鹅掌疯醋剂对抗白色念珠菌及其早期生物膜的体外实验研究

目的 分析鹅掌疯醋剂对白色念珠菌及早期生物膜的作用及其机制。方法 通过微量稀释法测定鹅掌疯醋剂对白色念珠菌的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration, MIC),通过酶标仪测得其对菌体渗透性的影响,使用扫描电子显微镜和透射电子显微镜观察其对菌体超微结构的影响,并且通过CCK-8法和Spider平板法测定其对白色念珠菌生物被膜形成早期黏附性和芽管形成的影响。结果 鹅掌疯醋剂对白色念珠菌的MIC为药物原浓度的1/16,经过鹅掌疯醋剂处理后白色念珠菌细胞外紫外物质吸收增加,念珠菌超微结构被破坏,早期生物膜的黏附率和芽管形成受到抑制。结论 鹅掌疯醋剂有一定的抗真菌及抑制早期生物膜能力,其作用机制可能与改变菌体渗透性,破坏菌体结构,抑制早期生物膜的黏附率和芽管形成有关。     

鱼腥草素钠诱导临床耐药白假丝酵母菌生物膜细胞凋亡

目的 观察鱼腥草素钠对临床耐药白假丝酵母菌生物膜细胞凋亡的影响。方法 利用DAPI染色观察耐药白假丝酵母菌生物膜细胞核的形态;利用FITC-VAD-FMK染色观察耐药白假丝酵母菌生物膜细胞metacaspase活性;分别在JC-1染色和DCFH-DA染色下,采用流式细胞仪检测耐药白假丝酵母菌生物膜细胞内线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;利用Annexin Ⅴ-FITC/PI染色和流式细胞仪检测耐药白假丝酵母菌生物膜细胞的凋亡率。结果 一定浓度的鱼腥草素钠作用下,临床耐药白假丝酵母菌生物膜细胞内ROS水平、生物膜细胞凋亡率、metacaspase酶活性明显升高,MMP水平明显降低,生物膜细胞核出现碎裂和皱缩。结论 鱼腥草素钠能够诱导耐药白假丝酵母菌生物膜细胞凋亡。     

消炎祛痘方对痤疮丙酸杆菌诱导的炎症反应抑制作用研究

目的 观察消炎祛痘方对痤疮丙酸杆菌诱导的人急性单核细胞（THP-1细胞）分泌炎症因子肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-alpha,TNF-α）、白细胞介素-1α（interleukin-1 alpha,IL-1α）、白细胞介素-8（interleukin-8,IL-8）的影响,探讨其调控痤疮丙酸杆菌诱导的炎症反应机制。方法 采用细胞计数试验盒-8检测消炎祛痘方对THP-1细胞活力的影响;采用ELISA法观察消炎祛痘方对THP-1细胞上清中TNF-α、IL-1α、IL-8水平的影响;采用qRT-PCR和Western blot法分别检测Toll样受体2（Toll like receptor 2,TLR2）及核因子-κB p65（nuclear factor-kappa B p65,NF-κB p65）mRNA和蛋白的表达水平。结果 25 μg/mL消炎祛痘方对THP-1细胞活性无明显影响,12.5、25 μg/mL消炎祛痘方均能抑制痤疮丙酸杆菌诱导的TNF-α、IL-1α、IL-8表达水平,但25 μg/mL消炎祛痘方对3种细胞因子表达的抑制作用更强。12.5、25 μg/mL消炎祛痘方均能抑制TLR2 mRNA的表达,并且两组TLR2 mRNA表达水平的差异无统计学意义。消炎祛痘方能有效降低痤疮丙酸杆菌诱导的TLR2表达水平,25 μg/mL消炎祛痘方降低TLR2的作用更明显。25 μg/mL消炎祛痘方能显著抑制NF-κB p65的表达。结论 消炎祛痘方能抑制痤疮丙酸杆菌诱导的THP-1细胞分泌炎症因子,其机制可能与抑制TLR2/NF-κB信号通路有关。     

