新藤黄酸对人表皮癌细胞A431增殖和凋亡的影响

目的 观察新藤黄酸（gambogenic acid,GNA）对人表皮癌细胞A431增殖和凋亡的影响。〖JP〗方法 以体外培养的人表皮癌A431细胞株为研究对象,采用甲基噻唑基四唑检测GNA对A431细胞增殖活性的影响;倒置显微镜下观察GNA对A431细胞株细胞形态的影响;荧光显微镜下观察GNA对Hoechst 33342染色的A431细胞凋亡的影响;采用流式细胞仪检测膜联蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素/碘化丙碇双染的A431细胞的凋亡率。结果 随着GNA剂量的增大,GNA对A431细胞增殖活性的抑制作用增强。倒置显微镜和荧光显微镜下观察显示,GNA作用的A431细胞形态发生明显的变化并出现显著的凋亡特征。流式细胞仪检测显示A431细胞凋亡率随着GNA作用剂量的增大而升高。结论 0.75~12.0 μmol/L GNA能够剂量依赖性地抑制A431的增殖。     

黄芩苷对高糖环境下肾小球系膜细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察高糖环境下黄芩苷对肾小球系膜细胞株HBZY- 1增殖和凋亡的影响。方法 采用MTT法观察高糖环境下3种接种浓度的肾小球系膜细胞株HBZY- 1的生长情况，确定该细胞的最佳接种浓度和用药时间点，继而采用MTT法检测黄芩苷对肾小球系膜细胞增殖的影响；运用倒置荧光显微镜观察黄芩苷对肾小球系膜细胞形态的影响；采用流式细胞仪检测不同浓度黄芩苷对肾小球系膜细胞凋亡的影响。结果 高糖环境下，肾小球系膜细胞的最佳接种浓度是2×103/mL，最佳用药时间是细胞培养48 h后。随着浓度升高，黄芩苷抑制HBZY- 1细胞增殖的作用增强。流式细胞仪检测结果显示，高糖环境下，肾小球系膜细胞总凋亡率随着黄芩苷作用剂量的增大而升高，黄芩苷浓度为6.25 μmol/L时，HBZY- 1细胞的总凋亡率与模型对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）；当黄芩苷浓度增至12.5 μmol/L时，HBZY- 1细胞的总凋亡率开始显著大于模型对照组（P<0.05）。结论 黄芩苷能够抑制高糖环境下肾小球系膜细胞株HBZY- 1的增殖，在一定浓度范围内呈现明显的量效关系。     

新藤黄酸对人胃癌SGC-7901细胞增殖抑制 和诱导凋亡作用的研究

目的 观察不同浓度新藤黄酸（gambogenic acid,GNA）对人胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响。方法 倒置光学显微镜下观察不同浓度GNA处理SGC-7901细胞24 h后细胞形态的变化;采用MTT法检测不同浓度（0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、32.0 μmol/L）GNA处理24 h后人胃癌SGC-7901细胞活力的变化;Annexin Ⅴ-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测凋亡相关蛋白p53和Caspase-9的表达水平。结果 MTT检测结果表明,GNA对人胃癌SGC-7901细胞的生长和增殖有抑制作用,并随着GNA浓度的增加细胞活力明显下降。流式细胞仪检测结果提示,GNA诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡,随着GNA浓度增加,凋亡率逐渐增加。Western blot表明p53和Caspase-9蛋白表达水平呈浓度依赖性升高。结论 GNA能诱导人胃癌SGC-7901细胞的凋亡。     

新藤黄酸通过内质网应激诱导人结肠癌HCT116细胞凋亡的研究

目的 研究新藤黄酸（gambogenic acid,GNA）诱导人结肠癌HCT116细胞凋亡的机制。方法 采用不同浓度的GNA作用细胞24 h,对照组是相同浓度GNA加内质网应激抑制剂4-苯基丁酸（4-phenylbutyric acid,4-PBA）共同作用HCT116细胞24 h。采用甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）染色测定两组细胞增殖抑制率的差异,采用吖啶橙（acridine orange,AO）和溴化乙锭（ethidium bromide,EB）染色观察细胞的形态学变化,采用膜联蛋白Ⅴ（Annexin Ⅴ, AV）-异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate, FITC）/碘化丙碇（propidium iodide, PI）双重染色检测细胞凋亡率。结果 内质网应激抑制剂4-PBA可以缓解GNA对HCT116细胞增殖的抑制作用;AO/EB染色后荧光显微镜观察发现GNA作用的细胞具有凋亡特征;流式细胞仪检测显示4-PBA可降低HCT116细胞的凋亡率。结论 GNA能抑制人结肠癌细胞HCT116增殖,诱导细胞凋亡,其诱导细胞凋亡的作用可能与内质网应激途径有关。     

