公猪 84份、断奶仔猪 2 93份。1.2　诊断…     

猪瘟免疫荧光细胞中和试验的研究

笔者使用Thiverval株猪瘟弱毒,进行HC—IFCNT的初步研究。证明了该株猪瘟病毒(HCV)作为试验病毒的可行性,及其中和物接种细胞后培养温度提高到37℃,缩短终判时间到2天的可能性。试验对70日龄S5份、5～6月龄34份、7月龄44份猪瘟非免疫猪血清,进行猪瘟母源抗体的监测。结果70日龄阳性率52.3％;至5～6月龄全转阴性。7月龄44头双份血清,送本实验室与英国威桥中心兽医实验室各1份,试验结果双方一致,均阴性。对70日龄40份血清,与目前国内常规法猪瘟兔子中和试验(HC—RNT)作对比试验,阳性率分别为47.5％、42.5％。     

甘肃省河西地区14县(市区)猪瘟实验考核

为了更好地开展猪瘟预防工作,我们于1990～1992年采用免疫荧光抗体技术检查疑似猪瘟病料中的病原,用PPA-ELISA法检测血清免疫抗体的方法,对甘肃省河西地区14县(市)区猪瘟防治效果进行了实验考核。     

猪瘟病毒与防制猪瘟的研究进展

猪瘟于1833年首先发现于美国的Ohio州。1903年由Deschwoinitz和Dorsot证明病原是病毒。匈牙利的Hutyra Kovos于1908年制成猪瘟高免血清,说明那时欧洲也已存     

基于非洲猪瘟病毒p72蛋白的阻断ELISA检测方法的建立及初步应用

本研究以真核表达的非洲猪瘟病毒(ASFV)p72蛋白为包被抗原,以抗ASFV p72蛋白的特异性单克隆抗体为检测抗体,经条件优化,建立了特异性检测ASFV抗体的阻断ELISA方法。结果显示,最佳抗原包被量为100 ng/孔,待检血清样本最佳稀释度为1∶2,酶标抗体最佳稀释度为1∶10 000。该阻断ELISA方法的结果判定标准:当血清样品的PI≥41.84%时,判定为阳性;当血清样品的PI41.84%时,判定为阴性。特异性试验结果显示,该方法仅能与非洲猪瘟病毒阳性血清反应,与PRV、PCV2、PRRSV、CSFV和PPV等猪病疫苗毒阳性血清无交叉反应;敏感性试验结果显示,该方法最低能检出1∶128稀释的阳性血清;批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%;与商品化ELISA试剂盒的对比检测结果表明,两种方法的符合率为100%。上述结果表明,本研究建立的基于ASFV p72蛋白的阻断ELISA方法可以应用于ASFV抗体的检测,为ASFV流行病学调查及疫情监测提供了有效的检测手段。     

猪瘟病毒IPMA检测方法的建立

为建立一种可定位和直观判断的猪瘟病毒检测方法,本研究应用猪瘟单克隆抗体作为一抗,建立了猪瘟病毒免疫过氧化物酶单层细胞试验检测体系,并对其相关的反应条件进行优化,对其特异性、灵敏性、重复性和可靠性进行了检测。结果显示,最佳病毒接种量为0.5个TCID_(50)(TCID_(50)为1×10~(-5)/mL),固定前最佳的病毒孵育时间为48 h,一抗的最佳稀释度为1∶300,二抗的最佳稀释度为1∶2 000。所建立的猪瘟病毒免疫过氧化物酶单层细胞试验与其他几种常见猪病毒无交叉反应。在对300份来自不同地区的临床血样检测中,IPMA与RT-PCR和ELISA阳性检测结果符合率可达92%以上。研究结果说明,该方法具有良好的特异性、敏感性和可靠性。本研究为高效和便捷的猪瘟临床检测方法的研发奠定了基础。     

非洲猪瘟病毒PP62蛋白在昆虫细胞中的表达与鉴定

为表达非洲猪瘟病毒PP62蛋白,将非洲猪瘟病毒pp62基因克隆至pFastBac-HTA载体,经转座、转染后获得重组杆状病毒rBac-pp62。将该重组病毒感染Sf9细胞后,采用间接免疫荧光(IFA)检测PP62蛋白的表达,通过亲和层析纯化重组蛋白PP62,以Western-blot和间接ELISA方法鉴定纯化的重组蛋白PP62的免疫反应活性。结果显示,重组杆状病毒rBac-pp62感染的Sf9细胞可以大量表达PP62蛋白,纯化的PP62重组蛋白能够与非洲猪瘟阳性血清发生特异性反应,以重组蛋白PP62为包被抗原建立的间接ELISA方法可以区分非洲猪瘟阳性血清和阴性血清。结果表明,表达的重组蛋白PP62具有良好的反应活性,可作为开发非洲猪瘟抗体检测试剂盒的抗原以及用于PP62蛋白的结构和生物学功能研究。     

表达猪瘟病毒E2蛋白重组减毒鼠伤寒沙门氏菌活载体疫苗株的构建及动物免疫试验

为了构建表达猪瘟病毒E2蛋白的口服重组减毒鼠伤寒沙门氏菌活载体疫苗株,亚克隆猪瘟病毒E2基因,将其插入到表达载体pYA3341中,构建了重组质粒pYA3341-E2。将该重组质粒电转入鼠伤寒沙门氏菌疫苗株X4550(缺失asd、cya、crp基因),获得重组疫苗菌株X4550(pYA3341-E2),并对重组菌表达的E2蛋白进行SDS-PAGE和Western-blot分析、测定其在体内外的稳定性、生长曲线、安全性及动物免疫试验。结果显示,重组菌能表达E2蛋白且表达的蛋白能与猪瘟病毒阳性血清特异性结合。在体外营养选择压力下,重组菌株在体外可稳定地携带重组质粒传代繁殖,在体内可稳定地定居于肠系膜淋巴结和脾。小鼠口服试验证实重组菌无毒性,安全可靠。动物免疫试验表明,口服重组菌免疫猪产生了抗E2蛋白抗体。淋巴细胞增殖试验表明,重组菌能诱导机体产生较强的细胞免疫应答。结果表明,成功构建了能稳定表达猪瘟病毒E2蛋白的口服减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株,为研究猪瘟口服基因工程疫苗奠定了基础。     

非洲猪瘟病毒P54蛋白的真核表达及间接ELISA检测方法的建立

利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达出非洲猪瘟病毒P54蛋白。经SDS-PAGE和Westernblot分析后,以P54重组蛋白作为检测抗原包被酶标板,通过优化各反应条件,建立了检测非洲猪瘟血清抗体的间接ELISA方法。结果显示,P54重组蛋白的大小约为25ku;经Western-blot试验证实,它具有良好的抗原性。建立的间接ELISA方法的检测灵敏度可达1∶320,批内、批间变异系数均小于10%。与商品化的非洲猪瘟竞争ELISA试剂盒比较,符合率达100%。用该间接ELISA方法检测其他不同疫病猪的阳性血清样本,结果均为阴性,表明无交叉反应。结果表明,建立的用以检测非洲猪瘟病毒的间接ELISA方法具有敏感性高、重复性好、特异性好的特点。