白头翁汤正丁醇提取物对白念珠菌作用下Caco- 2细胞中细胞因子、防御素及Toll样受体表达的影响

目的 从细胞因子、人β- 防御素（human beta defensin,HBD）及Toll样受体（toll- like receptors,TLRs）途径探究白头翁汤正丁醇提取物（butyl alcohol extract of Baitouweng Decoction,BAEB）抗白念珠菌的机制。方法 以Caco- 2细胞为实验模型,先以BAEB作用Caco- 2细胞24 h,再加入热灭活的白念珠菌SC5314孢子(Candida albicans,C.A)共培养24 h,以MTT法测定Caco- 2细胞存活率;采用酶联免疫吸附试验检测Caco- 2细胞上清液白细胞介素- 6（interleukin- 6, IL- 6）、IL- 8、IL- 1β、HBD- 2、HBD- 3水平;采用普通PCR法检测Caco- 2细胞TLR1、TLR2、TLR4、TLR5 mRNA的表达水平。结果 与对照组比较,C.A单独作用的Caco- 2细胞中IL- 6、IL- 8、IL- 1β、HBD- 2、HBD- 3表达水平显著升高（P<0.05）,TLR1、TLR2、TLR4、TLR5 mRNA表达水平显著上调（P<0.05）;与C.A单独作用相比,BAEB预保护Caco- 2细胞后,Caco- 2细胞中IL- 6、IL- 8、IL- 1β及HBD- 2、HBD- 3表达水平明显降低（P<0.05）,TLR1、TLR2、TLR4、TLR5 mRNA表达水平也显著下调（P<0.05）,BAEB高剂量的效应最明显。结论 BAEB抗白念珠菌的机制与下调细胞因子、HBD及TLRs表达有关。     

新藤黄酸对人表皮癌细胞A431增殖和凋亡的影响

目的 观察新藤黄酸（gambogenic acid,GNA）对人表皮癌细胞A431增殖和凋亡的影响。〖JP〗方法 以体外培养的人表皮癌A431细胞株为研究对象,采用甲基噻唑基四唑检测GNA对A431细胞增殖活性的影响;倒置显微镜下观察GNA对A431细胞株细胞形态的影响;荧光显微镜下观察GNA对Hoechst 33342染色的A431细胞凋亡的影响;采用流式细胞仪检测膜联蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素/碘化丙碇双染的A431细胞的凋亡率。结果 随着GNA剂量的增大,GNA对A431细胞增殖活性的抑制作用增强。倒置显微镜和荧光显微镜下观察显示,GNA作用的A431细胞形态发生明显的变化并出现显著的凋亡特征。流式细胞仪检测显示A431细胞凋亡率随着GNA作用剂量的增大而升高。结论 0.75~12.0 μmol/L GNA能够剂量依赖性地抑制A431的增殖。     

雷公藤红素对多发性骨髓瘤细胞株LP-1凋亡的诱导作用

目的 研究雷公藤红素对多发性骨髓瘤细胞LP 1凋亡的诱导作用及可能机制。方法 通过雷公藤红素体外作用于多发性骨髓瘤LP-1细胞，研究其对于细胞增殖及细胞凋亡的影响。采用EnoGeneCellTM细胞计数试剂盒 8(cell counting kit-8,CCK-8)研究雷公藤红素对LP-1多发性骨髓瘤细胞体外增殖的影响，采用膜联蛋白Ⅴ（Annexin Ⅴ）-增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein, EGFP）荧光染色法定性检测及流式细胞术定量检测雷公藤红素对LP-1多发性骨髓瘤细胞株凋亡的诱导作用，采用级联酶底物显色法检测雷公藤红素对LP-1多发性骨髓瘤细胞Caspase-3酶原活化状态的影响。结果 雷公藤红素能明显抑制LP-1多发性骨髓瘤细胞体外增殖，其半数抑制浓度（half inhibitory concentration, IC50）为0.881 7 μmol/L。雷公藤红素可诱导LP-1细胞发生细胞凋亡，此效应具有剂量依赖性，雷公藤红素60.0 μmol/L作用于LP-1细胞24 h可诱导细胞凋亡百分率达到80.7%。雷公藤红素可引起LP 1细胞Caspase 3酶原活化。结论 雷公藤红素可抑制多发性骨髓瘤细胞株增殖，诱导其凋亡，此作用可能通过Caspase 3酶原活化途径而实现。     

丹参注射液体外对格列喹酮血浆蛋白结合率的影响

目的 考察丹参注射液体外对格列喹酮血浆蛋白结合率的影响。方法 采用平衡透析法和高效液相色谱法,分别在有无丹参注射液的情况下对格列喹酮血浆蛋白结合率进行测定。结果 格列喹酮高浓度（12.6 μg/mL）、中浓度（6.3 μg/mL）、低浓度（1.26 μg/mL）的血浆蛋白结合率差异无统计学意义（P＞0.05）。在含有高浓度（750 mg/mL）、中浓度（375 mg/mL）、低浓度（75 mg/mL）丹参注射液时,格列喹酮（12.6 μg/mL）的血浆蛋白结合率分别为（82.6±3.11）%、（87.3±9.80）%、（92.6±4.21）%。在含有高浓度丹参注射液时,格列喹酮血浆蛋白结合率显著降低（P＜0.05）。结论 在临床剂量下,丹参注射剂不会影响格列喹酮血浆蛋白结合率。     

