德州市水域中硅藻分布的研究

目的研究德州市水域中硅藻分布的特点,建立德州市春季和夏季的各水域硅藻数据库。方法对德州市主要水域的130个取水地点进行春季和夏季两次采样,用强酸消解-真空抽滤-扫描电镜法检测各水域中硅藻的种属及含量,统计分析水域中硅藻含量、群落组成、相对丰度和优势种属特点。结果夏季的硅藻含量高于春季的硅藻含量,河流两个季节硅藻含量无统计学显著差异(P>0.05),湖泊和水库两个季节硅藻含量存在统计学差异(P<0.05)。各水域之间硅藻含量存在差异,含量最高为608020个/10mL,最少为10个/10mL。各水域之间种属组成、优势种属和种属优势率存在差异。结论德州地区不同水域、不同季节的水中硅藻种属和含量具有明显的特异性;建立硅藻数据库和掌握本地区水域中硅藻种属特点,有助于德州市水域内水中尸体案件硅藻的检验和落水地点的判断。     

实时荧光定量PCR检测硅藻UPA基因在溺死诊断中的研究

目的建立硅藻UPA条形码基因的实时荧光定量PCR检测方法,探讨其在溺死诊断中的应用价值。方法对Gene Bank中登录的硅藻UPA基因序列进行比对获得同源序列,据其设计硅藻门通用引物。对2种人体常见共生菌(大肠杆菌、双歧杆菌)、3种浮游细菌、15种浮游藻类、32具尸体(其中生前溺水死亡28例,死后抛尸1例,陆地死亡3例)的组织样本(肺、肝、肾)及尸体发现地水样提取DNA,采用设计的引物进行特异性、灵敏度、重复性试验,分析检材中硅藻检出情况,统计硅藻阳性率,以上述组织样本的微波消解-真空抽滤-自动扫描电镜法检测结果对建立的q PCR检测方法进行比较评估,比较该方法与PCR-毛细管电泳检测法的灵敏度。结果引物UPA99仅对硅藻标准株(针杆藻、舟形藻、直链藻、小环藻、菱形藻)DNA具有扩增,扩增产物熔解曲线平稳,峰尖且窄,熔解温度为(87±1)℃。以p MD18-T重组质粒为标准品,检测区间为1.56×10~2-1.56×10^-5ng/μL,建立实时q PCR方法的灵敏度为1.56×10^-5ng/μL,而PCR-CE方法的灵敏度为1.56×10-3ng/μL。批间及批内变异系数均低于2%,具有较高的重复性和稳定性。对于生前溺水尸体肺、肝、肾的检出率依次为89.3%,71.4%,64.3%。结论基于硅藻UPA基因设计通用引物,建立的q PCR硅藻检验法特异性高、灵敏度高、重复性好,应用于溺死诊断具有较好的应用前景。     

溺死相关浮游生物基因座的复合扩增体系

目的构建溺死相关浮游生物基因座的复合扩增体系,验证体系特异性并评估其在法医溺死诊断中的应用价值。方法针对溺死相关浮游生物同源基因序列,设计特异性引物,并用FAM、HEX、TAMRA、ROX、SIZ荧光染料分组标记,构建复合扩增体系;进行体系特异性验证;以16例实验猪样本评估体系检验效能;复合扩增体系、硅藻形态学MD-VF-Auto SEM检测法及硅藻rbc L基因PCR-CE检测法分别检测28例案件样本,比较分析应用效果。结果该复合扩增体系共包含14个基因座,可特异性扩增35种浮游藻类和3种浮游细菌,人、3种人体共生菌及8种浮游细菌均为阴性。以该体系检测溺死实验猪,阳性率为90%,非溺死实验猪均未检出;检测溺死案件样本,阳性率为96%,非溺死案件均未检出。复合扩增体系与MD-VF-Auto SEM法检测案件尸体肺、肝和肾的阳性率均不具有统计学差异(P>0.05),但其与硅藻rbcL基因PCR-CE法检测案件肝和肾的阳性率均具有统计学差异(P<0.05)。结论本文针对多种溺死相关浮游生物14个基因建立的复合扩增体系,具备多种靶物种的特异性遗传标记,且所需检材量小,提高了检测效能,在法医溺死鉴定中具有良好的应用前景。     

复合扩增A10、C4基因座遗传多态性及法医学意义

目的　建立复合扩增A10、C4基因座的体系 ,研究其在法医学检验中的应用价值。方法　生物学样本用Chelex - 10 0的方法提取DNA ,荧光标记的特异性引物复合扩增A10、C4基因座 ,用ABI 310 0遗传分析仪对扩增产物进行检测分型。结果　A10、C4基因座各检出 6个等位基因 ,GD值分别为 0 .6 86 ,0 .84 6 .共检出 2 3种单倍型 ,其单倍型的个体识别率为 0 .9184。扩增女性DNA ,均无特异性扩增产物 ;调查 30个二代家系 ,均未观察到突变基因的存在。结论　A10、C4复合扩增体系多态性较高 ,对法医学中男女混合检材的个人识别及父系亲缘关系鉴定有较高的应用价值。     

