白坚木碱类二聚体在Caco- 2细胞模型中的吸收机制研究

目的 考察白坚木碱二聚体(10-dehydroxyl-12-demethoxy-conophylline,wtdr-11)在人类结肠癌细胞系Caco-2细胞模型中吸收和转运机制.方法 建立Caco-2单层细胞完整模型,采用超高效液相色谱-荧光法(ultra-high performance liquid chromat...     

补阳还五汤黄酮类有效成分在Caco-2细胞单层模型的转运特征及对CYP450酶活性的影响

目的 研究补阳还五汤3个黄酮类有效成分（羟基红花黄色素A、毛蕊异黄酮、芒柄花素）在Caco-2细胞单层模型中的转运特征及其在大鼠肝微粒体中对CYP450酶亚型活性的影响。方法 MTT法研究药物在Caco-2细胞单层模型的安全浓度范围,以Caco-2细胞单层模型研究黄酮类有效成分的双向转运机制,以表观渗透系数（Papp）为检测指标,考察时间、浓度以及P-gp抑制剂维拉帕米对转运的影响,利用Cocktail探针法研究药物对CYP450亚型的体外抑制作用。结果 从顶侧（apical, AP）到底外侧（basolateral, BL）（AP→BL）,芒柄花素、毛蕊异黄酮的Papp>10-6 cm/s,表明其吸收性良好,羟基红花黄色素A的Papp为10-6 cm/s,表明其吸收性一般;且三者的转运量随浓度升高和时间延长而显著升高,BL→AP的转运量与AP→BL的转运量的比值小于1.5,其中芒柄花素、毛蕊异黄酮的转运都受到P-gp外排蛋白的外排作用;补阳还五汤黄酮类有效成分明显降低了CYP2E1、CYP1A2酶探针底物的代谢量(P<0.05)。结论 3种黄酮类有效成分在Caco-2细胞模型的转运方式均为被动转运,毛蕊异黄酮与芒柄花素明显受到P-gp的外排作用,补阳还五汤黄酮类有效成分可以增加主要通过CYP2E1、CYP1A2酶代谢的药物浓度。     

白头翁汤正丁醇提取物对白念珠菌作用下Caco- 2细胞中细胞因子、防御素及Toll样受体表达的影响

目的 从细胞因子、人β- 防御素（human beta defensin,HBD）及Toll样受体（toll- like receptors,TLRs）途径探究白头翁汤正丁醇提取物（butyl alcohol extract of Baitouweng Decoction,BAEB）抗白念珠菌的机制。方法 以Caco- 2细胞为实验模型,先以BAEB作用Caco- 2细胞24 h,再加入热灭活的白念珠菌SC5314孢子(Candida albicans,C.A)共培养24 h,以MTT法测定Caco- 2细胞存活率;采用酶联免疫吸附试验检测Caco- 2细胞上清液白细胞介素- 6（interleukin- 6, IL- 6）、IL- 8、IL- 1β、HBD- 2、HBD- 3水平;采用普通PCR法检测Caco- 2细胞TLR1、TLR2、TLR4、TLR5 mRNA的表达水平。结果 与对照组比较,C.A单独作用的Caco- 2细胞中IL- 6、IL- 8、IL- 1β、HBD- 2、HBD- 3表达水平显著升高（P<0.05）,TLR1、TLR2、TLR4、TLR5 mRNA表达水平显著上调（P<0.05）;与C.A单独作用相比,BAEB预保护Caco- 2细胞后,Caco- 2细胞中IL- 6、IL- 8、IL- 1β及HBD- 2、HBD- 3表达水平明显降低（P<0.05）,TLR1、TLR2、TLR4、TLR5 mRNA表达水平也显著下调（P<0.05）,BAEB高剂量的效应最明显。结论 BAEB抗白念珠菌的机制与下调细胞因子、HBD及TLRs表达有关。     

绿萼梅抗β淀粉样蛋白致阿尔茨海默病细胞模型活性部位的筛选及其化学成分分析

目的 筛选绿萼梅水提物抗β淀粉样蛋白（amyloid β,Aβ）致阿尔茨海默病（Alzheimers disease,AD）细胞模型的活性部位,并对活性较好的部位进行化学成分辨识。方法 采用水和不同浓度乙醇提取绿萼梅活性部位,再用AB-8型大孔吸附树脂富集并制备绿萼梅4个不同洗脱部位样品,采用Aβ诱导的SH-SY5Y细胞AD模型筛选绿萼梅不同部位样品活性,借助超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱对活性较好的部位进行成分鉴定。结果 不同浓度乙醇洗脱物对Aβ诱导的SH-SY5Y细胞毒性均有较好的抑制作用（P<0.05）,药效呈现出浓度依赖性,其中60%、90%乙醇洗脱物作用极为显著（P<0.05）;从两个活性部位共鉴定出24个化合物,包括16个黄酮类成分,4个苯丙素类成分和4个其他类成分;两个活性组分中共有成分14个,其中主要为黄酮类成分。结论 60%乙醇洗脱部位和90%乙醇洗脱部位是抗Aβ毒性的活性部位,黄酮类成分为该活性部位的主要物质基础。     

