体内痕量乌头碱的高相液相色谱测定

<正> 乌头碱是乌头属植物中所含的二萜双酯型生物碱类中的一种,成人口服纯品致死量仅约5mg,由乌头属植物引起的中毒与死亡屡见报导但一直缺乏较好的检测方法,使中毒后体内乌头碱分布与分解规律的研究难以进行,也给这类中毒案件的法医学鉴定带来一定困难。近年来应用HPLC分离检测生药中乌头碱类生物碱的方法已有报导。本文应用HPLC     

乌头属植物生物碱高效液相色谱研究Ⅱ

目的 建立高效液相色谱法测定多种乌头属植物生物碱的方法 .方法 XTerraTMRP185μm,(250×4.6mm)色谱柱;流动相为乙腈:30mmol/L碳酸氢铵梯度洗脱;流速1.0ml/min;检测波长233nm.结果 该方法可成功应用于黄草乌、紫草乌、短距牛扁、保山乌头4种乌头属植物生物碱成分分析.结论 本研究结果提示乌头属植物中毒案件检验应注意是否含有8-O-乙酰基-14-茴香酰基生物碱.     

乌头属植物生物碱高效液相色谱研究

目的建立高效液相色谱法测定多种乌头属植物生物碱的方法。方法XTerraTMRP185μm,(250mm×4.6mm)色谱柱;流动相为乙腈∶30mmol/L碳酸氢铵梯度洗脱;流速1.0ml/min;检测波长233nm。结果该方法可成功应用于5种乌头属植物12个样品中生物碱成分分析。结论本研究结果提示乌头属不同种植物中生物碱成分及含量差异显著,因此为确保该类中药材用药安全,提高临床疗效,必须建立严格的药材质量控制体系。     

乌头中剧毒生物碱的提取分离

目的从乌头属植物中提取分离剧毒生物碱乌头碱、中乌头碱、次乌头碱;方法酸性水溶液提取,碱化后中性氧化铝柱层析,IR、EI-MS确认结构;结果利用该方法提取以上3种生物碱得到的回收率与碱性苯溶液法相似。结论该方法所用试剂成本低、毒性小,适用于制备乌头碱、中乌头碱、次乌头碱对照品。     

乌头类生物碱对心肌的毒性作用及分子毒理学研究进展

乌头属植物是被子植物亚门毛茛科中一类重要的有毒植物,也是我国最早有记载的药用有毒植物之一;其块根中多含有剧毒的二萜类双酯型生物碱?乌头碱,因个体差异、用法不当以及误服或投毒等原因而发生乌头中毒、甚至死亡的报道屡见不鲜。目前,对乌头碱的研究多局限在临床救治方面,缺乏对乌头碱毒性作用机制研究。本文参考国内外相关文献资料,对乌头碱的心肌细胞毒性作用机制进行了综述。     

乙醇-乌头碱致心律失常的毒理分子机制研究进展

乌头属植物是广泛使用的中草药代表之一,乌头碱是其中最主要的毒性成分,主要引起多种心律失常而致死。急性乙醇摄入也可引起心律失常。法医学实践中常遇到乌头类药酒引起的中毒案例。这两者的心肌毒性分子机制有较多共通点,均对心肌细胞膜钠通道、钙通道及钾通道等产生影响。本文通过综述近年来乙醇、乌头碱心脏毒性机制的研究报道,分析讨论乙醇-乌头碱可能共同影响的心肌细胞通道蛋白,为联合中毒致心律失常的分子机制研究提供思路与参考。     

