用酸性非特异性酯酶标记测定水牛T淋巴细胞值的体会

淋巴细胞是动物机体的主要免疫活性细胞。淋巴细胞依其来源、生发和功能不同,以及细胞的大小,核的致密度、胞浆性状、酸性磷酸酶和碱性磷酸酶等不同,可分为T及B二类,以及它们的亚群、株等。T淋巴细胞参与细胞免疫,B淋巴细胞参与体液免疫,故T、B淋巴细胞值在体内的高低直接决定着机体的免疫功能状况。以往区别T、B淋巴细胞多采用玫瑰花瓣试验、淋巴细胞转化试验、免疫荧光染色、电子显微镜扫锚观察等方法,但由于操作繁琐,设备要求高而不易被推广。自从1975年Mueller,J.氏首次应用酯酶染色法(简称ANAE试验)来区别T、B淋巴细胞后,为测定机体内T细胞水平提供了一个新的方法,目前     

动物E-玫瑰花环试验及应用

淋巴细胞是动物体内的免疫活性细胞之一。由于淋巴细胞表面标志和功能不同,可将其分为T淋巴细胞和B淋巴细胞两大类。各类淋巴细胞在机体免疫反应中具有不同的免疫功能。因而检查淋巴细胞的数量、分布和功能有助于了解机体的免疫状态和某些疫病的发病原因及免疫反应机理,为临床防治提供依据。 淋巴细胞表面标志的差异是体外检测各类淋巴细胞的依据之一。目前检测T淋巴细胞的方法较多,但     

100例奶山羊外周血涂片酸性非特异性酯酶标记T淋巴细胞正常值的探讨

目前,免疫学的研究已经证实,淋巴组织具有免疫系统的功能活动,在淋巴组织中有两大类淋巴细胞,即T淋巴细胞和B淋巴细胞,T细胞是细胞免疫的基础,B细胞是体液免疫的基础。因此,及时检测其数量变化,就可了解畜禽免疫状况,对疾病的预防、诊断都有重要意义。 近几年来,我国农村奶山羊事业发展迅速,但关于奶山羊T淋巴细胞正常值测定,还未看到报道。     

成年母猪的淋巴细胞转化试验

近年来,兽医免疫学在研究传染病,探索发病机理,测定机体免疫功能,判断疾病预后和转归,实施特异性预防和治病等方面都取得了较大进展,已成为兽医学中的一门基础科学,是防病治疗的基础。 T淋巴细胞通过末梢毛细血管到达抗原部位,接受特异性抗原或非特异性抗原的刺激而转化为致敏淋巴细胞。其中有一部分在副皮质区受促分裂因子的作用,引起分化增殖,转变为新的致敏淋巴细胞。这种具有免疫活性的T淋巴细胞,在体外培养物中,受植物血凝素(PHA)刺激时,可转化为淋巴母细胞。其转化率可反映出动物体内的免疫功能,并能分     

番鸭呼肠孤病毒诱导免疫抑制机制的初步研究

以5日龄健康番鸭为研究对象,人工感染番鸭呼肠孤病毒(MDRV),采用组织化学和免疫学技术检测外周血淋巴细胞转化率,T淋巴细胞ANAE阳性率,IL-2和IL-6含量,脾和腔上囊中浆细胞数量的变化.结果显示,MDRV感染组番鸭外周血淋巴细胞转化率和T淋巴细胞ANAE阳性率均极显著低于对照组(P<0.01),腔上囊和脾中浆细胞数量在攻毒后第10～20 d显著或极显著低于对照组(P<0.05或P<0.01),血清中IL-2和IL-6含量在攻毒后第10 d均极显著低于对照组(P<0.01).结果表明,MDRV感染能较快且持久地降低机体细胞的免疫功能,破坏免疫器官中的浆细胞,影响体液免疫功能,还影响免疫分子IL-2和IL-6的形成,进一步干扰机体免疫功能的发挥,从而容易诱发继发感染,增加死亡率.     

淋巴细胞杂交瘤技术及单克隆抗体

近十多年来免疫学研究进展非常迅速,不仅改变了某些旧的免疫学观念,而且解决了许多基础理论和临床应用问题。特别是近年来淋巴细胞杂交瘤技术的建立和发展,又为这门新兴学科揭开了新的篇章。 当特定的抗原物质进入机体后,便产生一系列极为复杂的免疫应答反应。这是由T淋巴细胞、B淋巴细胞以及巨噬细胞等共同活动的结果。每一种抗原可被针对其不同抗原决定基的各种抗体识别,而每一抗原决定基又可为多种抗体所识别。所以被免疫的动物往往出现不均一的多样性抗体,而且不同种系动物所产生的     

