小鼠皮肤切创愈合过程中caspase-8表达的研究

目的检测皮肤切创愈合过程中caspase-8的表达,探讨用caspase-8表达的规律推测皮肤损伤时间。方法建立小鼠皮肤切创模型,应用免疫组织化学技术和Western blot方法检测切创后不同时间皮肤中caspase-8的表达,以未切创小鼠皮肤组织作对照。结果伤后12~24h的损伤皮肤组织中部分单核细胞表达caspase-8。随伤后时间延长,caspase-8阳性细胞以单核细胞及成纤维细胞为主。结论伤后3~6h,caspase-8阳性细胞比率较低,12h后逐渐升高,3d达到高峰,以后逐渐下降。实验组中,1、3、5、7d组可见明显的caspase-8活化片段,位于分子量Marker44/42处。结论小鼠皮肤切创愈合过程中,caspase-8在损伤区单核细胞及成纤维细胞中表达,其时序性变化规律可望用于皮肤损伤时间的推断。     

大鼠皮肤切创后E-选择素表达及稳定性研究

目的探讨大鼠皮肤切创后E-选择素表达规律及法医学意义。方法健康SD大鼠90只,随机分成4组：正常对照组、活体切创组（30min～7d12个时间点）、死后切创组（30min～3h3个时间点）、死后稳定性组（-20％6h-7d9个时间点,25％6h～3d5个时间点）。在大鼠头部建立皮肤切创模型,按设定的时间点取皮肤检材,运用免疫组化和图像分析技术,检测血管内皮E-选择素的表达规律。结果在活体切创组中,伤后1hE-选择素在血管内皮细胞内即呈阳性表达,持续至伤后7d,且随时间变化呈规律性表达。在正常对照及死后切创组未见阳性表达。死后-20％稳定性组各时间点E-选择素表达与死后即刻比较无显著性差异（P〉0．05）。25％各时间点与死后即刻比较有显著性差异（P〈0．01）。结论E-选择素在创伤后血管内皮细胞内特异性的表达具有时序性规律,且低温条件下稳定性较好。     

小鼠皮肤切创后calpain1和calpain2的表达

目的观察小鼠皮肤切创愈合过程中calpain1和calpain2表达变化。方法应用免疫组织化学染色技术检测小鼠皮肤切创后calpain1和calpain2的表达。结果对照组的calpain1和calpain2均有表达,伤后1d calpain1阳性细胞率显著增加,达最大值。伤后3d阳性细胞比率显著下降。伤后5d阳性细胞比率再次显著增加,以后逐渐下降。伤后1d calpain2阳性细胞比率显著增加,伤后3d阳性细胞比率显著下降,达最低值。伤后5d阳性细胞比率再次显著增加,达最大值。伤后7d至10d,阳性细胞比率逐渐下降。结论小鼠皮肤切创后,calpain1和calpain2的表达随愈合时间而呈现双峰式变化。     

小鼠皮肤切创愈合过程中M_3型乙酰胆碱受体的表达

目的 探讨小鼠皮肤切创愈合过程中损伤区M3受体的表达及其随时间的变化规律.方法 应用免疫组织化学染色和Western印迹技术检测小鼠皮肤切创后不同时间段M3受体的变化情况.结果 正常皮肤组织的表皮、毛囊、皮脂腺、汗腺、皮肌层等均表达M3受体.伤后6～12h,损伤区M3受体阳性细胞以多形核粒细胞为主;1～3d,M3受体阳性细胞以单个核细胞和成纤维细胞为主;5～14d,M3受体阳性细胞主要为成纤维细胞.阳性细胞率在伤后6～12h逐渐增高,12h达高峰,1～5d略有下降,但保持较高水平,7d阳性细胞率再次达到峰值,随后逐渐降低.通过Westem印迹法检测显示,各个时间段均有M3受体阳性条带,其中12h和7d为M3受体两个表达高峰.结论 多形核粒细胞、单个核细胞和成纤维细胞均表达M3受体,提示其可能在皮肤切创愈合过程中起重要的作用;M3受体表达的规律性变化可用于损伤时间的推断.     

