猪口蹄疫诊断方法的研究

最近二、三年来,全国各地猪口蹄疫流行甚广,而少数地区所送检的材料若用常规的方法来鉴定,不易鉴定出毒型或根本鉴定不出毒型。过去虽然对某些地区的猪口蹄疫作过分型鉴定工作,未能获得满意的结果,同时也未掌握其规律性。为了及时扑灭该病的流行,为防疫     

猪水泡病与口蹄疫A型联合弱毒疫苗的研究

猪口蹄疫和水泡病在某些地区同时流行,影响生猪生产和出口援外。为了研究解决预防这两种病的联合疫苗,我们用我所培育的口蹄疫A型鸡胚弱毒和水泡病上海龙华系鼠化弱毒作成联合疫苗,进行了初步试验。现将结果报告于下。 甲、安全效力试验 一、试验材料 (一)疫苗: 1.口蹄疫A型疫苗:用我所培育的A型鸡胚化弱毒104和107代,制成含毒10％、含     

信号肽对O型口蹄疫病毒重组表位蛋白在CHO中表达及分泌的影响

构建融合不同信号肽的O型口蹄疫病毒重组表位蛋白真核表达载体,筛选不同的分泌型信号肽以提高O型口蹄疫病毒重组表位蛋白在中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO)中的表达并使其分泌到CHO培养基中。通过PCR方法将10种不同的分泌型信号肽与串联表位基因的5′端相连,分别构建了真核表达载体并转染哺乳动物细胞CHO,采用Western-blot检测CHO培养基中重组表位蛋白累积量,研究结果表明,O型口蹄疫病毒重组表位蛋白在CHO中成功分泌表达,不同的分泌型信号肽明显改变O型口蹄疫病毒重组表位蛋白在CHO培养基中的累积SCGB1D1 isoform信号肽介导的O型口蹄疫病毒重组表位蛋白表达量最高。综上所述,合适的分泌型信号肽促进O型口蹄疫病毒重组表位蛋白在CHO中的分泌。     

口蹄疫消毒试验——福尔马林烟雾剂对O型口蹄疫病毒的消毒作用

据文献报导,福尔马林对口蹄疫病毒具有良好的杀毒能力。我们在前一报告中报导了福尔马林溶液对A型口蹄疫病毒的消毒作用。本文介绍福尔马林烟雾剂对人工污染于羊皮样品上的O型口蹄疫病毒的消毒效力试验结果。     

口蹄疫疫情与控制

(一)疫情 至1984年11月止,发生口蹄疫的国家有: 1.美洲:阿根廷、巴西、智利、厄瓜多尔、乌拉圭,委内瑞拉。 2.亚洲、太平洋地区:沙特阿拉伯、香港、印度、以色列、老挝、黎巴嫩、马来西亚、斯里兰卡、也门。 3.非洲:埃塞俄比亚、利比亚、毛里塔尼亚。 4.欧洲:联邦德国、希腊、荷兰、土耳其。 (二)部分国家控制情况 1.联邦德国已解除对口蹄疫疫区的封锁:1984年10月1日给国际兽医局再次报告发生口蹄疫后,再无新发病例。最后的一次发病地点是巴伐利亚州的奥格斯堡,病毒为O_1型。目前已解除了对该病的封锁措施。     

口蹄疫的新疫苗

法国《国际兽疫局学报》1969年第71卷第3～6期报导几种新的口蹄疫疫苗,安全有效,免疫力强。摘要如下: 口蹄疫A_(22)型病毒死疫苗 据报导,使用这种疫苗可保护家畜免遭口蹄疫的侵害,在疫区则可制止疫病蔓延,使疫     

Asia 1型口蹄疫病毒多表位基因的原核表达及ELISA 检测方法的建立

根据国内流行的Asia 1型口蹄疫病毒的基因组特性,合成了Asia 1型口蹄疫病毒2个流行毒株VP1基因的5个抗原表位,并将其克隆到pMDl8-T载体上,再按设计的酶切位点连接,构建出Asia 1型口蹄疫病毒VP1双拷贝基因片段(VPlAsia).然后,将VP1Asia基因连接到原核表达载体pET-28a(+)上,构建了重组表达质粒pET-28a-VPlAsia,接着将其转入BL21茵中进行原核表达.以纯化的表达蛋白作为抗原检测了牛Asia 1型口蹄疫病毒阳性血清.结果显示,VPIAsia基因在大肠杆菌中获得了高效表达,以纯化的VPIAsia蛋白作为抗原建立了检测Asia 1型口蹄疫病毒抗体的ELISA方法.以建立的ELISA方法和标准Asia 1型口蹄疫液相阻断ELISA试剂盒对30份临床样品进行了检测,两种检测方法的阳性率分别为90.0% (27/30)和93.3%(28/30),符合率为89.7%(26/29).本研究为组装Asia 1型口蹄疫病毒抗体ELISA诊断试剂盒奠定了基础.     

