蜱细胞培养技术

蜱细胞培养技术郭中敏，玛丽亚木，努素甫·艾力，谭立新（指导老师：郭固）（新疆畜牧科学院兽医研究所乌鲁木齐８３００００）蜱细胞培养是一相当年轻的组织培养技术。Ｗｅｙｅｒ（１９５２）首次报道了关于培养散状扇头蜱组织的结果，但真正蜱细胞培养研究的报告是由Ｒ...     

环形泰勒虫裂殖体感染细胞培养技术的改进

在环形泰勒虫裂殖体胶冻细胞苗工厂化生产中,将小转瓶培养改为大转瓶培养,在此基础上又用成年健康黑白花牛血清代替犊牛血清,加犊牛血清的培养液收获细胞数为１４６ ．０ 万个／ ｍ Ｌ,而加成年牛血清的培养液在２ 次细胞培养中收获细胞数分别达１５３ ．８ 万个／ ｍ Ｌ 和１６２ ．０ 万个／ ｍ Ｌ。     

应用细胞培养技术测定伪狂犬病毒对不同消毒药的敏感性

有关资料介绍,伪狂犬病病毒(PrV)可适应于兔肾、鸡胚和猪肾等细胞,并致细胞发生特征性病变。据此,我们应用细胞培养技术对PrV对某些消毒药的敏感性进行了评价。同时对消毒药本身对细胞的毒性做了初步探索。 (一)试验材料: 1.毒株:系用我院余永建等(1984)分离的PrV Ncr-1株的第4代细胞毒,TCTD_(60)为10~(-7)。 2.单层细胞:应用1～5日龄乳兔原代肾细胞(BRK)。按常规法制备。 3.生长液:用日本进口的199粉,配成9.8g/1000ml,添加5～10％犊牛血清及双抗各100iu/ml制成。维持液为含2.0％犊牛血清的199液。     

细胞培养中霉形体的感染问题

自从1956年Lucille R-binson和他的同事们报道从Hela细胞中分离出霉形体以来,霉形体对细胞培养的感染问题成了有关学者研究的热门课题,并且是使免疫学家、病毒学家、细胞生物学家和其他依赖细胞株进行研究工作的科学家深感头痛的问题。后来,许多研究工作者证明,霉形体对细胞培养的感染远比Robinson报道中想象的普遍,用微生物方法和血清学方法研究的结果表明,有大量细胞培养遭受霉形体感染(Hayflick,     

塑料微滴板上的细胞培养技术及其在生物鉴定中的应用

细胞培养的常规方法一般多采用玻璃器皿。对于那些在细胞培养上进行的病毒鉴定和血清学试验来说,带螺旋帽的玻璃试管是最常用的培养单元。这种培养方法需要相当数量的昂贵的培养液和细胞,而试验的本身并不需要那么多。玻璃试管使用起来很麻烦,还要占用很大面积的架子和温室空间。还有一个缺点是瓶盖要取下又要重新盖上,这不仅仅是单调乏味的而且由于玻璃可能破碎而带来危险。因此,这种操作费时间,不经济,还需要一大批技术人员,没有几个病毒实验室能胜任广泛的流行病学研究工作。     

初生湖羊羔血清在细胞培养中的应用

动物血清中具有细胞生长所必须的各种营养物质,还有促进细胞贴壁和促细胞生长因子或称生长刺激因子。且有很强的酸碱缓冲作用。因此常将动物血清用作生物学添加物。牛、羊、马等动物血清都可使用,刚出生的动物血清优于成年动物血清。当前,常用各奶牛     

鸭胚细胞培养鸡新城疫Ⅰ系疫苗试验

鸡新城疫Ⅰ系弱毒疫苗,在我国应用多年,对鸡新城疫疫病防治,起了很大的作用。在生产方法方面,近年来,随着组织培养技术的发展及在生产上的应用,和为了适应养鸡业大发展的需要,由用鸡胚生产疫苗改为用鸡胚成纤维细胞生产疫苗。这种方法,比起鸡胚疫苗有很多优点,但仍存在严重的缺点,带有危险性。因为有些禽病,如鸡白血病、鸡伤寒病、鸡传染性支气管炎、鸡支原体病(慢性呼吸道病)等,除了通过其他方式传播外,还可经     