鸡败血霉形体病的病理免疫学研究

为了从免疫形态学角度探索鸡败血霉形体病的免疫性质和免疫发生规律,本试验借助光学显微镜、应用组织学和组织化学方法对人工接种的败血霉形体病的病鸡胸腺、法氏囊、脾脏和盲肠扁桃体进行连续的动态观察,以便研究本病过程中T淋巴细胞、B淋巴细胞和巨噬细胞的消长规律,为揭示本病的免疫机理和防治本病提供一些理论依据。     

复方丁氨丙磷溶液对小鼠免疫机能的影响

为研究复方丁氨丙磷溶液对机体免疫机能的影响,将48只小白鼠随机分成阴性对照组、阳性对照组、低剂量给药组和高剂量给药组共4组。连续给药7d后,采用碳廓清法、流式细胞术和分光光度法分别检测各组小鼠单核巨噬细胞吞噬功能、外周血淋巴细胞CD4 、CD8 和CD19 细胞百分含量以及血清溶血素。结果表明,高剂量给药组小鼠吞噬指数显著(P<0.05)高于阴性对照组;各给药组小鼠外周血淋巴细胞CD4 细胞百分率和CD4 /CD8 值均明显(P<0.05)高于阴性对照组,且血清溶血素含量均极显著(P<0.001)高于阴性对照组和阳性对照组。试验结果表明,复方丁氨丙磷溶液是通过增强机体非特异性防御机能和特异性细胞免疫反应以及特异性体液免疫功能来增强机体免疫功能的。     

抗牛T细胞表面抗原单克隆抗体的鉴定

目前具有人和小鼠淋巴细胞亚群鉴别功能的单克隆抗体(McAb)试剂已形成系列化和商品化,抗牛、马、羊、猪、兔、狗、豚鼠、大鼠和鸡等动物淋巴细胞的McAb也有报道。实践证明,McAb技术对于免疫活性细胞的分类测定、分离鉴定和表型与功能等的研究,甚至对于疾病的发病机理、诊断和治疗等的研究均具有重要价值。我国抗畜禽淋巴细胞McAb的研究起步较晚,尚未见有关的报道。为了促进我国兽医基础免疫学和临床免疫学的研究,我们进行了下述试验。(一)材料和方法1.细胞:牛胸腺细胞、外周血单个核细胞(PBM)、T细胞、B细胞和单核细胞的制备方法     

雏番鸭细小病毒疫苗在产蛋母鸡体内诱导的免疫动态研究

采用雏番鸭细小病毒(Muscovy duckling parvovirus,MPV)油乳剂灭活疫苗、弱毒疫苗及油乳剂灭活疫苗+弱毒疫苗分别经肌肉接种非易感动物--成年产蛋母鸡,并定期采血检测试验鸡的T、B淋巴细胞百分比值和MPV特异沉淀抗体的动态变化.结果,油乳剂灭活疫苗组产蛋母鸡T、B淋巴细胞比值从免疫前1周的常值28.50%上升到三免后1周的峰值46.30%;特异沉淀抗体从免疫前的常值0上升到三免后2周的峰值134.6.弱毒疫苗组产蛋母鸡T、B淋巴细胞比值从免疫前1周的常值27.83%上升到三免后1周的峰值39.17%;特异沉淀抗体从免疫前1周的常值0上升到三免后1周的峰值116.油乳剂灭活疫苗+弱毒疫苗组产蛋母鸡T、B淋巴细胞比值从免疫前1周的常值28.60%上升到三免后1周的峰值45.67%;同期其特异抗体由0升至164.结果表明,MPV各种疫苗均可以诱导产蛋母鸡产生明显的免疫应答,包括体液免疫与细胞免疫,其中效果最显著的是由油乳剂灭活疫苗+弱毒疫苗诱导的免疫应答.     

鹅细小病毒VP3基因疫苗与弱毒疫苗诱导小鼠免疫应答的比较

为阐明小鹅瘟基因疫苗与弱毒疫苗诱导细胞免疫和体液免疫的不同机理,将小鹅瘟VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)分别按6μg/只基因枪轰击和100 μg/只肌肉注射,小鹅瘟弱毒疫苗按100 μL/只肌肉注射免疫BALB/c小鼠,同时以pcDNA3.1(+)和生理盐水为对照.于免疫后第3、7、14、21、28、35、49、63、77、105 d采集抗凝血,用淋巴细胞转化试验(MTT法)和流式细胞仪(FACS)分别检测小鼠外周血T淋巴细胞的转化效果和CD4+、CD8+T淋巴细胞的动态变化,另外,在以上10个时间段以及免疫后第133、161、189、217 d分别采集凝血,用间接ELISA检测小鼠特异性IgG抗体水平.结果显示,pcDNA-GPv-VP3免疫小鼠的外周血T淋巴细胞对ConA刺激的反应,诱导的CD4+、CD8+T淋巴细胞免疫功能和血清IgG抗体水平在不同时间段都显著或极显著高于弱毒疫苗免疫组.3个免疫组小鼠都能诱导产生细胞免疫和体液免疫应答,并且基因疫苗诱导小鼠产生的细胞免疫和体液免疫应答比弱毒疫苗免疫组强.     