新藤黄酸与细胞外信号调节激酶抑制剂PD98059联合应用对肺腺癌A549细胞生长的影响

［摘要］目的 研究新藤黄酸（Gambogenic acid,GNA）与细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated kinase, ERK)特异性抑制剂PD98059联合应用对肺腺癌A549细胞生长的影响。方法 新藤黄酸与ERK特异性抑制剂PD98059处理肺腺癌A549细胞，倒置显微镜观察细胞形态变化；甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium, MTT）法检测细胞存活率；流式细胞仪检测细胞内活性氧的变化；蛋白印迹法（Western blot）检测ERK、p ERK蛋白的表达。结果 MTT法结果表明GNA在2.5 μmol/L对肺腺癌A549细胞的增殖有抑制作用；与PD98059合用24 h，GNA的抑制作用更加明显。倒置显微镜观察显示GNA作用肺腺癌A549细胞24 h后，细胞固缩变圆，体积变小，部分细胞呈半贴壁状态；GNA和抑制剂PD98059合用后，多数细胞固缩变圆，脱落，并悬浮于培养液中；少数细胞体积增大、肿胀、破裂呈坏死状。流式细胞仪检测结果表明，20 μmol/L PD98059 + 2.5 μmol/L GNA共同作用于A549细胞24 h后，与GNA 2.5 μmol/L组比较细胞内活性氧生成增加。Western blot法检测表明，PD98059和GNA联合作用A549细胞24 h后，p-ERK 蛋白表达与GNA组比较显著降低。结论 GNA能诱导肺腺癌A549细胞凋亡，联合应用ERK抑制剂PD98059后可减少ERK蛋白的活化，增加肺腺癌A549细胞的凋亡；结果初步表明GNA诱导肺腺癌A549细胞的凋亡可能与调节ERK信号通路有关。     

丹皮酚通过抑制线粒体氧化应激防止1-甲基-4-苯基吡啶离子损伤SH-SY5Y细胞

目的 探究丹皮酚（Paeonol，Pae）防止1-甲基-4-苯基吡啶离子（1-methyl-4-phenyl pyridine, MPP+）损伤神经细胞的机制。方法 采用MPP+作用于人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y建立神经细胞损伤模型。采用甲基噻唑基四唑染色法检测细胞活力，采用流式细胞仪检测细胞内活性氧（reactive oxygen species, ROS）水平，采用罗丹明123染色流式细胞仪分析SH-SY5Y细胞线粒体膜电位的改变，采用Western blot法分析线粒体细胞色素C的表达。结果 0.1~10 μmol/L Pae可以剂量依赖性地抑制MPP+诱导的SH-SY5Y细胞的凋亡；10 μmol/L Pae能够升高细胞线粒体膜电位，减少MPP+引起的细胞内ROS的产生，降低细胞色素C的表达。结论 Pae可防止MPP+损伤SH-SY5Y细胞，其保护作用可能与减少SH-SY5Y细胞内ROS生成，增强SH-SY5Y细胞清除自由基的能力以及提高SH-SY5Y细胞内线粒体膜电位水平有关。     

黄芩苷诱导人乳腺癌细胞株MDA-MB-231凋亡作用的研究

目的:探讨植物雌激素结构类似物黄芩苷诱导人乳腺癌雌激素受体阴性细胞株MDA-MB-231(ER-)凋亡的作用.方法:MTT法测定不同剂量黄芩苷对MDA-MB-231细胞株增殖的抑制作用;透射电镜检测细胞凋亡及黄芩苷的作用;流式细胞术分析黄芩苷对MDA-MB-231细胞周期变化的影响;RT-PCR技术分析黄芩苷对MDA-MB-231细胞bcl-2、bax mRNA水平表达的影响.结果:在一定剂量范围内,黄芩苷对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用呈时效、量效关系,IC50为151 μmol/L;透射电镜结果显示黄芩苷作用细胞48 h后出现明显的凋亡现象,流式细胞仪检测结果显示细胞凋亡率随着黄芩苷的浓度增加而增大,并阻滞细胞于G2/M期;RT-PCR结果表明,黄芩苷作用细胞后bax mRNA水平的表达增加而bcl-2的表达降低. 结论:黄芩苷可以抑制MDA-MB-231细胞的增殖,诱导细胞凋亡的发生,可能是通过调节bcl-2、bax的表达和干涉细胞周期而发挥诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的作用.     