小鼠皮肤切创愈合过程中caspase-9、-3表达的研究

目的研究caspase-9、-3在小鼠皮肤切创愈合过程中的表达及其变化规律。方法在小鼠背部正中制作皮肤全层切创模型,应用免疫组化染色技术观察切创及切创周边区内caspase-9、-3的表达情况,以无切创的小鼠皮肤作为对照。结果对照组中caspase-9、-3表达于表皮层,毛囊及皮脂腺。伤后3h损伤区及损伤周边区中可见少量多核粒细胞表达caspase-9、-3,6~24h,部分浸润的多核粒细胞和单核细胞caspase-9、-3阳性,此后caspase-9、-3阳性细胞逐渐以单核细胞和成纤维细胞为主。伤后caspase-9、-3阳性细胞率逐渐升高并在3d达到高峰,此后逐渐下降,至14d最低。结论caspase-9、-3可能引发正常小鼠皮肤表皮、毛囊和皮脂腺细胞的凋亡并参与正常皮肤细胞的自我更新;在小鼠皮肤切创愈合过程中,caspase-9、-3在多核粒细胞、单核细胞及成纤维细胞中表达,其时序性变化规律可望用于皮肤切创损伤时间的判定。     

Fatal arrow wounds

Two instances of fatal arrow wounds are described, one by a field-tip (target arrowhead), the other by a broadhead (large-game hunting arrowhead). The essential characteristics of the two types of wounds are discussed. In particular, the field-tip can closely simulate a bullet wound by causing a circular entrance hole with abraded margins, whereas the broadhead can create unusual radiating incised wounds.     

小鼠皮肤切创愈合过程中iNOS和eNOS表达的免疫组织化学研究

目的观察小鼠皮肤切创愈合过程中,iNOS和eNOS在损伤区及损伤周边区内的表达及其变化规律。方法小鼠背部制作全层切创,应用免疫组织化学技术观察伤后切创组织中iNOS和eNOS的表达,并和无切创的小鼠作为对照。结果损伤区及损伤周边区细胞,伤后3h的损伤皮肤组织中可见少量的多型核细胞表达iNOS和eNOS,伤后6～24h,大部分浸润的中性粒细胞和单核细胞为iNOS和eNOS阳性。随着时间的延长,iNOS和eNOS阳性细胞以单核细胞和成纤维细胞为主。伤后3hiNOS的阳性细胞比率较低,6h～1d持续性增加并于1d达到最高峰,3～7d维持在一个相对稳定的水平直至伤后10d再次达高峰,10～14d开始下降。eNOS的阳性细胞率在伤后1～3h表达较低,6h～3d持续性增高,并在3d达到最高峰,在其后的5d内保持稳定表达,之后开始下降。而且损伤区及损伤周边区、特别是肉芽组织内的新生血管可见iNOS和eNOS不同强度的表达。结论小鼠皮肤切创愈合过程中,iNOS和eNOS在损伤周边区内多型核细胞、单核细胞和成纤维细胞中表达,其时序性变化可望用于皮肤损伤时间的推断。     

An unusual entrance wound associated with rimfire rifles.

In many cases of self-inflicted contact wounds of the head with rimfire rifles, we have noted that the entrance wound appears unusual: in 50% of cases studied, a pencil-like extension or zone of blackened and seared skin extends downward from the entrance. The most probable cause for the appearance of this wound is a momentary break in contact between the muzzle and skin as the victim reaches for the trigger with resultant escape of a jet of hot sooty gas. Whereas not unique for rimfire rifles, such a wound from a handgun is uncommon.     