LC-MS~n分析新乌头碱在兔尿液中的代谢产物

乌头属(aconitum)中药临床应用广泛,治疗风湿痹痛等症疗效显著。但该属中药所含乌头类生物碱既是有效成分又是剧毒成分,其治疗量与中毒、致死量接近[1],因此服用过量、误服或投毒等都可引起乌头类生物碱中毒[2,3]。乌头碱中毒无特异性临床表现,且在体内迅速分解,给检测带来困难。在乌头属中药中新乌头碱(mesaconitine)多与乌头碱(aconi-tine)共存,且新乌头碱含量高于乌头碱。本文应用LC-MSn分析家兔灌服新乌头碱中毒死亡前尿液中的代谢产物,为检测新乌头碱的代谢产物提供新方法。1材料与方法1.1仪器与材料Finnigan公司LCQ液相色谱-质谱…     

短柄乌头急性中毒——乌头碱在大鼠体内分布的研究

本文用高效液相色谱法检测了大白鼠短柄乌头急性中毒后(LD_(50)剂量灌胃),乌头碱在心、肝、肾、血、脑内的含量分布。结果表明;体内乌头碱含量甚微或检不出。30例大鼠LD_(50)剂量灌胃后,16例2h内中毒死亡。其肝、肾内的乌头碱检出率明显高于心、血、脑,且中毒表现明显。另14例于2h整处死,其肝、肾、血中检出较高。16例2h内死亡组肝中乌头碱含量分析提示乌头碱在体内代谢很快。此结果为法医工作中乌头碱中毒案件调查、检材提取、毒物分析结果的评价提供了一定的依据。     

乌头中剧毒生物碱的提取分离（Ⅱ）

目的从短距牛扁中提取分离含C14 茴香酰基剧毒二萜生物碱。方法采用 95 %乙醇提取 ,酸性水溶液溶解醇提物 ,脱脂并碱化后经硅胶柱层析及制备薄层分离 ,以UV、HPLC MS、13CNMR方法确证结构。结果利用该方法可对短距牛扁中黄草乌碱丙、粗茎乌碱甲、滇乌碱进行有效提取。结论本研究提示对乌头属植物中毒案件进行检验时仅以乌头碱类生物碱 (C14 苯甲酰基 )作为监测成分是不够的 ,还应注意检材中是否含有滇乌碱型生物碱成分。     

九种有毒植物中毒的尸检报告

本文报道17例有毒植物中毒尸检资料(毒蕈4例、苍耳子3例、栝楼2例、乌头类3例、雷公藤1例、钩吻1例、夹竹桃1例、豆薯子1例,野山薯1例),其中意外15例,自杀2例。着重分析了这些有毒植物对机体选择性毒作用部位。根据病理变化探讨中毒机理和死因,并综合讨论了有关的法医学问题。根据作者的经验,在法医学尸体检验和鉴定中应重视对尸体系统全面的法医病理学检验,以及请有关专家对可疑的有毒植物进行品种鉴定,有毒植物中毒是法医学鉴定中较常遇到而又较困难的问题之一,应引起进一步重视。     

寺庙住持自制药酒 本想治病致人死亡

2012年2月14日,北京市昌平区法院公开开庭审理被告人于某非法行医一案。公诉机关指控称,被告人于某是北京市昌平区流村镇瓦窑村平安寺住持,他于2011年4月至同年7月2日间,在北京市昌平区流村镇瓦窑村平安寺内,在未取得医生执业资格的情况下,为张某自制含有乌头属植物成份的治疗风湿、类风湿的药酒。张某服药后出现中毒现象,后经抢救无效死亡。经     

血液中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱的LC/MS/MS分析

目的　建立血液中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱的LC/MS/MS分析方法。方法　用 1%三氯乙酸 乙腈萃取血液样品 ,采用电喷雾离子源 ,正离子MRM扫描。结果　本方法线性相关系数r≥ 0 992 2。最低检测浓度(LOQ ,S/N =5 )分别为乌头碱 2 0ng/ml ,次乌头碱 0 5ng/ml ,新乌头碱 0 5ng/ml。空白血添加回收率 91 2 5 %～10 3 1%,变异系数 (CV ,n =6) <10 93 %。结论　LC/MS/MS法灵敏可靠 ,样品处理快速简便 ,适用于血液中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱的检测。     

