PLGA纳米微球作为DNA疫苗载体的研究进展

聚乳酸-羟基乙酸共聚物(poly lactic-co-glycolic acid,PLGA)是一种生物相容性与可降解性优良的纳米材料,作为DNA疫苗载体,其具有缓释、靶向、保护DNA质粒不被破环、包封携带能力强、易于从溶酶体中逃逸等优点。PLGA是一种应用前景良好的DNA疫苗载体。本文综述了PLGA作为DNA疫苗载体的各种特性与PLGA-DNA疫苗诱发免疫反应的机制。     

乙型脑炎病毒E基因自杀性DNA疫苗的构建及其免疫应答

为探讨自杀性DNA疫苗在乙型脑炎疫苗开发中的可能性,将乙型脑炎病毒(JEV)E基因片段插入到自杀性DNA疫苗载体pSCAl(pS)中,构建了表达E基因的自杀性DNA疫苗质粒pSE.间接免疫荧光试验结果证实,该质粒转染BHK-21细胞后实现了E基因在细胞中的表达.将该疫苗和常规DNA疫苗(pCDE)分别免疫试验小鼠,进行体液免疫和细胞免疫检测.结果表明,在诱导体液免疫方面,pCDE要优于pSE,但pSE却可以诱导更强的细胞免疫反应,这为进一步评价该疫苗的免疫保护效果奠定了基础.     

亚硒酸钠饮水对新城疫免疫雏鸡体液及红细胞免疫功能的影响

硒是人与动物必不可少的一种微量元素,也是一种日益被关注的免疫调节剂,其对人与动物免疫功能的影响是多方面的。一般认为,在动物使用疫苗免疫之前或同时应用硒制剂可提高动物的原发性免疫反应。本试验拟探讨雏鸡在饲喂不缺硒饲料条件下,在新城疫疫苗免疫的同时,以亚...     

CpG ODN增强猪囊尾蚴病疫苗免疫反应的试验研究

依据CpG基序的生物学和免疫学特性 ,人工设计合成了硫代修饰的多种CpGODN序列 ,通过兔、小鼠和猪体进行了与铝胶、2 0 6佐剂和蜂胶佐剂的配伍和比较试验 ,用ELISA法测定加单一佐剂或联合佐剂组疫苗诱导的抗猪囊尾蚴病的抗体含量 (IgG或IgG2a)和效价 ,用MTT淋巴细胞转化试验法测定刺激指数 ,进一步证实了CpG基序的种类、数量和空间结构以及与其他佐剂联合对疫苗免疫反应的影响 ,CpG基序以 1个TpC的 5′端开始 ,紧接着 3个GTCGTT基序 ,基序与基序之间由TpT或T分隔 ,在兔、小鼠和猪都能诱导机体产生强烈的免疫反应特别是细胞免疫反应。     

鸡Akirin2基因对传染性法氏囊病病毒VP2 DNA疫苗免疫反应的影响

为了探讨鸡Akirin2基因对传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2 DNA疫苗诱导的免疫反应的影响,将同时表达VP2蛋白和Akirin2蛋白的重组质粒免疫14日龄SPF鸡,14 d后加强免疫,最后以IBDV BC6-85强毒攻击。结果显示,Akirin2基因能够增强VP2 DNA疫苗诱导的特异性免疫反应,提高外周血淋巴细胞的增殖能力,影响细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-9、IL-10、IL-17和IL-18的表达水平。与单独免疫表达Akirin2蛋白或VP2蛋白的重组质粒对上述细胞因子表达的影响有一定差异。     

畜禽病毒病诊断和免疫预防的现况与展望(续)

在讨论胎儿和新生动物的免疫问题时,必须考虑母源免疫、免疫耐受性和巨噬细胞不成熟等三个因素。胎儿的抗感染能力低于成年动物,因此,可以安全地用于成年动物的某些疫苗,禁用于孕畜,例如蓝舌病疫苗和牛传染性鼻气管炎疫苗,因其经常引起严重的胎儿病变和死亡。但是必须指出,即使是胎儿,也并不是不能产生免疫反应。72日龄的猪胎儿就有产生     