天麻素通过下调ERK1/2-p38信号通路保护谷氨酸损伤的PC12细胞

目的 研究天麻素（gastrodin，Gas）通过调控ERK1/2-p38信号通路保护谷氨酸损伤的PC12细胞。方法 建立谷氨酸损伤的PC12细胞模型；甲基噻唑基四唑比色法测定细胞活力；Hochest 33258染色荧光显微镜观察细胞凋亡形态；罗丹明123染色流式细胞术检测细胞线粒体膜电位；Western blot法检测细胞内p38、ERK1/2、p-p38、p-ERK1/2蛋白表达。结果 天麻素明显抑制谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡，在0.1~10 μmol/L剂量范围内呈一定的量效关系；天麻素升高谷氨酸损伤引起的细胞线粒体膜电位的降低，下调p-p38、p-ERK1/2蛋白的表达。结论 天麻素对谷氨酸损伤的PC12细胞具有保护作用，其机制可能与升高线粒体膜电位水平，下调p-p38、p-ERK1/2蛋白表达，抑制细胞凋亡有关。     

新藤黄酸对黑色素瘤B16细胞凋亡的作用

目的 探讨新藤黄酸（gambogenic acid,GNA）对小鼠黑色素瘤B16细胞凋亡的影响。方法 用不同浓度的GNA培养B16细胞24 h,倒置显微镜下观察细胞形态;采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定GNA对B16细胞增殖的抑制作用;荧光显微镜观察吖啶橙/溴化乙锭（acridine orange/ethidium bromide,AO/EB）染色后细胞凋亡;采用膜联蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染,流式细胞仪检测B16细胞凋亡。结果 GNA作用B16细胞后,细胞的抑制率随着药物浓度的增加而升高;AO/EB染色荧光显微镜观察显示GNA处理的B16细胞出现了典型的凋亡特征;流式细胞仪检测显示GNA处理的B16细胞随着药物浓度的增大凋亡率随之上升。结论 GNA在一定的范围内,能够浓度和时间依赖性地通过诱导细胞凋亡抑制小鼠黑色素瘤B16细胞的增殖。     

苓桂术甘汤含药血清对过氧化氢诱导的乳鼠原代心肌细胞氧化应激损伤及细胞凋亡的影响

目的 观察苓桂术甘汤含药血清对H2O2诱导的心肌细胞氧化应激损伤及细胞凋亡的影响。方法 建立H2O2诱导的心肌细胞氧化应激损伤模型,将心肌细胞随机分为正常对照组、H2O2模型组、空白大鼠血清（20%）组、苓桂术甘汤含药血清（5%、10%、20%）组,用苓桂术甘汤含药血清（5%、10%、20%）,分别预处理心肌细胞12 h后,加入100 μmol/L H2O2继续培养6 h,用MTT法测定心肌细胞存活率,比色法检测乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化酶（glutathione peroxidase ,GSH- Px）活性及丙二醛（malonic dialdehyde,MDA）水平,用荧光核染色法观察细胞凋亡形态学变化,流式细胞术（Annexin Ⅴ- FITC/PI）检测细胞凋亡率,荧光探针法测定氧自由基水平。结果 与正常组比较,模型组心肌细胞活力明显降低（P<0.05）,氧自由基、LDH活性及MDA水平均显著升高（P<0.05）,SOD及GSH- Px活性均显著降低（P<0.05）,细胞核浓染数目增加,细胞凋亡率明显升高（P<0.05）;与模型组比较,苓桂术甘汤含药血清组心肌细胞活力明显升高（P<0.05）,GSH- Px、SOD活性均显著升高（P<0.05）,LDH活性,氧自由基、MDA水平均显著降低（P<0.05）,心肌细胞核浓染减少,细胞凋亡率明显降低（P<0.05）。结论 苓桂术甘汤能够清除细胞内氧自由基,抑制心肌细胞凋亡,增强细胞活性,对心肌细胞氧化应激损伤具有保护作用。     

