狂犬病抗血清ELISA测定的研究

本试验用不加血清的单层细胞培养增殖狂犬病病毒,并浓缩提纯病毒作为中和用抗原。在微量滴定板上建立了狂犬病毒血清中和ELISA法。用该法检测了40份经疫苗免疫绵羊的血清,并与小白鼠中和试验(MNT)进行了比较,结果,ELISA平均滴度为1:26.4,MNT平均滴度为1:25.5,两法滴度相关系数为0.912。该法可代替MNT进行疫苗免疫效果评价和狂犬病血清学调查。     

应用乳脂孕酮测定进行奶牛早期妊娠诊断的初步研究

利用乳中孕酮放射免疫测定法进行早期妊娠诊断是近十几年发展起来的一项新技术,它具有采样简单、方便,诊断准确度高等优点。现国外已在奶牛业中广泛应用。 自1971年开始进行乳汁孕酮测定以来,许多学者都发现乳中孕酮含量受乳样脂肪含量的影响,因而直接影响着妊娠诊断的准确度。为了排除乳脂率对测定结果的影响,缩小判断怀孕与未孕牛的可疑范围,Hoffmann等于1976年最先提出直接测定乳脂孕酮,并建立了乳脂孕酮的测定方法。以后,Claus等又在改进和简化乳脂孕酮测定程序上做了大量工作。现在,乳脂孕酮测定已成为监控奶牛繁殖状态的有效方法。     

应用外周血浆孕酮水平测定进行奶山羊早期妊娠诊断的研究

简便而有效的妊娠诊断方法,尤其是早期妊娠诊断方法,是畜牧兽医工作者长期以来试图研究解决的问题之一。 1927和1930年,孕妇绒毛膜促性腺激素和孕马血清促性腺激素的相继发现,成为应用激素作为人和家畜早期妊娠诊断的开始。近十多年来,由于测定技术的迅速进展,应用放射免疫法可以精确地测定血液中激素水平。孕酮与家畜的发情、妊娠和分娩均有密切的关系,因此外周血浆孕酮水平(以下简称孕酮水平)可以作为家畜繁殖生理学和繁殖病理学的指标之     

根据乳汁孕酮的测定进行奶山羊早期妊娠诊断的研究

1971年,Laing等根据乳汁孕酮的测定进行早期妊娠诊断,首先在奶牛上获得成功。1977年开始对山羊进行研究,继而引用于绵羊和奶山羊。目前,在英、美、德、日、加拿大和以色列等国,这种方法在奶牛、山羊、绵羊、奶山羊、水牛、肉牛、牦牛、猪和马均有报道。其中以奶牛最多,已广泛应用于生产实践,而其他家畜则较少。国内至今尚无这方面的报道。本研究的目的在于应用放射免疫法,测定西农莎能奶山羊配种后第15～47天的乳汁孕酮水平,并探讨其在早期妊娠诊断上的价值。     

猪瘟RT-PCR ELISA诊断方法的建立及其初步应用

建立了检测CSFV的快速、敏感、特异的RT PCRELISA方法。在RT PCR过程中以地高辛标记的dUTP(DIG dUTP)标记PCR产物 ,用生物素标记的捕获探针在链亲和素包被微量板孔中杂交捕获PCR产物。该方法的敏感性较常规RT PCR方法高 10 0倍 ,可检测出 35 0 μL1∶10 0 (相当于 3.5mg)的兔脾组织悬液中的C株CSFV ,特异性强 ,避免了PCR过程中因污染导致的假阳性结果。通过对RT PCR和微量杂交系统的条件优化 ,该方法用于检测C株兔脾组织毒、细胞适应毒和野毒感染的猪组织毒样品 ,效果良好     

检测猪鼻支原体抗原的ELISA方法的建立及其应用

为了建立检测猪鼻支原体(Mhr)抗原的ELISA方法,本研究采用杂交瘤技术制备了抗Mhr菌体的特异性单克隆抗体(MAb),经亲和层析纯化后标记辣根过氧化物酶(HRP),建立了一种能够检测Mhr抗原的ELISA方法。ELISA反应条件优化结果为:HRP标记的MAb最适稀释度为1∶1 000,该方法的批内和批间变异系数均小于6%,经超声波处理Mhr抗原效果更佳,最低抗原检出量为25 ng。用该方法对已知猪肺炎支原体(Mhp)、猪圆环病毒2型(PCV2)抗原检测无交叉反应。本研究建立的检测Mhr抗原的ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可为Mhr体外培养物抗原定量检测提供可靠的技术手段。     