维氏气单胞菌胞外产物免疫反应蛋白的筛选

为筛选维氏气单胞菌胞外产物的免疫反应蛋白,提取维氏气单胞菌TH 0426株胞外产物,利用双向电泳技术对其进行分离,比对蛋白胶与免疫印迹膜上的蛋白反应点,进行质谱鉴定。结果显示,应用免疫蛋白质组学方法筛选维氏气单胞菌胞外产物免疫反应蛋白,共得到24个免疫反应蛋白点,成功鉴定18个,经分析为11种蛋白,分别是肽酶S8、长链脂肪酸转运蛋白、溶血素样毒素、膜蛋白、主要外膜蛋白O mp AⅠ、麦芽糖、ABC底物结合转运蛋白和几种假定蛋白。本研究结果为维氏气单胞菌疫苗的研制奠定了基础。     

小反刍兽疫病毒H和F蛋白多抗原表位的表达及其反应原性

将通过计算机软件预测并通过间接ELISA检测确定的小反刍兽疫病毒(PPRV)H、F蛋白的10个B细胞抗原表位串联,再加上一个外源通用T细胞表位,表位之间用甘氨酸间隔,人工合成一条多抗原表位编码基因序列,将其插入原核表达载体pET30a(+),转化BL21(DE3)诱导表达。结果获得分子质量为19 ku的表达蛋白,该蛋白可与PPRV感染阳性血清发生特异性免疫反应。结果表明人工合成的PPRV多抗原表位编码基因可以在原核表达系统中表达,表达产物具有反应原性,这为研究PPRV抗原表位疫苗奠定了基础。     

抗独特型抗体与寄生虫疫苗的研制

现用的疫苗研究与生产方法,尽管在寄生虫病的防治中有成功的先例,如胎生网尾线虫(Dictyocaulus viviparous)疫苗(Jarrett等,1958;Peacock和Poynter,1980)和禽类球虫疫苗(Rose和Long,1980)。但寄生虫疫苗的研制进展仍是相当缓慢的 (一)生产寄生虫疫苗必须解决的几个方面 1.动物能否对某种寄生虫的感染产生免疫抵抗力,以及这种免疫力是否与动物的年龄等因素有联系。     

动物反转录病毒疫苗的研究现状

反转录病毒能感染多种动物,引起持久性终生感染,对人和动物危害较大。研究安全有效的疫苗对控制病毒的传播具有重要意义。目前,国内外正从不同途径研制反转录病毒疫苗,并有部分疫苗已获得成功。(一)灭活疫苗 这类疫苗当前研究最多,有一些已获得初步成功。Marx等用福尔马林灭活猴反转录病毒-1(SRV-1),以苏氨酸-胞壁酰二肽(TMD)为佐剂免疫恒河猴,可诱导产生中等滴度的中和抗体,使其能防御同源病毒的攻击,表明这种灭活疫苗可用来预防同源反转录病毒引起的免疫抑制(猴艾滋病),由于该疫苗是第一个用于灵长类的反转录病毒疫苗,受到人们的普遍关注。     

胞壁酰二肽类免疫调节剂

胞壁酰二肽(Muramyl Dipeptide,MDP)是分枝杆菌细胞骨架中具有免疫佐剂活性的最小结构单位,可以代替弗氏完全佐剂(FCA)中的整体分枝杆菌,促进机体对外源性抗原的特异性免疫反应。(一)生物活性和应用1.免疫调节作用:MDP在矿物油中能促进不同种属动物对抗原的免疫反应,口服水溶液就能促进抗体生成增加,增强天然疫苗和破伤风类毒素、绿脓杆菌类毒素、乙型肝炎表面抗原(HBSAg)和恶性疟原虫及人工抗原如HBSAg~(16)肽段等的免疫效果。MDP佐剂效力与FCA脂多糖(LPS)或氢氧化铝等相当或稍强。但大剂量多次给药可引起免疫抑制。     