应用多个Y-STR位点鉴定兄弟关系1例

1案例某日,在东莞市一水域发现一具腐败尸体,怀疑是一周前广州增城某单位失踪人员林某。因尸体高度腐败肿胀,无法辨别身份。将死者肋软骨与林某的哥哥血纱送检做DNA。经荧光标记引物扩增Y染色体DYS390、DYS19、DYS385、DYS389Ⅰ/Ⅱ、A10、C4位点,3100全自动遗传分析仪检测分型,结果显示二者由上述8个Y-STR位点组成的单倍型相同(见表1),支持二者具有兄弟关系。表1案例8个Y-STR基因座的检验结果检材DYS19DYS390DYS389I/IIDYS385A10C4死者15229/2512-121213林兄15229/2512-1212132讨论STR基因座的分型技术简单、快速,适用于…     

猫STR基因座复合扩增体系的构建及其法医学应用

目的 构建一个猫STR基因座复合扩增体系并对其技术性能进行测试,评估其应用价值。方法整理和分析猫STR基因座文献数据资料,筛选可用于猫个体识别和亲缘关系鉴定的STR基因座和性别鉴定位点,设计荧光标记引物,构建复合扩增体系。对构建的复合扩增体系进行灵敏度、准确性、均衡性、稳定性、种属特异性、组织同一性和混合样本等验证,并对145例猫无关个体进行群体遗传学调查。结果 成功筛选到16个猫常染色体STR基因座和1个Y染色体性别决定区,并构建了包含上述基因座的复合扩增体系。DNA模板量低至0.25 ng时仍可得到完整分型,检测其他常见动物样本时未见特异性扩增峰。群体遗传学调查结果显示,16个猫STR基因座累积个体识别率为1-3.57×10^-20,累积非父排除率为1-6.35×10^-5,累积匹配概率为3.61×10^-20。结论 本研究构建的猫STR基因座复合扩增体系灵敏度高、种属特异性好、分型结果准确,能够为司法鉴定领域中涉及猫的种属鉴定、个体识别及亲缘关系鉴定等案件提供有效的解决方法。     

38重InDel快速族群推断体系的优化及验证

目的 对构建的38重InDel快速族群推断体系进行优化,根据DNA分析方法科学工作组(Scientific Working Group on DNA Analysis Method,SWGDAM)指南进行性能验证,并对其应用于东亚、欧洲、非洲及其混合人群族群推断的准确性进行验证。方法 以DNA标准品9947A为模板,通过调整引物平衡性、Mg²⁺终浓度、优化PCR热循环参数和扩增体积等建立最优扩增条件,比较样本的等位基因丢失、非特异性扩增以及推断样本来源是否与已知信息匹配,评价该体系的相关性能。结果 本体系的最佳模板用量为0.125～2 ngDNA,InDel分型结果准确,扩增均衡性好,种属特异性好;对混有血红蛋白(≤80μmol/L)、靛蓝(≤40 mmol/L)、钙离子(≤1.0 mmol/L)以及腐殖酸(≤90 ng/μL)等抑制剂的样本具有一定耐受性;可以直接扩增检测血卡、唾液卡,且族群推断结果准确;能够区分两样本的混合DNA样本;对实际案例常见生物检材的检验结果良好。结论 38重InDel快速族群推断体系分型结果准确可靠,体系性能符合SWGDAM指南要求,...     

24个基因座复合扩增系统的应用

目的建立24个基因座的复合扩增系统,并对其性能指标进行评价。方法选择24个基因座（包含D8S1179、D5S818、D2S1338、D18S51、D6S1043、D2S441、D3S1358、vWA、D19S433、D16S539、CSF1PO、Penta D、D22S1045、D13S317、D1S1656、D7S820、TPOX、Penta E、D10S1248、TH01、D12S391、D21S11、FGA等23个STR基因座及1个Amelogenin基因座）;合成引物,上游端标记荧光染料;收集DNA数据库建库血痕及口腔拭子样本及相关11种动物样本,采用本文方法进行复合扩增;并对方法的准确性、灵敏度、稳定性、种属特异性、检材适用性、混合样本的检验等系统性能指标进行验证。结果本文复合扩增系统对最长保存9年的各种血痕检材完整分型成功率为100%,且均衡性良好,无非特异性扩增,口腔拭子的成功率为97.8%,灵敏度达125pg,对含有抑制剂样本,在血红素浓度≤600μmol/L,腐殖酸浓度≤50ng/μL时检出效果稳定,种属特异性好。结论本文24个基因座复合扩增系统在DNA数据库建设中具有较好的应用价值。     

