盐析囊液抗原用于ELISA诊断绵羊包虫病的试验

寄生蠕虫的共同抗原多为体抗原,特异抗原多为分泌/排泄抗原。包虫囊液中含较丰富的分泌/排泄产物,是获取包虫特异抗原的主要来源。但是囊液中还含有共同抗原和宿主体液成份,这是造成交叉反应和假阳性反应的因素。用包虫粗囊液作为抗原建立的诊断方法,往往特异性差、灵敏性低、囊液抗原成份不易标准化。本试验将盐析囊液抗原用于ELISA,以验证其在绵羊包虫病诊断中的灵敏性和特异性。     

绵羊进行性肺炎ELISA诊断方法的建立

绵羊进行性肺炎ＥＬＩＳＡ诊断方法的建立符子华李淑霞呼西旦易中王进成高梁（新疆畜牧科学院兽医研究所乌鲁木齐８３００００）绵羊进行性肺炎（ＯＰＰ）是由反转录病毒科慢病毒亚科的ＯＰＰＶ引起的一种传染病，在许多养羊国家广泛流行。我们于１９８４年用血清学方法确...     

应用B超诊断绵羊包虫病

Ｂ超在人医临床诊断中已广泛应用 ,但用于绵羊包虫病诊断的报道较少。为了探讨适用于包虫病的简便、直观的诊断方法 ,我们用小型Ｂ超机进行了绵羊包虫病的诊断试验。材料　某农场绵羊 5 1只 ,其中 3岁新疆细毛羊 1只 ,4～ 7岁杂种细毛羊 5 0只 ;人用小型Ｂ超机 ,汽油发电机及食用植物油等。操作方法　在绵羊右侧距背中线至距腹中线各约 10ｃｍ、从最后肋骨向前约 15ｃｍ处剪毛 ,毛根不高于 0 .3ｃｍ ,使肝区充分外露。让受检绵羊站立 ,在剪去毛的范围内涂抹植物油 ,一人双手托住羊颈部保定 ,另一人手持Ｂ超探头 ,一边紧贴肝区移动探头 ,一边…     

绵羊包虫病的皮内试验

皮内试验尽管是一种古老的免疫学诊断方法,但由于其具有较高的敏感性,且操作简便,反应结果快速,故仍在广泛应用。绵羊包虫病的皮内试验,兰州兽医研究所在五十年代就进行过研究并予以报道。当前普遍认为,同时应用2～3种免疫学诊断方法,综合诊断绵羊包虫病,可提高其检出率。因此,我们拟定了以酶联免疫吸附试验、间接血球凝集试验和皮内试验等3种方法协同进行包虫病诊断的方案,故对皮内试验进行了进一步探讨。     

绵羊肺炎支原体特异性诊断靶标筛选及其间接ELISA方法的建立

本研究旨在筛选出绵羊肺炎支原体（Mo）特异性抗原靶标,并建立间接ELISA方法。利用Pulldown实验结合LC-MS技术分析,筛选Mo的抗原靶标并进行表达纯化,使用Western-blot试验分析纯化蛋白的反应原性;免疫小鼠,分析蛋白免疫原性、制备免疫血清,建立基于靶标蛋白的间接ELISA方法,并对其进行性能评价。结果显示,筛选出的Mo pdhD蛋白的分子质量为71 ku,该蛋白与稀释度为1∶4 000的Mo阳性血清仍可以发生反应,免疫小鼠血清效价可达1∶102 400,建立的间接ELISA方法不与绵羊痘病例等的阳性血清产生交叉反应,批间及批内重复的变异系数均在12%以内,与IHA法符合率可达82.5%。可见,Mo pdhD蛋白具有良好的反应原性与免疫原性,建立的间接ELISA方法性能良好,可用于Mo的血清学诊断,为进一步研发Mo ELISA抗体检测试剂盒奠定了基础。     