新冠病毒疫苗国际公平分配为何难以实现？

本文使用历史制度主义的分析工具,回溯了全球疫苗与免疫治理领域国际制度的演进过程,并讨论了当前新冠病毒疫苗全球获取机制COVAX为何治理绩效不佳。COVAX的制度设计具有明显的路径依赖特点,承袭了全球疫苗与免疫联盟（GAVI）创造性利用市场机制、激励疫苗生产的做法。21世纪以来,这种安排成为全球疫苗与免疫问题上的主导机制。它虽然能够在一定程度上解决因发展中国家需求上升而加剧的全球疫苗供需失衡问题,但客观上也导致了国际疫苗生产的集中化。在新冠肺炎大流行中,这一制度受到疫苗生产能力有限以及疫苗民族主义的挑战,成功运作的前提被破坏,因此无法完全实现新冠病毒疫苗国际公平分配的目标。     

小反刍兽疫病毒F和H蛋白在CHO细胞中的融合表达及其免疫原性的研究

以小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)疫苗株Nigeria75/1基因序列为基础,构建了融合表达PPRV囊膜蛋白F和H胞外区的真核重组质粒pcDNA3.1-F-H,在悬浮CHO细胞中进行分泌表达。离心收集转染后的细胞培养上清进行亲和层析纯化,纯化样品经Western-blot鉴定,融合蛋白与PPRV阳性血清和His标签抗体都能发生免疫反应。使用纯化后的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,可诱导小鼠体内产生针对PPRV的特异性抗体。上述研究结果为小反刍兽疫新型亚单位疫苗的研制奠定了基础。     

番鸭呼肠孤病毒σC编码基因在sf-9昆虫细胞中的表达

采用RT-PCR方法扩增了番鸭呼肠孤病毒S14株σC蛋白编码基因,将其克隆到pFastBacHTA载体上,经酶切鉴定及测序,筛选出阳性重组载体pFastBacHTA-σC;将pFastBacHTA-σC转化到DH10Bac感受态细胞中,通过蓝白斑和PCR筛选,获得重组转座子rBacmid-σC。在脂质体介导下将rBacmid-σC转染sf-9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBV-σC;SDS-PAGE和Western-blot分析表明,在sf-9细胞中表达了分子质量约37 ku的σC蛋白,该蛋白能与原核表达的σC蛋白免疫小鼠血清发生特异性免疫反应,这为以表达的σC蛋白为抗原的亚单位疫苗的研制奠定了基础。     

重组牛IFN-α对亚洲Ⅰ型口蹄疫亚单位疫苗免疫小鼠的影响

在大肠杆菌BL21(DE3)中分别表达了牛IFN-α基因、亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒(FMDV)VP1和VP1 C末端基因,并纯化了所表达的蛋白。用透析的方法进行蛋白复性后制成油乳剂疫苗,经皮下多点注射免疫小鼠,以MTT法检测小鼠脾淋巴细胞经植物血凝素(PHA)刺激后的增殖反应活性;以液相阻断ELISA检测血清FMDV特异抗体的变化。结果表明,重组VP1(rVP1)和rVP1 C末端蛋白能单独诱发小鼠的体液免疫反应和微量的细胞免疫反应,而与重组牛IFN-α(rBoIFN-α)共同接种的小鼠,体液免疫反应和细胞免疫反应更为明显。     