犯罪要素体系化比较

犯罪要素应遵循裁判过程予以序化,形成由客观到主观的阶层递进模式,中国刑法犯罪构成体系可在借鉴大陆法系递进式犯罪论基础上,对通说＂四要件＂犯罪构成体系予以分解重构,使传统平行结构体系融入递进因素,以犯罪构成体系的变革推动刑法理论发展与司法改革实践。     

论渎职犯罪中的共犯关系——有身份者与无身份者的罪名确定

无身份者可以构成渎职犯罪的狭义共犯;无身份者不能构成渎职犯罪的共同正犯。身份犯与非身份犯罪名确定出现规则缺失的根本原因,在于没有详细区分渎职犯罪与贪污贿赂型职务犯罪的条文结构差异。渎职犯罪共生模式包括静止型与动态型。应当将徇私舞弊、滥用职权类渎职罪的专属性特点归纳为渎职犯罪共生模式,结合犯罪构成原理、共犯原理、竞合犯原理,区分不同情况细化讨论,从本质上解决渎职犯罪中有身份者与无身份者共同犯罪罪名的确定问题。     

盗窃正版软件标签行为性质界定——以上海首例盗窃COA标签案为视角

COA标签为正版操作系统的合法凭证。盗窃COA标签的行为不涉及侵犯著作权的问题,不构成侵犯著作权罪。盗窃COA标签的犯意不在于故意毁坏财物,不构成故意毁坏财物罪。COA标签载有一定的经济价值,其属性决定其可以成为盗窃罪的犯罪对象,因此,盗窃正版软件标签的行为应以盗窃罪论处。     

当代大学生生命意识缺失现象的思考

面对大学生生命意识缺失现象的日益突显,本文认为,生命意识缺失是一种特殊的心理危机,也是一种异常的心理现象。生命意识缺失现象是多种因素交互作用而导致的结果。文章着重从心理健康教育和危机干预的角度来寻找对策,以促进大学生生命意识健康发展,减少生命意识缺失现象的发生。     

对我国刑罚目的的再思考

刑罚目的是刑罚理论的核心,对刑罚目的的选择直接影响刑罚的制定、适用和执行。刑罚目的所体现的法的价值理念应与国家所追求的法的价值理念相适应。预防论的刑罚目的理论因其固有缺陷并不符合我国国情,而报应论的刑罚目的理论体现了对正义、公平、保障人权的价值理念的追求,符合我国的法的价值追求,适合我国国情,应当作为我国的刑罚目的。     

对采矿权客体的系列甄别

通常认为采矿权的客体是:不特定的、包括地下部分在内的组合体、抽象的矿产资源、地壳中的不动产等.由此而将采矿权归属矿业权、特许物权、准物权等形成虚无的物权体系.通过逐一甄别认为,采矿权的客体是单一而特定的矿产,采矿权人对矿产支配的权利状态具有自物权属性.     

适用公司法人人格否认制度若干具体问题探讨

新公司法确立了公司法人人格否认制度，出台适用这项制度的具体规定就显得十分紧迫。从司法实务层面，分析了应当否认公司法人人格的情形、公司法人人格否认后归责原则与责任承担、否认公司法人人格的举证责任、否认公司法人人格的主体和程序等问题。     

韩国刑事“量刑基准制度”推进动向及“量刑调查”主导权之争考察

“量刑基准制度”是指法官在对刑事被告人定罪量刑时可供参照的具体客观的基准。作为韩国法务部“变化战略计划”重要课题内容,韩国近年来开始着手推进刑事“量刑基准”改革方案。本文将通过对韩国“量刑基准制度”引进背景、量刑委员会及“量刑基准”促进动向及方案内容、韩国法院及法务部量刑调查主导权之争及韩国“量刑基准”制定的基本经验等进行考察,以期对我国刑事量刑制度研究提供可资借鉴的依据。     

关于《婚姻法》离婚条件的思考

我国2001年修改了婚姻法,其中关于"离婚条件"的内容曾在全国引起争议.本文对其中的一些条款及其立法思想提出质疑.从理论、历史的角度分析了这一问题,并对婚姻立法提出了自己的看法.     

教育权可诉性的理论透视

我国几起学生状告学校的行政诉讼案一度成为传媒的热点 ,也向法学界提出了新的问题 :学生不服学校处分能否提起行政诉讼 ?校方处分学生的行政行为能否成为诉讼标的 ?本文作者就此问题提出了自己见解。