斑点ELISA检测鸡IBD抗体方法的建立及其应用

鸡传染性腔上囊病（ＩＢＤ）是幼龄鸡的一种高度接触性传染病,是威胁养鸡业发展的主要传染病之一。ＩＢＤ抗体测定最初采用琼脂扩散试验（ＡＧＤ）,后来用中和试验（ＳＮ）。近年来酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）作为一种敏感、定量的诊断方法用于鸡群ＩＢＤ抗体的检测...     

应用ELISA检测囊虫病猪循环抗原的研究

本项研究应用McAb以ELISA双抗体夹心法检测以免疫复合物(IC)形式存在于囊虫病猪血清中的循环抗原(CA)。用3.5％聚乙二醇沉淀猪血清中的IC,再经沸水浴破坏IC中的抗体,可以明显提高CA的检出率。病猪血清CA阳性率为100％(113/113),与棘球蚴和细颈囊尾蚴感染的猪血清有交叉反应。     

双抗夹心ELISA测定牛血清中IgG

双抗夹心ＥＬＩＳＡ测定牛血清中ＩｇＧ王金宝，任慧英，贾世斋，孙月平，闫桂玲，徐玉，张妍，李志良（莱阳农学院２６５２００）（山东省长岛县畜禽良种场）牛血清中ＩｇＧ含量测定常利用琼脂扩散试验。由于该法误差大，重复性及敏感性差，影响了对牛免疫功能的研究。为...     

牛和绵羊IgG的抗原相关性及其在ELISA检测中的应用

通过双抗体夹心法和间接ELISA法表明,抗牛IgG与绵羊IgG之间有交叉免疫反应。其结果证实牛IgG与绵羊IgG存在共同的抗原决定簇。据此将检测牛IgG-BLV抗体的ELISA用于检测人工感染BLV绵羊抗体,结果特异;在抗体捡出时间上比AGIDT早,有实用价值。     

应用ELISA检测猪瘟免疫抗体

猪瘟是危害养猪业的主要疫病之一。 1985年以前 ,该病在青海省流行比较严重 ,曾造成较大的经济损失。从 1987年起青海省采取每年春秋两季给猪全面预防注射猪瘟疫苗 ,并随时补针的免疫措施 ,使西宁、互助等地猪瘟的致死率由 1987年的 9.14 %下降到现在的 0 .2 0 %以下 ,基本上控制了猪瘟的发生和流行。但是 ,青海省断乳仔猪以及由外地引入仔猪的猪瘟病例时有发生。为了掌握青海省猪瘟免疫状况 ,笔者于 2 0 0 1年应用ＥＬＩＳＡ方法在省内 6个县 (市 )进行了猪瘟免疫血清抗体检测。1　材料和方法1.1　诊断试剂　猪瘟强毒、弱毒单克隆抗体纯化…     

应用间接ELISA检测微小隐孢子虫抗体的研究

以在大肠埃希氏菌中表达的微小隐孢子虫 (Cryptosporidum parvum )子孢子表面抗原CP15为抗原 ,以辣根过氧化物酶 (HRP)标记的山羊抗鼠IgG为二抗 ,建立了检测微小隐孢子虫抗体的间接ELISA。试验筛选出的最佳反应条件为 :大肠埃希氏菌CP15抗原包被量为 1μg/孔 ,用10 0mL/L的兔血清进行封闭 ,以正常大肠埃希氏菌裂解上清液稀释待检血清。试验结果表明 ,应用CP15重组蛋白作为诊断微小隐孢子虫抗体的抗原具有特异性高、抗原易纯化和成本低等特点     

酶联免疫测定牛乳孕酮的研究

快速牛乳孕酮酶联免疫测定基于自由孕酮和辣根过氧化物酶标记孕酮竞争与吸附在微滴反应板孔壁上的孕酮抗体结合,反应时间为2小时,ABTS底物溶液反应1小时,加反应终止液后测410nm吸收值。灵敏度为5.2pg/孔,批内变异系数为9.06％,批间变异系数为12.9％。     

应用干血纸ELISA诊断猪囊虫病的研究

对试验猪用猪囊尾蚴细胞抗原免疫前、感染前、免疫后及用猪带绦虫卵感染后每隔10 d经前腔静脉采血1次,分离血清,同时制备全血干血纸,分别用血清ELISA和干血纸ELISA进行检测.结果免疫组猪均在免疫后12 d检出抗体;攻击感染组猪在攻击虫卵20 d检出抗体,21 d抗体水平达高峰,并一直持续到32周;阴性时照组的OD值一直在0.24～0.65.2种样品的检测结果基本一致.     