貂传染性肠炎的研究——细胞培养灭活疫苗研制

利用NLFK细胞增殖培养MEV-S_1株病毒,无论静置培养或转瓶培养均可在接毒后72～96小时产生50％～75％CPE时收毒,对50％CPE的培养瓶在换液后继续培养至120～148小时时可收2次毒。然而,转瓶培养毒液的HA价要比静置培养的高。利用NLFK细胞增殖的MEV-S_1株毒制备的BEI灭活苗,对动物安全,免疫水貂30～60天后血清HI抗体滴度增加1～8个滴度,油乳剂苗增长的幅度更大,最高HI抗体价可达2~(10)以上。同时对NLFK细胞在MEV-S_1株增殖培养上的优点作了评论。     

绵羊痘苗种毒细胞培养的产斑条件

据材料介绍,在液体培养基内形成CPE(细胞病变)和某些不形成CPE的病毒,可在琼脂覆盖层下形成明晰的蚀斑。笔者结合绵羊痘病毒在绵羔羊睾丸单层细胞上产生CPE的特点,为排除日前羊痘苗生产中测毒羊因健康状况、免疫状况、个体差异及饲养管理条件等对检测结果的影响,对绵羊痘苗用种毒一羊痘鸡胚化羊体反应毒进行了产斑条件的观察。     

使用细胞培养单层分离猪流行性腹泻病毒

1971年,在英国的猪群中首次发现猪流行性腹泻(PED),直至1978年,英国和比利时才证实,引起PED的病原体为冠状病毒PED和猪传染性胃肠炎(TGE)是由不同血清型的冠状病毒引起危害以消化器官为主的两个类似的猪的传染病。因此,单靠临床症状和组织病理学检查来作出鉴别诊断是比较困难的,必须借助于血清学和病原学的检验。但是,由于在细胞培养物中使用胎牛血清会起到抑制冠状病毒吸收进入细胞膜受体的作用,使PED病毒在细胞培养物中生长繁殖受阻,从而对PED病毒的应用研究带来了一定的困难。据报道,     

弓形虫GJS株在Vero细胞培养中的生物学特性观测

弓形虫ＧＪＳ株在Ｖｅｒｏ细胞培养中的生物学特性观测李惠萍张德林杜重波李学瑞（中国农业科学院兰州兽医研究所７３００４６）叶荣（武威市畜牧兽医中心）弓形虫体外培养始于３０年代，几十年来，国内外诸多学者对此进行了大量的研究探索，但效果都不尽人意。我们通过Ｂ...     

犊牛睾丸细胞培养羊传染性脓疱皮炎病毒的研究

羊传染性脓疱皮炎(Contagious Pustular dermatitis,“orf”),俗称“羊口疮”,是羊的一种急性传染病。主要危害羔羊口腔,以口腔粘膜出现红肿、水泡、溃烂为其特征。该病的传染性很强,发病率高达100％,致死率一般约为1％,如果继发肺炎和肠炎可引起大批羊死亡。我省羊传染性脓疱皮炎长期普遍流行,而以肃南、天祝、永昌等县尤其严重,随着家畜烈性传染病的消灭或控制,目前本病成了危害养羊业的一个比较突出的疾病。就全国而言,本病流行的范围也很广,如青海、宁夏、新疆、内蒙、西藏等省(区)均有流行,造     

猪传染性水泡病幼地鼠肾细胞培养灭活苗试验报告

为了尽快消灭猪传染性水泡病,近年来在研制疫苗方面进行了广泛的探索。鉴于猪水泡病水泡皮灭活苗的试制成功,我们于1974年开展了幼地鼠肾细胞培养灭活苗的研究。经试验测定,较大的免疫剂量有较好的保护力。现将初步试验结果报告如下。 一、疫苗的制备 细胞的制备:用17～20日龄的地鼠肾,按组织培养常规制成单细胞,作病毒的培养材料。 种毒:采自我省连云港食品公司的病猪水泡皮毒,在地鼠肾单层细胞连续适应4代,作     

猪传染性水泡病仔猪肾细胞培养弱毒疫苗研究

为了迅速控制和扑灭猪传染性水泡病的蔓延,保障我国养猪业的发展和出口援外的迫切需要,我们在各级党组织的领导和关怀下,在吴兴县食品公司、平湖县食品公司、嘉兴地区食品公司等兄弟单位大力协助下,自1972年5月开始,对猪水泡病仔猪肾细胞培养弱毒疫苗进行了一些研究工作。几年来,先后培养成东阳系和杭州系两株弱毒。东阳系弱毒45代(D_(45))的免疫原性,较杭州系弱毒36代(H_(36))为好;但由于冷藏设备发生故障,东阳系于1975年初丢失。现将杭州系弱毒的培育、制苗和免疫等室内外试验结果报告如下。     