ELISA、BA-ELISA和IHA检测抗K88ac抗体的研究

本文报告了用自制IgG型兔抗猪IgG、IgA、IgM型抗体,建立ELISA和BA-ELISA方法检测乳汁和血清中IgG、IgA和IgM型抗K_(88)ac抗体,并和IHA检测抗K_(88)ac抗体的方法进行比较,结果表明:BA-ELISA和ELISA方法不仅灵敏度高、重复性好,而且可区分IgG、IgA、IgM型抗K_(88)ac抗体,可作为评价大肠杆菌苗免疫效果和研究大肠杆菌苗免疫机理的手段之一。     

吡喹酮治疗绵羊包虫病初报

包虫病(棘球蚴病Hydatidnsis或Hydatid disedse)是一种古老的人畜共患寄生虫病。尽管从本世纪初开始,即有人从事本病的治疗研究,特别是近十余年来,国内外学者筛选出十多种药物,并作了大量动物试验,但结果均不够理想。 有关绵羊包虫病的治疗,以往研究较少,主要是因为绵羊饲养周期短,有些地区感染率颇高,进行大群治疗难以取得经济效益,但从预防的角度考虑,应用化疗杀灭绵羊患病脏器     

应用干血纸ELISA诊断绵羊肝片吸虫病的研究

1984～1987年,我们先后对人工感染和自然感染肝片吸虫的绵、山羊血清,应用ELISA进行了实验室检测和区域试验。结果证明,此法灵敏、特异,且适用于早期诊断。为便于推广应用,适应牧区需要,特开展了耳尖采血制备滤纸干血滴,进行ELISA的研究。     

应用TmAdh3重组蛋白建立绵羊脑多头蚴病间接ELISA诊断方法的研究

为评价多头带绦虫TmAdh3重组蛋白作为脑多头蚴病诊断抗原的潜力,根据多头带绦虫TmAdh3基因组序列,人工优化合成TmAdh3基因ORF序列并连接至表达载体pGEX-4T-1,转化至大肠杆菌BL21中诱导表达,利用Western-blot分析纯化的重组蛋白的反应原性,优化检测条件,建立脑多头蚴病间接ELISA诊断方法并进行评价。结果显示,成功表达了分子质量大小为39.0 ku的重组蛋白rTmAdh3。间接ELISA检测的最适反应条件为：5.00μg/m L重组蛋白rTmAdh3在4℃包被过夜;1∶100稀释血清在37℃孵育30min;1∶10 000稀释的HRP标记的酶标二抗在37℃孵育45 min,底物避光显色10 min。应用建立的方法可检测到人工感染脑多头蚴后第3～8周的绵羊血清;对40份自然感染脑多头蚴的绵羊（剖检确认脑部有包囊）血清的阳性检出率为22.5%(9/40)。与细粒棘球蚴感染绵羊血清和细粒棘球蚴Eg95免疫绵羊血清交叉反应率为5%(4/80)。结果表明,本研究建立的以TmAdh3重组蛋白作为检测抗原的间接ELISA诊断方法可用于绵羊脑多头蚴感染早期的筛选。     

基于TPX和CatB4重组蛋白的绵羊肝片吸虫病间接ELISA诊断方法的建立

为了建立早期快速诊断绵羊肝片吸虫病的血清学方法,原核表达肝片吸虫TPX和CatB4重组蛋白.分别以TPX、CatB4重组蛋白作为包被抗原,建立2种检测肝片吸虫血清抗体的间接ELISA方法.采用棋盘式方法优化反应的最佳血清稀释度和抗原包被量,同时对间接ELISA方法的其他反应条件进行了筛选.蛋白免疫印迹结果显示,重组蛋白...     

基于绵羊肺炎支原体Enolase蛋白建立间接ELISA抗体检测方法

旨在建立一种检测绵羊肺炎支原体(Mo)血清抗体的间接ELISA方法,笔者构建了 Mo Enolase基因原核表达载体,诱导表达后,纯化的重组蛋白用Western-blot分析其反应原性.以重组蛋白为包被抗原,建立了 Mo间接ELISA抗体检测方法.结果显示,重组蛋白得到可溶性表达,Western-blot证实具有良好的...     