口蹄疫消毒试验——两种普通杀菌剂对口蹄疫病毒的消毒作用

(一)兰州面碱对O型口蹄疫病毒的消毒作用:根据前一试验报告,5％的兰州面碱在2℃作用2小时,对A型口蹄疫病毒无杀毒效力。为验证前一试验结果,我们重复了试验。用12％的兰州面碱溶液,与等量20％的O型口蹄疫牛舌皮毒(阿克苏牛源毒,于试验室用牛保存28代)悬液均匀混合(混合后,面碱即6％,pH9.6,病毒为10％),于2℃和26℃分别放置30～40、60、120分钟后,接种猪(体重15～20公斤,系A型鸡胚毒效力试验用过     

英国猪水泡病流行的初步研究

1972年12月11日,斯塔福郡(Staffordshire)报告了猪的水泡病的一次流行。根据临床症状诊断为口蹄疫,但未能为起初的血清学试验所证实。遂曾进行研究来确定其病原的性质。 以前也曾两次在猪流行过临床上与口蹄疫无法区性的疾病,但从其中分离出与口蹄疫不同的病原。Nardelli氏等于1966年在意大利描述过这样一种综合病征,指出其病原为一种猪     

Asia 1型口蹄疫病毒多抗原表位真核表达质粒的构建及表达

为了构建Asia 1型口蹄疫病毒多抗原表位真核表达质粒,采用多表位基因串联策略,合成包括口蹄疫病毒T细胞和B细胞表位基因的基因片段F,该基因片段由结构蛋白VP1上的2个B细胞表位(VP1135-159aa、VP1194-211aa)基因、非结构蛋白3A和3D上的T细胞表位(3A21-35aa、3D795-803aa)基因组成。利用限制性内切酶HindⅢ、XbaⅠ将基因片段F克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)。经酶切鉴定、序列分析正确后,利用LipofectamineTM2000将阳性重组质粒pc-F转染至BHK-21细胞。Western-blot和IFA分析结果显示,所表达的蛋白大小约25.4ku,能够与Asia 1型口蹄疫病毒标准兔抗血清发生特异性反应,证实所表达的蛋白具有较好的反应原性。结果表明,Asia 1型口蹄疫病毒多抗原表位真核表达质粒pc-F构建成功,且能在BHK-21细胞中正确表达。     

英国猪水疱病流行的初步研究

1972年12月11日,斯塔福郡(Staffordshire)报告了猪的水疱病的一次流行。根据临床症状诊断为口蹄疫,但未能为起初的血清学试验所证实。遂曾进行研究来确定其病原的性质。 以前也曾两次在猪流行过临床上与口蹄疫无法区别的疾病,但从其中分离出与口蹄疫不同的病原。Nardelli氏等于1966年在意大利描述过这样一种综合病征,指出其病原为一种猪     

亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒VP1基因的克隆及表达

从亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒中提取总RNA,采用反转录聚合酶链反应获得了长度约为700bp的核苷酸片段,大小与预期长度相符。扩增产物经克隆测序,证明其为VP1基因。将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX 4T 1,成功构建了重组表达质粒pGEX VP1;利用IPTG诱导,表达出了53ku的目的蛋白条带。Western blotting分析表明,表达产物能与亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒抗血清特异性结合。亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒结构蛋白VP1在大肠埃希氏菌中表达成功。     

同一份组培细胞繁殖(复制)两种病毒的研究

用同一份仔猪肾组培细胞先繁殖猪瘟病毒(中国猪瘟兔化弱毒),再繁殖口蹄疫O型病毒,猪瘟组培细胞毒兔检可达5 ×10~4ID/1毫升。O型口蹄疫细胞毒鼠测毒价可高达≥10~(8·5)“MLD_50/0.1毫升。 被猪瘟病毒感染后的细胞不发生细胞病变(cpe),大量繁殖猪瘟病毒后的细胞(即3～5次收毒后的细胞),再感染口蹄疫O型病毒,细胞病变率几乎达100％。从而说明猪瘟病毒与口蹄疫O型病毒是可以先后在同一份细胞内复制的。     

一九八八年第四季度国际动物疫情

(一)口蹄疫 1988年11月7日,意大利报道艾米利亚-罗马涅区雷焦艾米利亚市科雷焦地区爆发了该国本季度第一起口蹄疫。该地区一个养有2206头猪的畜牧场的猪群感染发病,51头患猪死亡,其余的猪全部被扑杀,并将尸体掩埋处理。有关当局限制疫区内猪只的移运,并对传染来源进行追溯。在这次爆发中所分离到的病原是C型口蹄疫病毒,1988年该国的其它4起口蹄疫爆发也是由C型病毒引起的。11月12日,该地区又报道再次爆发口蹄疫,有80头牛受感染,是通过“邻居接触”途径而受到传染的。患牛全部扑杀,就地掩埋。11月27日,在距离上一起爆发地点4km远的卡皮尔某畜牧场爆发牛口蹄疫,该场饲养的22头牛中至少有4头受到感染,患牛全部扑杀。     