青海地区马骡驴血液T淋巴细胞值

检测T、B淋巴细胞,以往多采用玫瑰花环试验、淋巴细胞转化试验、荧光标记以及电镜观察等方法。自Mueller(1975)、Ranki(1976)以α-醋酸萘酯酶(ANAE)的反应产物作为T淋巴细胞的标记以来,国内外学者已用酸性非特异性酯酶染色法测定了马、骡、牛、羊、猪、鸡等家畜外周血液T淋巴细胞值。但尚未见有关青海高原马、骡、驴T淋巴细胞值的报道,因此,我们于1989～1990年对青海省湟中县田家寨乡的健康马、骡、驴T淋巴细胞值进行了测定。(一)材料与方法1.实验动物:选择临床健康马52匹,骡74头,驴60头。其中母马40匹,骟马12匹;1～5岁     

饲料与免疫

在探讨免疫失败和动物发病率上升的原因时,许多学者常只从疫苗接种、病原感染等直观因素方面去研究,而对饲料的营养有可能导致动物机体免疫功能下降,导致免疫失败的问题却往往忽视。本文仅就饲料中某些成分对动物机体免疫功能的影响罗列一些资料,以期引起对这方面的注意。 (一)饲料的营养成分与动物免疫功能的关系 参与免疫的器官有胸腺、脾脏、法氏囊、淋巴结、血管内皮等网状内皮系统;参与免疫的体内成份有抗体(免疫球蛋白)、补体、干扰素、白细胞、巨噬细胞、淋巴细胞等。一旦动物机体营养缺乏到一定程度,免疫器官可能     

家畜的免疫缺陷病

免疫缺陷是指机体的免疫系统发育缺陷或免疫应答障碍,由此而引起的疾病称为免疫缺陷病,其发生机理尚未完全阐明,已知与下列因素有关:(1)免疫器官发言不良;中枢免疫器官(胸腺和骨髓)和外周免疫器官(淋巴结和脾脏)是机体实现特异性免疫的组织学基础,发育不良会直接影响免疫细胞的生成或影响抗体和致敏淋巴细胞的产生;(2)免疫活性细胞的功能缺陷;多因代谢缺陷使免疫活性细胞不能执行正常功能;(3)淋巴细胞或体内蛋白质丢失:由于体内因素、病毒感染或理化因素等使淋巴细胞或蛋白质的破坏丢失加速;(4)参与免疫过程的各种辅助因素异常;(5)原发性免疫缺陷常与遗传因素有关;(6)由微生物感染或肿瘤所引起。     

重组鸡白细胞介素-6-2融合蛋白对鸡T淋巴细胞和B淋巴细胞免疫活性的影响

为研究重组鸡白细胞介素-6-2融合蛋白(rChIL-6-Linker-ChIL-2)对鸡体免疫功能的影响,采用MTS法检测重组融合蛋白在28日龄SPF鸡体内接种后不同时间对外周血淋巴细胞(PBLC)中T淋巴细胞和脾B淋巴细胞增殖活性的影响,采用流式细胞术检测它对鸡PBLC中CD3+CD4+T淋巴细胞、CD3+CD8+T淋巴细胞百分含量及CD4+/CD8+比值的影响。结果显示,接种后第7~35天,重组融合蛋白可显著提高鸡体PBLC中T淋巴细胞和脾中B淋巴细胞的增殖活性,两者活性分别高于单一rChIL-2蛋白或单一rChIL-6蛋白对照、低于或接近于rChIL-6蛋白+rChIL-2蛋白混合物。接种后第7~21天,重组融合蛋白可显著提高CD3+CD4+T淋巴细胞百分含量、降低CD3+CD8+T淋巴细胞百分含量,显著提高CD4+/CD8+比值,其活性显著高于单一rChIL-6蛋白或单一rChIL-2蛋白对照,但与rChIL-6蛋白+rChIL-2蛋白混合组差异不显著。结果表明,重组融合蛋白在鸡体内可显著促进T、B淋巴细胞增殖,提高CD3+CD4+T淋巴细胞百分含量和CD4+/CD8+比值,从而增强鸡体的体液免疫和细胞免疫功能;重组融合蛋白在体内发挥了ChIL-6和ChIL-2的协同作用活性。     