黄芩苷对高糖环境下肾小球系膜细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察高糖环境下黄芩苷对肾小球系膜细胞株HBZY- 1增殖和凋亡的影响。方法 采用MTT法观察高糖环境下3种接种浓度的肾小球系膜细胞株HBZY- 1的生长情况,确定该细胞的最佳接种浓度和用药时间点,继而采用MTT法检测黄芩苷对肾小球系膜细胞增殖的影响;运用倒置荧光显微镜观察黄芩苷对肾小球系膜细胞形态的影响;采用流式细胞仪检测不同浓度黄芩苷对肾小球系膜细胞凋亡的影响。结果 高糖环境下,肾小球系膜细胞的最佳接种浓度是2×103/mL,最佳用药时间是细胞培养48 h后。随着浓度升高,黄芩苷抑制HBZY- 1细胞增殖的作用增强。流式细胞仪检测结果显示,高糖环境下,肾小球系膜细胞总凋亡率随着黄芩苷作用剂量的增大而升高,黄芩苷浓度为6.25 μmol/L时,HBZY- 1细胞的总凋亡率与模型对照组比较,差异无统计学意义（P>0.05）;当黄芩苷浓度增至12.5 μmol/L时,HBZY- 1细胞的总凋亡率开始显著大于模型对照组（P<0.05）。结论 黄芩苷能够抑制高糖环境下肾小球系膜细胞株HBZY- 1的增殖,在一定浓度范围内呈现明显的量效关系。     

重楼总皂苷对人胃癌细胞SGC-7901 增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的 探讨重楼总皂苷（Rhizoma Paridis total saponin,RPTS)在体外对人胃癌细胞SGC-7901侵袭转移能力的影响。方法 取对数生长期的SGC-7901细胞,用不同浓度RPTS(2.5、5、10、20、40 μg/mL)处理24 h,四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium, MTT）法观察RPTS对细胞增殖能力的影响;采用细胞划痕实验、Matrigel transwell小室侵袭实验检测SGC-7901细胞的迁移和侵袭能力。结果 MTT法检测表明RPTS（10、20、40 μg/mL）可明显抑制SGC-7901细胞的增殖能力（P＜0.05）;细胞划痕实验、Matrigel transwell小室侵袭实验结果表明RPTS(2.5、5、10 μg/mL)处理过的SGC-7901细胞,迁移能力和侵袭能力降低（P＜0.05）。结论 RPTS具有抑制人胃癌细胞SGC-7901细胞增殖、迁移和侵袭的能力。     

重楼总皂苷对人胃癌MNK-45和MGC80-3细胞增殖的影响

目的 观察重楼总皂苷(Rhizoma paridis total saponins，RPTS)对人胃癌MNK 45和MGC80 3细胞增殖的影响。方法 设定5个不同浓度（5、10、20、40、80 μg/ml）RPTS处理两种细胞24、48、72 h后，采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)法测定MNK 45细胞和MGC80 3细胞增殖抑制率；设定浓度为10 μg/ml处理两种细胞24 h，采用吖啶橙/溴化乙锭（acridine orange/ethidium bromide, AO/EB）双染观察细胞形态学变化；设定浓度为10、20 μg/ml处理两种细胞6 h，用流式细胞仪测定细胞周期。结果 5～80 μg/ml RPTS对MNK 45和MGC80 3细胞增殖均具有显著的抑制作用(P<0.05，或P<0.01)，且药物剂量越大、作用时间越长，其抑制作用越强（P<0.01）；在相同药物浓度及相同作用时间下，RPTS对MNN 45细胞增殖的抑制作用较对MGC80 3作用显著增强（P<0.01）；RPTS作用于两种细胞后荧光显微镜下观察均显示细胞凋亡特征；RPTS使MNK 45细胞增殖被阻滞于G0/G1期，使MGC80 3细胞增殖被阻滞于S期。结论 RPTS能抑制人胃癌MNK 45和MGC80 3细胞增殖，诱导两种肿瘤细胞凋亡，影响两种肿瘤细胞周期时相的分布，但对两种肿瘤细胞株的抑制作用和对细胞周期时相的影响存在差异。     

当代大学生生命意识缺失现象的思考

面对大学生生命意识缺失现象的日益突显,本文认为,生命意识缺失是一种特殊的心理危机,也是一种异常的心理现象。生命意识缺失现象是多种因素交互作用而导致的结果。文章着重从心理健康教育和危机干预的角度来寻找对策,以促进大学生生命意识健康发展,减少生命意识缺失现象的发生。     