绵羊棘球蚴囊液抗原在IHA中的特异性研究

本研究应用粗制绵羊包囊液作抗原致敏经戊二醛处理的鞣酸化绵羊红细胞,进行微量间接血凝试验(IHA),检测棘球蚴病羊血清400份、健康羊血清45份、细颈囊尾蚴病羊血清13份、肝片吸虫病羊血清21份、边虫病羊血清20份、多头蚴病羊血清1份,阳性反应率依次为83.1％、13.33％、33.46％、4.35％、0％、0％。以40％饱和硫酸铵盐析抗原对上述健康羊血清、细颈囊尾蚴病羊血清及96份棘球蚴病羊血清的检测结果依次为13.33％、38.46％、87.5％。对分段盐析的其他组份及葡聚糖凝胶层析抗原、醋酸盐析抗原、牦牛肺包囊液抗原、鼠包囊液抗原也进行了初步试验,均未获得满意结果。     

吡喹酮、丙硫苯咪唑治疗后绵羊包虫病的病理组织学研究

绵羊包虫病是我国西北地区广为流行的常见病。近几年来日益重视化疗的研究。本文目的在于使用吡喹酮或丙硫苯咪唑治疗肺,肝包虫病后,观察其囊和原头蚴的病理形态学变化,以求探讨这两种药物最佳的给药途径和剂量。材料与方法(一)试验动物 甘肃省皇城羊场繁殖的甘肃细毛羊,经X线透视和超声波诊断自然感染细粒棘球蚴的成年母羊55只。共分8组:1组9只,7.5％吡喹酮肌肉注射100mg/kg,共3次,间隔5日;2组9只,吡喹酮口服100mg/kg,共3次,间隔5日;3组9只,7.5％吡喹酮肌肉注射50mg/kg,共3次,间隔5日;4组9只,丙硫苯咪唑口服100mg/kg,共3次,间隔5日;5组4只,7.5％     

ELISA诊断猪痢疾

自1982年由L.A.Joens等报告了应用ELISA检测猪痢疾密螺旋体的抗体以来,国内除作者于1984年做了题为《应用酶联免疫吸附试验诊断猪痢疾的初步研究》(见华中农业大学学报,1988.1.)外,迄今未见有关内容报道。本文就进一步研究的有关情况和结果报告如下。 (一)材料和方法 1.超声处理抗原:按罗满林等在《华中农业大学学报,1988,1.》报道的方法进行。 2.脂多糖抗原:基本上同Joens等(1982)方法、略改进。将制成的猪痢疾密螺旋体     

莱姆病间接ELISA诊断方法的建立及应用

使用培养的狭义伯氏疏螺旋体B31菌株制备可溶性抗原,建立羊莱姆病血清抗体的间接ELISA诊断方法。应用伯氏疏螺旋体阴性、阳性血清评价该方法的特异性和敏感性。根据所建立的方法对从甘肃省甘南地区采集的450份羊血清进行检测。结果显示,该方法对羊莱姆病的阳性检出率和阴性符合率分别为90.1%和90.0%,与羊霉形体、布鲁氏菌、弓形虫以及羊无浆体、巴贝斯虫、泰勒虫等常见蜱传播病原的阳性血清之间没有交叉反应。甘肃省甘南地区夏河县、临潭县和卓尼县羊莱姆病的感染率分别为3.3%、6.1%和4.1%,甘南地区的平均感染率为5.1%。结果表明,本研究所建立的方法能够用于羊莱姆病的血清学诊断,甘南地区可能存在莱姆病的自然疫源地。     