15重快速STR复合扩增体系的构建

目的建立一套15重快速STR复合扩增体系。方法选择14个常染色体基因座以及1个性别基因座,采用Fast Start Taq DNA聚合酶系统,以DNA标准品9947A为模板,通过筛选扩增条件、选择热启动酶用量、调整引物平衡、优化快速扩增程序、筛选反应缓冲液、选择反应体系以及筛选添加剂等一系列复合扩增实验,比较各条件下等位基因丢失和非特异性扩增情况。结果在以1 ng DNA为模板、0.4μL聚合酶及10×Fast Start高保真反应缓冲液构成10μL快速体系的条件下,32 min即可获得标准DNA全部15个STR基因座的完整分型,无等位基因丢失和非特异性扩增现象,等位基因均衡性良好。同时,5%甘油、0.01%明胶、0.05%明胶和5 mmol/L硫酸铵可作为PCR扩增过程中拟加入的反应添加剂。结论本研究建立的15重快速STR复合扩增体系可以明显缩短反应时间,提高样品检测效率。     

PEP-PCR法及其在法医学中应用的可行性研究

提高微量检材的利用率 ,建立PEP方法并对其法医学应用进行可行性研究。用 15个随机寡核苷酸的序列作为引物 ,低特异性下扩增出微量DNA ,以此扩增物作为模扳 ,进行特异基因座扩增。经PMCT118,GABAR ,DYS19,D18S849,D3S1744,D12S10 90 ,D8S1179,D2 1S11,D18S5 1,D5S818,D13S3 17,D7S82 0 ,D3S13 5 8,vWA ,FGA ,TH0 1,CSF1PO ,TPOX ,D16S5 3 9及Amelogene等 2 0个基因座的PEP PCR与直接的PCR分析比较 ,二者分型结果一致 ,即使 1ngDNA也能得到正确分型。PEP方法可用于法医学检验 ,有利于微量物证的利用 ,使物证检材提供尽可能多的信息     

焦磷酸测序分析短片段牙釉质蛋白基因进行性别鉴定

目的采用焦磷酸测序技术分析短片段牙釉质蛋白基因进行性别鉴定并用于骨骼及腐败生物检材的检测。方法应用blast软件,确定牙釉质蛋白基因(Amel)上1段含有3个SNP位点及1个插入/缺失(indel)位点的序列作为待测靶序列,设计引物,扩增该段序列,应用焦磷酸测序技术分析扩增序列,进行性别鉴定。对方法进行准确性、灵敏度、种属特异性的测试,并用于对骨骼和高度降解DNA的检测。结果 PCR产物分别为44bp(Amel X)和45bp(Amel Y),女性测序结果为:G/G,T/T,…/…,C/C,男性测序结果为:G/T,T/A,…/C,C/A,分型图谱清晰。应用本文方法检测100份已知性别的DNA样本,结果均正确无误,方法最低DNA模板量为0.5ng,具有较好的人类种属特异性。用于高度降解DNA分析,较IdentifilerTM试剂盒具有更高的成功率且骨骼样本也得到清晰的分型结果。结论本文采用焦磷酸测序技术分析Amel的方法在法医学性别鉴定中有较好的应用价值。     

玻璃珠-涡旋振荡改良法用于硅藻DNA提取

目的 检验玻璃珠-涡旋振荡改良法提升硅藻DNA提取的效果。方法 以DNeasy PowerSoil Pro试剂盒为对照,另选取2种不同原理的植物DNA提取试剂盒（新型植物基因组DNA提取试剂盒、Plant DNA Isolation试剂盒）和1种血液DNA提取试剂盒（全血基因组DNA提取试剂盒）对同一水样及同一溺死案件肺组织的硅藻DNA进行提取。设计不同大小玻璃珠质量比和涡旋振荡时间的组合,选择加入玻璃珠振荡的最佳DNA提取条件。将常规组与改良组的提取产物直接进行电泳,经硅藻特异性PCR扩增检测,采用qPCR对提取物进行定量,对各组的Ct值进行统计学分析。结果 当涡旋振荡频率为3000r/min时,DNA提取的最佳组合为涡旋振荡4 min,大小玻璃珠质量比为1∶1。以DNeasy PowerSoil Pro试剂盒的Ct值为参照,10 mL水样的Ct值大于0.5 g组织的Ct值。其他3种试剂盒采用玻璃珠-涡旋振荡改良法后,用于植物DNA提取的2种试剂盒Ct值均下降,且改良前后组织的Ct值差异均有统计学意义（P<0.05）;全血基因组DNA提取试剂盒可以成功提取硅藻DNA,水样提取效...     