左归饮水提物对大鼠Cyp2b1、Cyp2c11、 Cyp2c7亚酶活性的影响

目的 采用Cocktail探针药物法评价左归饮对大鼠体内细胞色素氧化酶P450亚型酶Cyp2b1、Cyp2c11和Cyp2c7代谢活性的影响,为左归饮的开发应用提供实验依据。方法 选用阿莫地喹、安非他酮、奥美拉唑分别作为Cyp2b1、Cyp2c11和Cyp2c7的探针底物,制备成Cocktail混合溶液。将SD雄性大鼠分为实验组和空白组,实验组每日清晨灌服高、中、低剂量左归饮溶液,空白组每日清晨灌服空白溶剂,均连续给药14 d。第14天清晨尾静脉注射混合探针药物后于各时间点测定大鼠体内探针药物的血药浓度。经DAS 2.0软件计算探针药物的药物代谢动力学参数,评价左归饮对大鼠体内代谢酶活性的影响。采用LC-MS/MS法同时测定3种探针药物的血药浓度。结果 与空白组比较,高、中、低剂量左归饮连续给药对Cyp2b1、Cyp2c7和Cyp2c11酶活性的影响均无统计学意义（P＞0.05）。结论 左归饮配伍其他药物使用对代谢酶无明显影响,左归饮可在临床上广泛地配伍应用。     

雄黄主要成分As2S2通过“ANP32A-INHAT-H3乙酰化”轴抑制三阴性乳腺癌细胞增殖、迁移的表观遗传调控机制

目的 探究雄黄主要成分二硫化二砷（As2S2）对三阴性乳腺癌（triple negative breast cancer,TNBC）的作用及表观遗传调控机制。方法 〖JP2〗采用CCK-8、平板克隆形成和细胞划痕实验探究As2S2对人正常乳腺上皮细胞MCF-10A及TNBC细胞增殖和迁移的影响;4D-label free定量蛋白质组学分析挖掘As2S2抗TNBC的潜在干预靶点酸性核磷蛋白家族成员32A（acidic nuclear phosphoprotein family member 32A,ANP32A）;慢病毒感染法构建ANP32A过表达敲低细胞株,探究潜在靶点ANP32A对As2S2抗TNBC作用的影响;蛋白质免疫共沉淀和Western blot实验探究As2S2是否通过ANP32A调控TNBC细胞H3乙酰化。结果 As2S2对人正常乳腺上皮细胞MCF-10A影响甚微,但显著抑制TNBC细胞增殖和迁移,且呈剂量依赖性;4D-lable free定量蛋白质组学分析结果显示,促癌因子ANP32A被As2S2显著下调,且ANP32A表达影响As2S2在TNBC中的抗增殖和迁移效果。As2S2能下调ANP32A的蛋白水平,抑制乙酰转移酶抑制剂复合物亚基的招募,增加H3乙酰化水平。结论 As2S2通过下调ANP32A蛋白调控TNBC细胞中H3乙酰化,抑制TNBC细胞增殖和迁移。     

原子吸收光谱法测定中华芦荟微量元素

目的：测定中华芦荟中的微量元素.方法：用浓HNO3 10 ml和HClO4 2 ml（体积分数比为5[DK]∶1）作消化液处理样品,去离子水移取消化液并定容后采用原子吸收光谱法.结果：测定了样品中的Pb、Mn、Zn、K、Ca、Fe、Cd、Hg、As等9种微量元素,标准加样回收率为95.28%～105.4%.结论：该法简便、快速,为微量元素与芦荟药效之间的关系提供了可靠的依据.     

基于Nrf2通路研究通腑养髓方调控Wilson病模型TX小鼠神经细胞铁死亡的机制

目的 基于核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor, Nrf2)信号通路观察通腑养髓方对Wilson病(Wilson’s disease, WD)模型TX小鼠神经细胞铁死亡的干预效应,并探讨通腑养髓方对WD神经细胞损伤的保护机制。方法 以DL小鼠为正常对照,将TX小鼠随机分为模型组和通腑养髓方组,通腑养髓方组以通腑养髓方中药灌胃治疗30 d,模型组和对照组小鼠以生理盐水灌胃,末次灌胃后取各组小鼠脑组织。采用电感耦合等离子体质谱法检测小鼠脑组织铜、铁微量元素含量,免疫荧光染色技术检测小鼠脑组织转铁蛋白受体(transferrin receptor, TfR)表达水平,比色法检测小鼠脑组织超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活性和丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量,透射电子显微镜观察小鼠脑组织细胞线粒体形态变化,Fluoro-Jade B(FJB)染色观察小鼠神经细胞损伤程度,Western blot法检测小鼠脑组织铁死亡及Nrf2信号通路相关蛋白[Nrf2,铁蛋白重链(fe...     