牛巴贝斯虫病ELISA诊断方法的建立

以BORCT蛋白为包被抗原,优化最佳反应条件,确定阈值并测定其交叉反应,建立了一种特异性检测牛巴贝斯虫抗体的间接ELISA方法。利用该方法测定了试验感染的2头牛的抗体动态曲线,并对我国四川、甘肃、新疆3个省(自治区)的314份牛血清样品进行了检测。结果显示,经MedCalc 12.7.3.0软件分析86份阴性血清和69份阳性血清的检测结果,确定29.6%抗体比率为该方法的阳性阈值,对应的敏感性和特异性分别为94.2%和96.5%,并且与其他巴贝斯虫、泰勒虫和无浆体阳性血清均无交叉反应。对试验感染动物的检测结果显示,感染后的第6天出现特异性抗体,第12天达到最高值,一直持续到第270天。野外样品检测结果显示,3个省份均有牛巴贝斯虫的分布,平均阳性率为46.82%。     

牦牛传染性鼻气管炎ELISA诊断方法的研究

牛传染性鼻气管炎(IBR)是由牛疱疹病毒1型(BHV—1)引起的以呼吸道、眼和生殖道炎症为主要特征的传染病。目前已遍及欧、美、亚、非、澳各大洲的许多国家。随着我国对外贸易事业发展,IBR的检疫工作日渐重要。近年来,有些学者开展了用ELISA检测IBR病毒抗体的研究。但以牦牛IBR病毒为抗原来检测牛血清中的相应抗体,尚未见到报道。本文应用间接ELISA对四川炉霍县的牦牛、兰州地区一部分奶牛和云南曲靖地区的一部分水牛的血清进行了检测,取得了比较满意的结果。     

牛肺包虫病的X线诊断

牛肺包虫病是由细粒棘球绦虫（Ｅｃｈｉｎｏｃｏｃｃｕｓｇｒａｎｕｌｏｓｕｓ）和多房棘球绦虫（Ｅ．ｍｕｌｔｉｌｏｃｕｌａｒｉｓ）的幼虫感染所致的一种人畜共患病。其成虫主要寄生在犬的小肠内,随排粪将绦虫的体节和虫卵排到体外污染环境和草场。人和家畜误食了虫卵后,便在肺和肝等器官形成囊泡样病变,称为囊泡期（即幼虫期）。它可以侵袭所有的哺乳动物,但主要危害牛、羊、骆驼和鹿等反刍动物。棘球蚴病在我国牧区分布极为广泛,牛羊感染率可达４０％～１００％,家畜感染后病程缓慢,造成饲料空耗、毛和肉减产,农畜丧失使役能力…     

猪瘟RT-PCR ELISA诊断方法的建立及其初步应用

建立了检测CSFV的快速、敏感、特异的RT PCRELISA方法。在RT PCR过程中以地高辛标记的dUTP(DIG dUTP)标记PCR产物 ,用生物素标记的捕获探针在链亲和素包被微量板孔中杂交捕获PCR产物。该方法的敏感性较常规RT PCR方法高 10 0倍 ,可检测出 35 0 μL1∶10 0 (相当于 3.5mg)的兔脾组织悬液中的C株CSFV ,特异性强 ,避免了PCR过程中因污染导致的假阳性结果。通过对RT PCR和微量杂交系统的条件优化 ,该方法用于检测C株兔脾组织毒、细胞适应毒和野毒感染的猪组织毒样品 ,效果良好     

牛传染性鼻气管炎间接ELISA诊断方法的建立

以牛肾细胞系(MDBK)培养牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)Bartha Nu/67株,经超速离心纯化病毒,再经超声破碎处理后作为诊断抗原,建立了检测牛血清IBRV抗体的间接酶联免疫吸附试验。该ELISA的判定标准为:血清D490 nm值大于0.369的判为阳性,小于0.295的判为阴性,在0.295与0.369之间的为可疑。特异性和重复性试验结果表明,该方法特异性高、重复性好。与法国进口ELISA抗体诊断试剂盒比较,其符合率为96.3%;与中和试验比较,符合率为95.8%,且敏感性更高。应用该诊断方法调查了我国部分地区IBRV的感染情况,结果显示,这些地区的IBRV感染率为67.1%。