高效液相色谱法分离测定药酒中乌头碱的含量

目的建立药酒中乌头碱的高效液相色谱快速分析方法。方法以白酒添加乌头碱对照品对药酒样品的前处理方法、仪器测试条件、线性范围、精密度、回收率进行全面考察,建立定量分析方法。对药酒中所含乌头碱的浓度进行测定。结果该方法乌头碱在药酒中的线性范围是0.45～9.0μg·mL-1;日内、日间精密度分别小于3.1%和4.7%;回收率在(97.3±2.8)%以上。结论所建方法实用、便捷,可对药酒中乌头碱的含量进行快速检测。     

高效液相色谱法快速分离测定血浆中的乌头碱

目的建立血液中乌头碱的高效液相色谱快速分析方法。方法以空白人血浆添加乌头碱标准品对血液样品的前处理方法、仪器测试条件、线性范围、精密度、回收率进行全面考查,建立乌头碱定量分析方法。对血液中所含乌头碱的浓度进行测定。结果该方法在血液中的线性范围是0.1~5.0μg/m l;最低检测浓度为0.1μg/m l;日内、日间精密度分别小于3.7%和4.5%;回收率在(97.0±4.1)%以上。结论所建方法实用、便捷,可对血液中乌头碱的含量进行快速测定。     

乌头碱对新生大鼠心肌细胞DNA损伤的影响

目的探讨乌头碱对新生大鼠心肌细胞DNA损伤的影响。方法新生SD大鼠20只,随机分为4组,取心室肌以差速贴壁法原代培养心室肌细胞。培养第6天,制成密度为2×105个细胞/mL的细胞悬液,分别加入乌头碱混合液至终浓度为0.1、0.5、1、2μmol/L,染毒30m in;采用彗星电泳技术及CASP分析软件,检测不同浓度乌头碱染毒后心室肌细胞DNA损伤程度。结果心肌细胞被不同浓度乌头碱染毒后,尾部DNA含量、彗尾长度、尾矩、O live尾矩均随乌头碱浓度增加而升高,头部DNA含量则逐渐降低,与对照组相比,有显著性差异(P<0.01);乌头碱染毒剂量越大,心肌细胞DNA损伤越严重。结论乌头碱染毒引起细胞DNA断裂损伤呈明显的剂量—效应关系,推测细胞DNA损伤是乌头碱毒作用机制之一。     

乙醇与乌头碱联合染毒对大鼠心肌细胞RYR2的影响

目的研究不同浓度乙醇与乌头碱联合染毒对大鼠心室肌细胞RYR~2蛋白表达的影响。方法用优化的方法进行新生大鼠心室肌细胞原代培养,设置4组实验组,分别为A、B、C、D组,即分别用1μmol/L乌头碱、5mmol/L乙醇+1μmol/L乌头碱、50mmol/L乙醇+1μmol/L乌头碱以及100mmol/L乙醇+1μmol/L乌头碱进行染毒,同时设立对照组(E组)。染毒1h后,用Western blot技术检测RYR~2蛋白含量,重复实验,将对所得数据进行统计分析。结果 1μmol/L乌头碱作用1h,使培养的大鼠心肌细胞RYR~2蛋白量增加;5mmol/L乙醇、50mmol/L乙醇分别与乌头碱联合染毒组中RYR~2蛋白表达量均较单独乌头碱染毒组低;100mmol/L乙醇-乌头碱联合染毒组RYR~2蛋白量与单独乌头碱染毒组相较未见明显差异。结论乙醇-乌头碱联合染毒对RYR~2的蛋白量有明显影响,不同浓度乙醇与乌头碱联合染毒对RYR~2的影响效果不一致,低浓度乙醇能拮抗乌头碱引起的RYR~2含量增加,随着乙醇浓度逐渐升高,拮抗作用逐渐减弱,且有向协同作用转化的趋势。     