鸡骨钙素多克隆抗体及其间接竞争ELISA试剂盒的制备与应用

为了建立鸡骨钙素间接竞争ELISA检测方法,使用原核表达的重组鸡骨钙素蛋白作为免疫原,免疫4只雄性新西兰大白兔,成功获得兔抗鸡骨钙素多克隆抗体。该抗体能用于Western-blot检测天然骨钙素。以天然提取的鸡骨钙素为包被抗原,葡聚糖A亲和纯化后的兔抗鸡骨钙素多克隆抗体为一抗建立ELISA反应。结果,最佳包被抗原浓度为0.5μg/mL,最佳抗体工作浓度为1∶10 000,标准品浓度在50～0.39ng/mL间,具有较好的线性关系,检测下限为0.34,批间变异系数和批内变异系数分别为10.6%和4%。使用制备的试剂盒测定30个鸡血清样本及其倍比稀释后的血清样本;结果,鸡血清骨钙素浓度为4.42～19.83ng/mL,稀释前与稀释后测定的血清样本浓度相关性r2=0.952。结果表明,制备的鸡骨钙素间接竞争ELISA试剂盒可用于定量检测鸡血清骨钙素含量。     

应用干血纸ELISA诊断绵羊肝片吸虫病的研究

1984～1987年,我们先后对人工感染和自然感染肝片吸虫的绵、山羊血清,应用ELISA进行了实验室检测和区域试验。结果证明,此法灵敏、特异,且适用于早期诊断。为便于推广应用,适应牧区需要,特开展了耳尖采血制备滤纸干血滴,进行ELISA的研究。     

孕酮对大鼠小肠黏膜结构及其相关细胞的影响

为了研究孕酮对小肠黏膜屏障结构的影响,将24只Wistar健康雌性大鼠进行同期发情处理后,于发情间情期随机分为4组。对照组:只做假手术;OVX组:双侧卵巢摘除;OVX P1组:双侧卵巢摘除 孕酮2 mg/kg;OVX P2组:双侧卵巢摘除 孕酮10 mg/kg,连续用药7 d后宰杀,观察小肠黏膜上皮细胞、上皮内淋巴细胞、杯状细胞形态结构和数量的变化。结果表明,和对照组相比,OVX组大鼠的小肠黏膜结构有明显损伤,绒毛萎缩,绒毛高度和隐窝深度的比值(V/C)明显降低,上皮内淋巴细胞数量和杯状细胞的数量减少;补充2种剂量的孕酮后,各项指标比OVX组有不同程度的改善,其中OVX P1组与OVX组差异显著,且好于OVX P2组。证实,卵巢摘除对大鼠小肠黏膜屏障结构有严重影响,补充适量孕酮可以在一定程度上减轻对黏膜屏障结构的影响。     

ELISA诊断猪旋毛虫病条件的研究

七十年代酶标技术广泛用于人、畜寄生虫病诊断。1976年Ruitenbers等用旋毛虫幼虫制备的粗抗原,以酶标技术生前检测猪旋毛虫(人工感染)病,获得比荧光抗体技术测得更为满意的结果。本文用酶标间接法(ELISA)。以自己研制的碱性磷酸酶(Alkaline Phosphrase、AKP)标记兔抗猪IgG,磷酸苯二钠为底物,对旋毛虫病猪和阴性猪进行检测,同时对抗原、抗体、pH、温度和时间进行了探讨。     

实验大鼠血清补体活性测定及其应用

实验大鼠血清补体活性测定及其应用谢秩勋，李素华，龚群，朱国标，陈莉（成都军区总医院成都６１００８３）补体是机体非特异性体液免疫的组成部分。目前，有关实验大鼠血清总补体活性测定方法以及在高温环境中的临床应用还未见报道。为此，我们建立了一种适用于ＳＤ大鼠...