PCV2 ORF2 B细胞表位与PPV VP2真核表达质粒的构建及其免疫原性

为了研究猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2B细胞表位与猪细小病毒(PPV)VP2重组真核表达质粒的免疫原性,将PCV2ORF2的B细胞表位基因(141～257bp)重组到PPV SC-1株VP2基因的N端,构建了真核表达质粒pCI-VP2.ORF2B。用脂质体转染法将重组质粒pCI-VP2.ORF2B转染至Vero细胞中,利用间接免疫荧光法检测其在体外的表达情况。将重组质粒免疫小鼠,并设猪细小病毒灭活疫苗、猪圆环病毒亚单位疫苗和空载体对照组,采用MTT比色法、流式细胞术和ELISA法分别对免疫小鼠脾淋巴细胞的转化功能,外周血CD4+和CD8+淋巴细胞比例,PCV2和PPV IgG抗体效价进行了检测。结果表明,转染Vero细胞后第48小时用间接免疫荧光法能在荧光显微镜下观察到绿色荧光,检测到特异性蛋白的表达;pCI-VP2.ORF2B免疫组脾淋巴细胞从第7天开始对ConA有明显反应,显著高于对照组;CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴细胞的数量高于或显著高于对照组;在免疫后第14天检测到PPV/PCV2IgG抗体。提示pCI-VP2.ORF2B能够有效诱导机体产生细胞免疫和体液免疫反应。     

淋巴细胞亚群及其功能

淋巴细胞是机体免疫系统的主要组成部分。哺乳类动物的淋巴细胞系统有两大类,即专司细胞免疫的T淋巴细胞和专司体液免疫的B淋巴细胞。两群细胞各又可分为若干亚群。它们的数量极大,种类复杂,更新与分化均极迅速。淋巴细胞的共同特点是能识别抗原决定簇并与之结合。各种淋巴细胞之间既分工又协作,最后会同其他协同细胞和淋巴活素将抗原物质破坏并排出体外,保证机体内部的同质性,这在抵抗病原微生物和抑制肿瘤细胞的生成等方面起着极其重要的作用。     

真核共表达载体pCI-IFN-α-ORF2-VP2中IFN-α对其免疫原性的影响

采用PCR技术克隆分析了太湖猪IFN-α基因(PoIFN-α)CDS区全序列,将去信号肽的PoIFN-α基因片段插入重组质粒pCI-ORF2-VP2(已构建)构建了真核共表达质粒pCI-IFN-α-ORF2-VP2,并肌肉注射免疫小鼠,检测了不同时期小鼠的PPV和PCV2抗体水平、脾淋巴细胞增殖功能和外周血T淋巴细胞亚群的变化情况。结果,扩增出891bp大小包括PoIFN-α全基因的特异条带;小鼠免疫试验显示,pCI-IFN-α-ORF2-VP2质粒免疫组第7天后脾淋巴细胞对ConA开始有明显反应,同时可检测到抗PPV和PCV2的抗体,第14天后脾淋巴细胞增殖反应和抗体水平均高于pCI-ORF2-VP2免疫组,CD4+T细胞值和CD8+T细胞值第7天开始高于pCI-ORF2-VP2和pCI-neo空载体试验组。提示,真核共表达载体pCI-IFN-α-ORF2-VP2中PoIFN-α基因对其诱导机体产生的细胞免疫和体液免疫有一定的增强作用。     

兔瘟病兔外周血T淋巴细胞转化功能的观察

我们曾用α醋酸萘酯酶染色法观察了兔外周血液和淋巴器官中T淋巴细胞变化动态,发现兔瘟病毒可引起外周血液中醋酸萘酯染色阳性(ANAE~ )淋巴细胞百分率显著降低,它表明血液中T淋巴细胞数量显著减少,也可能反映淋巴细胞功能受损而导致酶活性消失(《中国兽医科技》,1989,7,25～26)。为了探讨兔瘟时机体的细胞免疫功能是否受损,本项研究用形态学方法对兔瘟病兔外周血液T淋巴细胞的转化功能进行了检查。     

鸡T淋巴细胞和B淋巴细胞分离纯化方法的建立

将鸡胸腺和腔上囊淋巴组织剪碎后与PBS磷酸盐缓冲液混合,通过密度梯度离心和尼龙棉柱过滤对T、B淋巴细胞进行了分离纯化。纯化的T、B淋巴细胞以FITC标记的鼠抗鸡CD4单抗,RPE标记的鼠抗鸡CD8单抗,FITC标记的鼠抗鸡Bu-1单抗染色,用流式细胞仪分类检测其纯度,用台盼蓝排斥试验检测T、B淋巴细胞的活力。结果表明,以本研究建立的方法分离到的T、B淋巴细胞纯度较高(均达90%以上),细胞活力强,与流式细胞仪分选的效果相当,且经济简便。