口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC基因的原核表达及其产物的活性检测

利用分别带有BamHⅠ和HindⅢ酶切位点的引物扩增出FMDV 3ABC基因,将其克隆到pMD18-T载体。经BamHⅠ和SalⅠ酶消化后,克隆到表达载体pGEX-6p-1上,构建重组质粒pGEX-3ABC。将该重组质粒转化到大肠埃希氏菌BL21(DE3)pLysS,经终浓度1 mmol/L的IPTG诱导,获得约70 ku的融合蛋白GST-3ABC。Western-blotting结果显示,表达的融合蛋白GST-3ABC可以与感染FMDV的牛血清发生免疫反应。以纯化的GST-3ABC蛋白为抗原的间接ELISA检测结果与以VP2蛋白为抗原的间接ELISA检测结果相比较,表明,融合蛋白GST-3ABC可以用于鉴别感染FMDV和疫苗免疫的牛血清。     

泰勒焦虫裂殖体疫苗的安全性和免疫性实验

在泰勒焦虫病人工免疫研究的早期工作中,一些作者对含有泰勒焦虫配子体(Gamedocyte)的血液疫苗,曾做了不少的研究。许多人把寄生在红细胞内的配子体,通过甲醛溶液或牛体传代的方法进行致弱,试图制作一种弱毒疫苗,结果证明这种疫苗的安全性和免疫性均不可靠。后期则认为,保护性抗体的产生与裂殖体(Schizont)有关,配子体不能产生抗体。兰州兽医研究所实验了Co~(60)致弱的血液疫苗和裂殖体脏器疫苗,也     

2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)在支原体培养中的应用研究

为了分析细菌培养指示剂2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)在支原体培养中的应用,笔者将牛支原体、丝状支原体山羊亚种、山羊支原体山羊肺炎亚种、绵羊肺炎支原体、鸡毒支原体、肺炎支原体分别接种于含有TTC的改良Thiaucourt’s液体培养基(TTC-MTB)和改良Thiaucourt’s固体培养基(TTC-MTA)中,同时以常规酚红指示剂培养基作为对照,观察支原体在2种培养基中的生长情况,并筛选TTC在培养基中的最适指示浓度。结果显示,与常规酚红指示剂相比较,TTC有更为灵敏的培养指示效果;在固体培养基中,TTC指示的支原体红色菌落更有利于菌落的计数及形态的观察;TTC的最佳使用浓度为0.2 mg/mL。本研究可为支原体培养和优化疫苗生产工艺提供参考。     

鸡柔嫩艾美耳球虫CDPK和鸡IFN-γ重组质粒的构建与体外表达

采用SOE-PCR技术将鸡柔嫩艾美耳球虫CDPK抗原基因与鸡干扰素-γ(IFN-γ)基因用(GGGGS)315个疏水柔性氨基酸接头融合,扩增出IFN-γ-CDPK融合基因,将其克隆到pMAL-p2X载体上,构建了重组原核表达质粒pMAL-IFN-γ-CDPK,用IPTG诱导表达并纯化重组蛋白,经免疫印迹分析该蛋白的生物学活性。结果显示,成功构建了共表达IFN-γ-CDPK融合基因的原核表达载体,表达纯化了具有良好的免疫反应性的IFN-γ-CDPK融合蛋白,表达纯化的IFN-γ-CDPK融合蛋白能够和鸡柔嫩艾美耳球虫甘肃株抗血清发生特异性结合,为进一步研制高效力的鸡球虫新型基因工程疫苗奠定了基础。     

用酶联免疫吸附试验诊断牛伊氏锥虫病的初步研究

酶联免疫吸附试验(ELISA)是一种凭借酶的作用,使免疫反应在底物上呈现出肉眼可见的色译,并可通过分光光度计或光电比色计读取不同的消光值来判断被检物的新技术。这种方法首先是1966年由Nakane和Avrameas等提出的,后来由Avrameas等(1969、1970、1971)作了较为全面的发展。它是通过化学与免疫学的方法,将酶与抗原或抗体结合起来,使其保持免疫学和酶的活性。当酶的结合物与相应的抗原或抗体结合之后,在遇到相应的酶