口蹄疫O-A-AsiaⅠ型三价灭活疫苗免疫效力和最小免疫剂量的研究

为确定口蹄疫O-A-AsiaⅠ型三价灭活疫苗的安全性和免疫效果,按OIE口蹄疫疫苗效检标准和我国口蹄疫灭活疫苗质量标准,对实验室条件下制备的4批疫苗进行了安全性试验、免疫效力试验、免疫持续期试验、疫苗保存期试验和最小免疫剂量试验。结果显示,4批疫苗均对靶动物和实验动物安全,无任何毒副反应;对O、A、AsiaⅠ型口蹄疫的平均免疫效力分别为4.73、6.84和8.10 PD50/头份;一次接种的有效免疫期达6个月;2~8℃下的疫苗保存期为12个月;适宜的免疫剂量为,6月龄以上牛每头3.0 mL,6月龄以下牛每头1.5 mL。该疫苗对接种动物安全,免疫效果良好,一次接种可同时预防O、A、AsiaⅠ型3个血清型的口蹄疫。     

口蹄疫单层细胞组织培养疫苗的研究——仔猪肾上皮细胞组织培养疫苗(对仔猪一)

猪的口蹄疫疫苗实属生产实践迫切需要解决的问题。我国有关方面已做些工作,取得一定成绩。但对猪口蹄疫组织培养疫苗国内研究尚少,效果如何,也难肯定。遵照毛主席“……人类总得不断地总结经验,有所发现,有所发明,有所创造,有所前进……”“……一个正确的认识,往往需要经通由物质到精神,由精神到物质,即由实践到认识,由认识到实践这样多次的反复,才能够完成……”的教导,为了生产实践迫切需要解决的问题,我们课题组同志提出了用A型弱毒株适应仔猪及仔兔肾上皮细胞制苗,接种仔猪观察免疫情况。今年     

口蹄疫单层细胞组织培养疫苗的研究——组织细胞苗及组织细胞兔体反应苗(对仔猪)

(一)口蹄疫A型组织细胞苗及组织细胞毒兔体反应苗对50～60日龄杂种断奶仔猪的安全效力试验。 (二)口蹄疫A型组织细胞苗及组织细毒兔体反应苗对10～13日龄杂种哺乳猪的安全试验。 (三)口蹄疫A型组织细胞苗及组织细胞毒兔体反应苗对50～60日龄纯种断奶仔猪的安全效力试验。     

ELISA抗体水平评价口蹄疫灭活疫苗免疫效果的可行性分析

为了探讨免疫抗体评价口蹄疫灭活疫苗效果的可行性,分别用5批次的口蹄疫O型-亚洲1型二价灭活疫苗(OS/99株+JSL/06株)、5批次的猪口蹄疫O型灭活疫苗(OZK/93株+OS/99株)免疫动物,在攻毒的同时采血分离血清,用液相阻断ELISA测定抗体效价,以分析抗体效价与免疫保护的关系。统计学分析表明,二价灭活疫苗的O型免疫抗体值与攻毒保护率(概率单位)之间呈正相关关系(P<0.01),相关系数为0.986;亚洲1型免疫抗体值与攻毒保护率(概率单位)之间呈正相关关系(P<0.05),相关系数为0.997,猪口蹄疫O型灭活疫苗免疫抗体值与攻毒保护率(概率单位)之间不呈正相关关系(P>0.05)。结果表明,应用抗体水平评价二价灭活疫苗的免疫效果是完全可行的,但用其评价猪O型灭活疫苗的免疫效果不具有可行性。     

口蹄疫病毒组织培养的研究——仔猪肾上皮细胞分离培养口蹄疫O型及ZB型病毒

口蹄疫病毒曾是最早能在组织上培养的病毒之一。 近年来很多国外学者Bachrach氏,Sellers氏,Dinter氏,CeprNeeB氏,MuTeB氏等人都先后成功的在犊牛、仔猪、羔羊肾细胞组织培养上培养了口蹄疫病毒,并描述了病毒生长及引起致细胞病变情况。 国外都先后应用犊牛、仔猪肾细胞组织培养制造口蹄疫病毒疫苗,并已广泛应用于生产实践。     

牛、羊接种口蹄疫O、A型弱毒甘油苗后的血清保护抗体测定试验

全国各地根据需要逐渐开展口蹄疫O、A两型弱毒疫苗的共同注射,以节省时间与力量,为群众所欢迎。但接种后牛、羊产生抗体如何,国内资料甚少。农业部兰州兽医药品厂对用于生产血清的牛只进行了O、A两型口蹄疫预防注射,我所亦对在徐家坪饲养的健康黄牛、绵羊、山羊进行了O、A两型疫苗的预防注射,于注射后不同时间采血分离血清作乳鼠的血