小鼠皮肤切创黏着斑激酶和磷酸化黏着斑激酶的表达及其变化规律

目的研究小鼠皮肤切创愈合过程中,黏着斑激酶（focal adhesion kinase,FAK）和磷酸化黏着斑激酶（phospho—FAK,p—FAK）在损伤区及损伤周边区内的表达及其变化规律。方法应用免疫组织化学染色技术和免疫印迹（Western blot）方法观察小鼠背部切创后损伤区及损伤周边区FAK及p-FAK的表达情况。结果伤后3h,FAK和p-FAK主要表达于多核粒细胞;伤后6～24h,主要表达于大部分浸润的多核粒细胞和单核细胞;伤后3～14d。主要表达于单核细胞和成纤维细胞。伤后FAK的阳性细胞率逐渐增高．于3d达到高峰．随后迅速下降;伤后p-FAK的阳性细胞率也逐渐增加,于12h达到高峰,之后逐渐下降。Westernblot结果显示,正常皮肤中FAK及P—FAK均有表达。FAK表达强度变化不是十分明显,但仍可见在3d时含量达到最高。p-FAK蛋白含量伤后逐渐增加．12h表达最强,随后逐渐下降。结论在小鼠皮肤切创愈合过程中,FAK和p-FAK阳性细胞率呈时间规律性变化．可用于皮肤切创损伤时间的推断。p-FAK呈现出明显的时间规律性变化,说明作为皮肤损伤时间的推断指标要优于FAK。     

小鼠皮肤切创愈合过程中p-JNK变化及其与时间的相关性

目的 探讨小鼠皮肤切创愈合过程中损伤区磷酸化JNK（p-JNK）的变化及不同损伤时间p-JNK的变化规律。方法 应用免疫组织化学和Westernblot方法检测小鼠皮肤切创后各个时间段p-JNK的变化情况。结果 正常组织中有少量p-JNK阳性着色。伤后3～12h损伤区p-JNK阳性着色主要在中性粒细胞,1～5dp-JNK阳性着色主要为单核细胞和成纤维细胞,7～14dp-JNK阳性着色以成纤维细胞为主。阳性细胞率3h～1d逐渐增高,1d达到峰值,3～5d有所下降,7d阳性细胞率达第二峰值。10～14d逐渐降低。Westernblot显示各个时间段均有p-JNK的阳性条带,其中12h和3d为p-JNK含量的2个高峰。结论 小鼠皮肤切创愈合过程中p-JNK在损伤区对诱导中性粒细胞、单核细胞和成纤维细胞的凋亡起非常重要的作用。同时P-JNK的规律性变化可用于损伤时间推断。     

小鼠皮肤切创愈合过程中磷酸化 p38MAPK 表达及其与时间的相关性

目的探讨小鼠皮肤切创愈合过程中损伤区磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)的表达情况,以及不同损伤时间p-p38MAPK的变化规律。方法应用免疫组织化学和Westernblot的方法检测33例小鼠皮肤切创后各个时间段p-p38MAPK表达情况。结果正常组织中有少量的p-p38MAPK表达。伤后3～12h损伤区p-p38MAPK主要表达于中性粒细胞中,1～5dp-p38MAPK阳性表达主要为单核细胞和成纤维细胞。7～14dp-p38MAPK阳性表达主要以成纤维细胞为主。阳性细胞率3～12h逐渐升高,1d有所下降,3、5d阳性细胞率保持在高水平,7～14d阳性细胞率逐渐降低。Westernblot显示各个时间段均有p-p38MAPK的表达。其中12h和3d为2个p-p38MAPK含量的高峰。结论在小鼠切创愈合过程中p-p38MAPK在损伤区对诱导中性粒细胞、单核细胞和成纤维细胞的凋亡起重要的作用,同时p-p38MAPK的规律性表达可用于损伤时间的推断。     