柔嫩艾美耳球虫DF-1细胞培养体系的建立及应用

为了建立柔嫩艾美耳球虫的鸡胚成纤维传代细胞(DF-1)培养体系,并应用于柔嫩艾美耳球虫子孢子的细胞入侵活力检测,将CFDA-SE标记的子孢子接入DF-1细胞,利用流式细胞仪测定子孢子的细胞入侵活力。比较了37℃和41℃培养温度下,子孢子对DF-1、MDBK、Vero、BHK、MDCK五种细胞的入侵活力。优化了在子孢子入侵活力检测时,DF-1细胞最佳培养条件。结果表明,柔嫩艾美耳球虫子孢子在DF-1细胞中可发育为第一代裂殖子。在不同培养温度下,子孢子对DF-1细胞的入侵活力均高于其他细胞。优化后的DF-1细胞培养体系的培养程序为:用含100mL/L胎牛血清的DMEM稀释DF-1细胞,以每孔1×105个细胞铺被24孔板,37℃、50mL/L CO2培养24h后,用含50mL/L胎牛血清的DMEM换液后,每孔接入3×105个子孢子,41℃、50mL/L CO2培养8～12h,收集细胞进行检测。     

绵羊睾丸原代细胞培养及接种羊痘弱毒后的病变观察

研究了在相同培养条件下不同培养液、不同血清和不同细胞密度对绵羊睾丸细胞生长的影响 ,并对该细胞接种羊痘弱毒后的病变情况进行了观察。结果 ,3种培养液对绵羊睾丸细胞生长的支持作用表现为MEM液 >199液 >乳汉液 ,但差异不显著 ;用犊牛血清的最适细胞密度为8.0× 10 5～ 1.0× 10 6 /mL ,用成年牛血清的最适细胞密度为 1.0× 10 6 /mL ,用绵羊血清的最适细胞密度为 8.0× 10 5/mL ;原代培养生长良好的细胞接种羊痘弱毒后出现了明显的细胞病变     

猪传染性胃肠炎病毒弱毒株STC3细胞培养特性及致病性研究

从美国引进的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)弱毒株STC3在ST、PK15及猪肾原代细胞上均能增殖,并产生明显的致细胞病变作用(CPE),其中以ST细胞上的CPE最为迅速、明显,于接毒后20-24 h CPE即可达90%-100%,而在PK15及猪肾原代细胞上CPE形成较迟一些,在42-48 h可达80%-90%.STC3在ST、PK15及猪肾原代细胞上的TCID50分别为10-7.67/mL、10-5.63/mL和10-5.90/mL.用较大剂量STC3细胞毒经口接种被剥夺初乳的初生仔猪,仅表现为一过性的腹泻而不引起死亡,对3日龄人工哺乳的仔猪则已完全丧失了致病力,但荧光抗体检查结果显示病毒在小肠粘膜上皮细胞中仍有增殖.由此可见,STC3可能是1株能很好诱导猪体免疫的TGEV弱毒株.     

应用单克隆抗体ELISA抑制法检测细胞培养中的猪瘟兔化弱毒

应用2种针对不同抗原决定簇的抗猪瘟兔化弱毒单克隆抗体建立了检测细胞培养中猪瘟兔化弱毒的ELISA抑制试验。对20份不同批次的猪瘟兔化弱毒牛睾丸细胞培养物的测定结果表明,该法可较准确地反映病毒在细胞培养中的产量;将病毒培养物置4℃、25℃和37℃3天、超声裂解、冻融3次和6次等不同方法处理对试验结果无显著影响(P>0.05);通过与兔体接种试验比较,探讨分析了猪瘟兔化弱毒疫苗生产工艺中的问题。     

A型口蹄疫细胞培养弱毒“空斑”株的挑选及其试验观察

1952年Dulbecco首先建立“空斑”技术,1954年Dulbecco和Vogt进一步报道了他们的试验,1955年Hsiung和Melnick利用“空斑”技术挑选出肠道病毒株,同年Hess、Seller报道了一些因素对口蹄疫病毒形成“空斑”的影响,1657年Sabin和Koprowski用“空斑”技术对脊髓灰白质炎病毒进行选种并建立了弱毒株,1962年Carsso利用电子显微镜观察到一个病毒粒子或群体病毒粒子构成一个“空斑”,1964年也报道了口蹄疫病毒的“空斑”……。