乌头碱中毒大鼠心肌酶的细胞化学研究——线粒体琥珀酸脱氢酶和细胞色素C氧化酶的超微结构定位

<正> 本文用细胞化学手段,对乌头碱中毒大鼠心肌线粒体的琥珀酸脱氢酶(SDH)、细胞色素C氧化酶(CCO)作超微结构定位,在电子显微镜下直接观乌头碱中毒后SDH、CCO的定位和活性的变化,发现乌头碱抑制了心肌大多数线粒体的SDH活性,并引起心肌线粒体CCO     

植物类物证DNA遗传标记鉴定系统的建立

目的建立一套以DNA遗传标记为基础的植物类物证检材的种属鉴定系统。方法收集上海地区常见植物200例,从形态学上确定物种,设计扩增rbc L、mat K、ITS基因片段的引物,用琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物并测序,评估三个标记的通用性和识别能力。结果在检测成功率方面,rbc L(99.5%)mat K(92.5%)ITS(86.0%);rbc L+mat K组合检测优于单rbc L或单mat K的识别能力,其识别能力主要在属及属以上水平;ITS检测结果不稳定,不适合作为单标记,但可作为有力补充,rbc L+mat K+ITS组合的识别能力明显高于rbc L+mat K组合,对大部分植物样本种属鉴定能够达到属及属以下水平。结论以rbc L+mat K+ITS组合作为标记的鉴定系统对植物类物证有良好的通用性,其识别能力对大部分植物样本能够达到属及属以下水平。     

生物检材中乌头碱的LC-MS/MS快速分析

目的应用高效液相色谱-质谱法对生物检材中乌头生物碱等有毒成分进行快速分析。方法取全血样品经乙腈-甲醇(5:1 v/v)提取,使用Agilent Zorbax SB C18(2.1 mm×50 mm,1.8μm)色谱柱,以0.1%甲酸溶液-乙腈(60:40 v/v)为流动相等度洗脱。在多反应监测模式下测定全血样品中乌头生物碱等有毒成分。结果乌头碱、次乌头碱和中乌头碱的保留时间为0.73 min、0.77 min和0.63 min;用于定量分析的离子对分别为m/z 646.4→586.4(乌头碱)、616.1→556.5(次乌头碱)和632.4→572.1(中乌头碱)。乌头碱在0.1~250 ng/m L内线性关系良好,相关系数(r)≥0.9987,最低检出限0.1ng/m L,精密度考查其变异系数(CV)5.42%(n=6),血液中乌头碱提取回收率不小于90%。结论本文建立的高效液相色谱-质谱法快速、简便、灵敏,适用于天然药毒物检验。     

药酒中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱的LC/MS/MS分析

目的应用高效液相色谱-质谱联用法对涉案药酒中有毒成分乌头碱、次乌头碱、新乌头碱快速定量分析。方法样品过膜后用乙腈稀释500倍,使用Waters ACQUITY UPLC BEN C18(100 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱,以乙腈-10 mmol/L碳酸氢铵溶液(pH=10)为流动相梯度洗脱,多反应监测模式下测定涉案药酒中乌头生物碱的含量。设定方法下乌头碱、次乌头碱、新乌头碱的保留时间分别为5.10 min、5.64 min、4.58 min,用于定量分析的离子对(m/z)分别为646.6-586.6、616.6-556.6、632.7-572.6。在1~200 ng/mL内,乌头碱线性回归方程为Y=343.8X+38901(R2=0.9995);在100~1000 ng/mL内,次乌头碱线性回归方程为Y=3.817X-357.579(R2=0.9991);在0.5~10 ng/mL内,新乌头碱线性回归方程为Y=719.562X+128.748(R~2=0.9995)。用此方法检测出涉案药酒中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱含量分别为71.85,415.86,1.49μg/mL。结论建立的高效液相色谱-质谱法可用于药酒中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱的快速测定。