应用ELISA测定成人皮肤切创纤维连接蛋白

应用双抗体夹心酶联免疫吸附剂测定法（ELISA），定量研究了12例成人腹部2小时以内手术切创皮肤可检测的Fn。实验批内变异系数＜5％，批间变异系数＜10％，检测Fn浓度范围3．91～1000ng／ml。结果：成人腹部每克皮肤可检测Fn含量为7．5920±1．7364μg（M±SD）；随着损伤时间延长，不同时间段创伤局部皮肤Fn的含量逐渐升高；各不同时间段与损伤即刻皮肤Fn含量的差值和损伤时间之间存在直线相关（r=0．9843）。经方差分析处理，发现创伤局部皮肤Fn含量在损伤经历30分钟后，有显著增加。本此结果可为推断切创形成的时间提供参考数据。     

不同损伤时间大鼠皮肤切创 Fos表达研究

目的研究皮肤切创在伤后不同时间段 Fos的表达 . 方法在大鼠皮肤切创模型石蜡切片上进行 Fos免疫组化染色 . 结果伤后 10min, 表达量开始增高 , 伤后 3h达高峰 , 以后又逐渐降低 , 至损伤 1d后 , 表达量与对照组无显著性差别 . 结论 Fos为皮肤伤后的敏感指标 , 但需结合其他指标综合评价 .     

小鼠皮肤切创愈合过程中Ⅱ型大麻素受体的表达

目的观察皮肤切创愈合过程中CB2R表达变化的时问规律性。方法 健康小鼠50只,随机分为10组,建立皮肤切创模型,应用免疫组织化学技术及Westernbloting方法检测切创后不同时间段小鼠背部正中皮肤CB2R的表达。结果免疫组织化学结果显示,对照组CB2R表达于表皮、毛囊、皮脂腺、皮肌层、血管平滑肌、神经纤维外膜及神经纤维束束膜;伤后6h损伤区及周边区多核粒细胞少量表达CB2R,12～24h以单个核细胞阳性表达为主,3d以单个核细胞和梭形成纤维细胞表达为主,5～14d以梭形成纤维细胞为主。CB2R阳性细胞率于0h～3d逐渐升高,5d达最高峰,随后逐渐下降。经Westernblotting检测显示,对照及各个损伤时间段都有CB2R阳性条带,其中5d为CB2R表达高峰。结论小鼠皮肤切创愈合过程中,CB2R于损伤区及周边区多核粒细胞、单个核细胞、梭形成纤维细胞中表达,并具有规律性,提示CB2R可能参与皮肤损伤愈合,并可用于皮肤损伤时间的推断。     

FN－Ⅲcs在皮肤切创中的表达与损伤时间关系

目的研究纤维连接蛋白可变剪接片段Ⅲcs在不同损伤时间皮肤中的表达,为早期损伤时间的判定指标提供实验依据.方法DIG标记反意RNA探针,以原位杂交的方法检测大鼠和人体皮肤在损伤早期FNⅢcs表达的变化.结果(1)人体及大鼠皮肤损伤后30min皮肤网状层的毛囊、皮脂腺、血管内皮层中表达FNⅢcs的阳性细胞数开始增多,至伤后6h达到高峰,以后又逐渐减少.(2)人体皮肤FNⅢcs表达的部位与大鼠有明显的差异.结论FNⅢcs的原位检测可望成为判断早期损伤时间的有用指标;为FNⅢcs在创伤修复中的合成方式、部位和作用的研究提供了实验基础.     

对人和鼠腹部皮肤切创缘壁伤后不同时间纤维连接蛋白变化的研究

作者应用免疫组织化学 PAP 法对人体腹部4小时以内切创缘 FN 进行染色观察,发现在切创早期创缘 FN 随着时间延长就有明显变化。为法医鉴定早期切创时间提供了新的依据,同时还发现鼠和人腹部切创经过时间虽相同,但创缘 FN 染色强度却不同。     

Shored gunshot wound of exit. A phenomenon with identity crisis

Shored gunshot wound of exit is produced when the outstretched skin is impaled, sandwiched, and crushed between the outgoing bullet and the unyielding object over the exit site, thus leaving an abrasion collar on the wound margin. Proper coaptation of the wound margin is impossible because of the loss of skin just like those observed in entrance wounds. In contrast to the entrance wound, the supported exit wound shows a scalloped or punched-out abrasion collar and sharply contoured skin in between the radiating skin lacerations marginating the abrasion (Fig. 1). Should gunpowder be observed around the exit site, it is often unevenly distributed, and is not associated with searing, gunpowder stippled abrasion, tatooing, and deposition of soot.     