葛根和黄芩乙醇提取物体外抗乳腺癌实验研究

目的:考察葛根和黄芩乙醇提取物体外抗乳腺癌细胞增殖活性。方法:葛根及黄芩200,400,700,950 m l/L乙醇提取物作用于人乳腺癌MCF-7(ER )和MDA-MB-231(ER-)细胞,MTT法检测对细胞增殖的影响。结果:葛根950 m l/L乙醇提取物在100~800μg/m l剂量均能显著抑制人乳腺癌细胞增殖,700 m l/L乙醇提取物也显示了一定的抗肿瘤细胞生长活性,200,400 m l/L乙醇提取物未见明显的抑制乳腺癌细胞增殖作用;黄芩950,700 m l/L乙醇提取物在50~400μg/m l剂量均能显著抑制人乳腺癌细胞增殖,400 m l/L乙醇提取物也显示了一定的抗肿瘤细胞生长活性,而200 m l/L乙醇提取物未见明显的抑制肿瘤细胞增殖作用。结论:葛根和黄芩乙醇提取物有一定的抑制乳腺癌细胞增殖作用。     

艾叶/茶叶水提物促进皮肤感染模型大鼠创面愈合的协同作用及机制研究

目的 探讨艾叶水提物和茶叶水提物对皮肤感染模型大鼠的协同治疗作用及其机制。方法 实验分两个部分进行：第一部分将皮肤感染模型大鼠随机分为模型组、西药组、艾叶水提物组、茶叶水提物组、2∶1组（艾叶水提物与茶叶水提物质量比为2∶1）、1∶1组（艾叶水提物与茶叶水提物质量比为1∶1）和1∶2组（艾叶水提物与茶叶水提物质量比为1∶2）,每组7只。比较治疗前后各组大鼠创面面积;ELISA法检测各组大鼠血清肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素（interleukin, IL）-1β、IL-18水平。第二部分随机选取7只大鼠为正常组,将皮肤感染模型大鼠随机分为模型组、2∶1组（艾叶水提物与茶叶水提物质量比为2∶1）,每组7只。Western blot法检测各组大鼠皮肤组织黑色素瘤缺乏因子2（absent in melanoma 2, AIM2）、含有CARD的凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)和Caspase-1蛋白表达水平;ELISA法检测各组大鼠血清AIM2、ASC、Caspase-1及IL-1β、IL-18水平。结果 第一部分,与模型组比较,西药组、艾叶水提物组、茶叶水提物组和3个不同比例组感染创口收缩明显,创面面积明显减小,且促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-18的表达水平均显著降低（P＜0.05）。其中西药组、2∶1组效果更明显,两组促炎因子TNF-α、IL-1β水平比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。第二部分,与正常组比较,模型组感染创面组织中AIM2、ASC、Caspase-1蛋白表达水平和血清IL-1、IL-18水平均显著升高（P＜0.05）。与模型组比较,2∶1组感染创面组织中AIM2、ASC、Caspase-1蛋白表达水平和血清IL-1、IL-18水平均显著降低（P＜0.05）。结论 艾叶水提物和茶叶水提物对治疗皮肤感染模型大鼠存在协同作用,艾叶水提物与茶叶水提物质量比为2∶1是最优比例。其协同机制可能与AIM2炎症小体活化和细胞焦亡通路有关。     

加减薯蓣丸对阿尔茨海默病模型大鼠海马区TREM2及Iba1蛋白表达的影响

目的 探讨加减薯蓣丸对阿尔茨海默病(Alzheimers disease,AD)模型大鼠海马区髓细胞触发受体2(triggering receptor expressed on moyeloid cells 2,TREM2)、Iba1蛋白表达水平及对Iba1+细胞数量的影响。方法 采用SD大鼠双侧侧脑室注射β淀粉样蛋白1-42建立AD模型,将模型复制成功的大鼠分为模型组、中药组,并设正常组进行对照,每组10只。正常组、模型组大鼠每日给予10 mL/kg生理盐水灌胃,中药组大鼠每日给予加减薯蓣丸10 g/kg灌胃,连续灌胃4周后,应用Western blot法检测海马区TREM2和Iba1蛋白表达水平,免疫荧光染色标记Iba1+细胞数量。结果 与正常组比较,模型组TREM2蛋白表达水平显著增加（P＜0.05）;与模型组比较,中药组TREM2蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,Iba1蛋白表达水平显著增加（P＜0.05）,中药组海马区Iba1+细胞数量明显增加（P＜0.05）。结论 加减薯蓣丸可能通过影响海马区TREM2及Iba1蛋白水平的表达,增加Iba1+细胞数量,发挥对AD的治疗作用。