犯罪要素体系化比较

犯罪要素应遵循裁判过程予以序化,形成由客观到主观的阶层递进模式,中国刑法犯罪构成体系可在借鉴大陆法系递进式犯罪论基础上,对通说＂四要件＂犯罪构成体系予以分解重构,使传统平行结构体系融入递进因素,以犯罪构成体系的变革推动刑法理论发展与司法改革实践。     

韩国刑事“量刑基准制度”推进动向及“量刑调查”主导权之争考察

“量刑基准制度”是指法官在对刑事被告人定罪量刑时可供参照的具体客观的基准。作为韩国法务部“变化战略计划”重要课题内容,韩国近年来开始着手推进刑事“量刑基准”改革方案。本文将通过对韩国“量刑基准制度”引进背景、量刑委员会及“量刑基准”促进动向及方案内容、韩国法院及法务部量刑调查主导权之争及韩国“量刑基准”制定的基本经验等进行考察,以期对我国刑事量刑制度研究提供可资借鉴的依据。     

对采矿权客体的系列甄别

通常认为采矿权的客体是:不特定的、包括地下部分在内的组合体、抽象的矿产资源、地壳中的不动产等.由此而将采矿权归属矿业权、特许物权、准物权等形成虚无的物权体系.通过逐一甄别认为,采矿权的客体是单一而特定的矿产,采矿权人对矿产支配的权利状态具有自物权属性.     

关于《婚姻法》离婚条件的思考

我国2001年修改了婚姻法,其中关于"离婚条件"的内容曾在全国引起争议.本文对其中的一些条款及其立法思想提出质疑.从理论、历史的角度分析了这一问题,并对婚姻立法提出了自己的看法.     

论渎职犯罪中的共犯关系——有身份者与无身份者的罪名确定

无身份者可以构成渎职犯罪的狭义共犯;无身份者不能构成渎职犯罪的共同正犯。身份犯与非身份犯罪名确定出现规则缺失的根本原因,在于没有详细区分渎职犯罪与贪污贿赂型职务犯罪的条文结构差异。渎职犯罪共生模式包括静止型与动态型。应当将徇私舞弊、滥用职权类渎职罪的专属性特点归纳为渎职犯罪共生模式,结合犯罪构成原理、共犯原理、竞合犯原理,区分不同情况细化讨论,从本质上解决渎职犯罪中有身份者与无身份者共同犯罪罪名的确定问题。     

盗窃正版软件标签行为性质界定——以上海首例盗窃COA标签案为视角

COA标签为正版操作系统的合法凭证。盗窃COA标签的行为不涉及侵犯著作权的问题,不构成侵犯著作权罪。盗窃COA标签的犯意不在于故意毁坏财物,不构成故意毁坏财物罪。COA标签载有一定的经济价值,其属性决定其可以成为盗窃罪的犯罪对象,因此,盗窃正版软件标签的行为应以盗窃罪论处。     

行使财产权行为犯罪构成判定

在判断行使财产权行为是否构成夺取罪方面存在司法上的困惑和理论上的缺失.传统观点认为,行使财产权行为不具有侵犯他人所有权的客体,没有非法占有的目的,而且是一种自助行为,不构成夺取类犯罪.在社会主义市场经济下的夺取罪构成要件需要进行重构.夺取罪犯罪客体采用以平稳占有说为基础的财产秩序.行使财产权利行为的非法占有目的虽然具有债权的法律依据,但其夺取行为和手段不符合法律规定.自助行为的成立需在主体、标的、主观目的、紧迫性和手段强度上符合要求.因此,行使财产权行为应构成夺取罪,除非其符合自助行为阻却违法的条件.     

对我国刑罚目的的再思考

刑罚目的是刑罚理论的核心,对刑罚目的的选择直接影响刑罚的制定、适用和执行。刑罚目的所体现的法的价值理念应与国家所追求的法的价值理念相适应。预防论的刑罚目的理论因其固有缺陷并不符合我国国情,而报应论的刑罚目的理论体现了对正义、公平、保障人权的价值理念的追求,符合我国的法的价值追求,适合我国国情,应当作为我国的刑罚目的。     

适用公司法人人格否认制度若干具体问题探讨

新公司法确立了公司法人人格否认制度，出台适用这项制度的具体规定就显得十分紧迫。从司法实务层面，分析了应当否认公司法人人格的情形、公司法人人格否认后归责原则与责任承担、否认公司法人人格的举证责任、否认公司法人人格的主体和程序等问题。