小鼠皮肤切创愈合过程中caspase-6、-7表达的免疫组织化学研究

目的　观察皮肤切创损伤愈合过程中 ,caspase 6、 7在损伤周边区内的表达及其变化规律。方法　应用免疫组织化学技术观察伤后不同时间小鼠皮肤切创组织中caspase 6、 7的表达 ,以非切创小鼠皮肤组织作对照。 结果　伤后 6h的损伤皮肤组织中可见少量多核粒细胞表达caspase 6、 7,伤后 12～ 2 4h ,大部分浸润的多核粒细胞及部分单核细胞为caspase 6、 7阳性。随伤后时间延长 ,caspase 6、 7阳性细胞以单核细胞及成纤维细胞为主。伤后 0～ 3h ,caspase 6、 7阳性细胞比率较低 ,12h后逐渐增加 ,伤后 3d达高峰 ,其后逐渐下降。 结论　小鼠皮肤损伤愈合过程中 ,caspase 6、 7在损伤周边区内中性粒细胞 ,单核细胞及成纤维细胞中表达 ,其时序性变化规律可望用于皮肤损伤时间的推断。     

小鼠皮肤切创细胞因子的基因表达变化及其与损伤时间关系

目的 观察细胞因子在小鼠皮肤切创组织不同时间的基因表达变化及其与损伤时间的关系。方法用免疫组织化学染色法和RT-PCR法,检测小鼠皮肤切创组织中不同时间的白细胞介素-1α和-1β(IL-1α、-1βB),以及单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、吞噬细胞炎性蛋白-1α和-2(MIP-1α、-2)的基因表达变化。结果 皮肤切创后在早期可诱导IL-1α和IL-1β的基因表达,6h达第一次高峰,24h下降,第3d再次出现高峰后,第6d下降至正常水平;而MCP-1、MIP-1α和MIP-2则在损伤后6h左右开始出现,3d达高峰,然后呈下降趋势。在这些被检因子中,以IL-1α、IL-1β、MIP-1α和MIP-2的变化幅度较大,而MCP-1的变化相对较小。结论 切创组织中IL-1α、-1β和MCP-1,以及MIP-1α、-2的基因表达随伤后不同时间呈现一定规律性变化;同时对同一组织多种细胞因子检查推测损伤时间完全可行。     

皮肤切创愈合中caspase-3表达的免疫组化研究

目的探讨皮肤切创损伤愈合过程中,caspase-3在损伤区内的表达以及不同损伤时间caspase-3的变化规律。方法应用免疫组织化学技术对33例不同损伤时间小鼠皮肤切创组织中caspase-3的表达进行研究。同时以3例非切创小鼠皮肤组织做对照。结果伤后6h的损伤皮肤组织中可见少量中性粒细胞表达caspase-3,伤后12～24h,大部分浸润的中性粒细胞及部分单核细胞为caspase-3阳性。随伤后时间延长,caspase-3阳性细胞以单核细胞及成纤维细胞为主。伤后0～3h,caspase-3阳性细胞比率较低,为(4.53±6.53)%,12h后逐渐增加,伤后3d达高峰,为(62.66±4.84)%,其后逐渐下降。结论小鼠皮肤损伤愈合过程中,caspase-3可能在诱导损伤区内中性粒细胞、单核巨噬细胞及成纤维细胞发生凋亡过程中发挥重要作用,同时,caspase-3的规律性表达可用于损伤时间的推断。