STR FGA基因座变异 1例

在采用 PCR-STR技术进行亲子鉴定的案例中,发现 1例 FGA基因座变异,现报道如下。 1 案情摘要 某男（ 35岁,汉族）和某女（ 32岁,汉族）携 " 儿子 " 来本室要求做亲子鉴定。 2 检验过程 分别抽取该女、 " 儿子 " 及该男静脉血各 1ml,用 Na2EDTA. 2 H2O抗凝,分别标明 1号 " 、 2号 " 、 3号 " ,备检。用 Chele x-100 提取 1号、 2号、 3号检材的 DNA,然后进行 F13A01、 FES/FPS、 D1 9S253、 TPOX、 D7S820、 D12S391、 CYP19、 TH01、 FGA、 D3S1359、 D13S317、 FOLP2 3、 GABRB15、 CSF1P0、 vWA、 D5S818、 D7S2846、 D2S441、 D3S1358、 D7S221共 20个座位的 PCR扩增,扩增产物用含 4mol/L尿素、 0.5mm厚的变性聚丙烯酰胺凝胶（ T6％、 C5％）电泳分离、银染,得到各位点的扩增片段长度多态性图谱。根据扩增片段电泳迁移的距离,借用顶蓬原则,参考各座位在中国汉族人群的基因频率分布资料进行各位点基因型命名,并计算父权概率（ RCP）最小值。结果显示,本案检验的 20个 STR座位除 FGA外有 19个座位的结果符合孟德尔遗传定律,经计算 RCP大于 99.99％,认定亲权关系。孩子仅 FGA 座位在父亲的基因型中（杂合子）找不到相同的基因,不符合孟德尔遗传定律 ,推测 FGA座位存在突变。     

征稿启事

《时代法学》是经国家新闻出版总署批准,由湖南省教育厅主管,湖南师范大学主办,湖南师范大学法学院承办的国内外公开发行的法学理论期刊。宗旨是：反映国内外法学研究的最新成果,努力研究和探索社会主义市场经济法治问题,促进法学研究与教学的发展,为社会主义民主与法制建设服务。为适应我国信息化建设的需要,扩大作者学术交流渠道,本刊已加入中国学术期刊(光盘版)、中国期刊网全文数据库、中文科技期刊数据库以及“万方数据——数字化期刊群”,因此,向本刊投稿并录用的稿件将统一纳入上述数据库,进入因特网提供信息服务。凡有不同意者,请另投它刊或特别声明需另作处理。欢迎广大作者、读者赐稿、订阅。来稿请注意以下事项：一、稿件以不超过10000字为宜。稿件应为打印稿,并附软盘,也可以发电子邮件,邮件地址：sdfx．law@163．com。二、根据中国学术期刊(光盘版)技术规范要求,稿件应按下列格式依次排列：文章题目；作者姓名；作者单位名称；单位地址(省、市)(以上为中文)；邮政编码；中文(200字左右,不得有“本文认为”等字样)；中文关键词；中图分类号、文献标识码、文章编号；文章题目(英文)；作者名(汉语拼音)；作者单位名及单位地址(英文)；英文；英文关键词：文章正文。三、中文的标点符号和数字应严格执行中华人民共和国国家标准,即按GB/T15834—1995《标点符号用法》及GB/T15835—1995《出版物上数字用法的规定》使用。四、引文务必查对准确,注明出处。注释、参考文献一律脚注,并依次连续编码,格式如下：期刊文章-[序号]主要作者·文献题名[J]．刊名,年,卷(期),起止页码．报纸文章-[序号]主要作者·文献题名[N]．报纸名,出版年-月-日(版次)．专著、论文集、学位论文、报告-[序号主要作者·文献题名[文献类型：专著M、论文集C、学位论文D、报告R]．出版地：出版者,出版年．起止页码(任选)．论文集中的析出文献-[序号]析出文献主要作者．析出文献题名[A]．原文献主要责任者(任选)．原文献题名[C]．出版地：出版者,出版年．析出文献起止页码．国际标准、国家标准-[序号]标准编号,标准名称[s]．电子文献-[序号]主要责任者．电子文献题名(电子文献及栽体类型标识)．电子文献的出处或可获得地址,发表或更新日期/引用日期(任选)．各种未定型的文献-[序号]主要作者·文献题名[Z]．出版地：出版者,出版年．引文应注意保守国家机密,不得引用未正式发表的文献。五、稿件第一页地脚处务请注明如下事项：如属基金项目或规划课题,应写明项目或规划名,并注明文号；作者简介含姓名,出生年,性别,民族(汉族可省略),籍贯,职称,学