马杜霉素水溶剂抗鸡柔嫩艾美耳球虫的效力试验

马杜霉素水溶剂抗鸡柔嫩艾美耳球虫的效力试验张勤，刘素巧，李瑞学，张晋江，刘珏如（河北省畜牧兽医研究所保定０７１０００）（石家庄市动物检疫站）（河北省畜牧兽医站）马杜霉素（Ｍａｄｕｒａｍｙｃｉｎ）是一种新的聚醚类抗生素，属于离子载体型抗球虫剂。在这类抗...     

用柔嫩艾美耳球虫感染鸡胚测定和评价抗球虫药的效力

用柔嫩艾美耳球虫感染鸡胚测定和评价抗球虫药的效力１）张勤赵洪明２）张晋江３）李华风４）张华莹（河北省畜牧兽医研究所保定０７１０００）由于球虫对药物极易产生抗药性，所以大多数抗球虫药的使用期限都较短，这样就需要不断地研制新的抗球虫药。在抗球虫药的研究中...     

杀球灵抗柔嫩艾美耳球虫的效力观察

我们受比利时杨森制药公司(Janssen Phar-maceutica)的委托,对该公司最近研制的杀球灵进行抗柔嫩艾美耳球虫效力试验,并进一步确定本品对中国北京白鸡的柔嫩艾美耳球虫虫株的抗球虫效果。(一)材料和方法1.试验药物:(1)杀球灵(Diclazuril):由比利时杨森公司提供,使用浓度为1ppm。(2)莫能菌素(Monensin):由北京农业大学生物学院提供,使用浓度为110ppm。(3)氨丙啉(Amprolium):系上海第二药厂生产,使用浓度为125ppm。     

安徽省五株柔嫩艾美耳球虫的RAPD分析

通过比较柔嫩艾美耳球虫敏感株与耐药株之间DNA条带的差异来分析耐药性,寻找鸡球虫耐药性虫株的分子标记。采用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对安徽省阜南、舒城、和县、全椒、凤台这5个地区的柔嫩艾美耳球虫和2株敏感株进行遗传多样性分析,同时用5种常用抗球虫药分别对这5个野外分离株进行鸡体试验,5个虫株对上述5种药物均有不同程度的耐药性。RAPD结果显示:5个样品都有相似而清晰的主带,每个泳道有1~25条带不等,大小为2 kb以下。南京敏感株与上海敏感株之间的相似性最高,为78.57%,全椒株与和县株最低且上海敏感株和凤台株最低,均为40.00%,其余虫株之间的相似性处于两者之间,株间平均值为53.85%。5个地理株与2个敏感株之间的SI值也处于较低水平,表明耐药虫株的基因处于较高的变异水平,存在丰富的遗传多样性。     

鸡球虫活苗的田间试验

鸡球虫活苗的田间试验韩谦吴文学刘群（中国农业大学动物医学院北京１０００９４）陆京平姬瑞周（北京市海淀区兽医站）目前世界上已注册的球虫苗有４种，其中有美国的活苗（Ｃｏｃｃｉｖａｃ）和加拿大的活苗（Ｉｍｍｕｃｏｘ），以及英国的弱毒活苗（Ｐａｒａｃｏｘ）和...     

柔嫩艾美耳球虫NADP特异性谷氨酸脱氢酶特性分析

为了研究柔嫩艾美耳球虫NADP特异性谷氨酸脱氢酶(EtNADP-GDH)的分子特性,对该基因进行了克隆和生物信息学分析,利用间接免疫荧光定位、体外入侵抑制、实时荧光定量PCR、Western-blot和体外酶活性检测等方法分析其生物学特性。结果显示,成功获得了EtNADP-GDH基因,该基因编码的蛋白富含包括NAD结合位点在内的多种功能位点。该蛋白主要分布在虫体的表面和细胞质中,抗rENADP-GDH多克隆抗体能抑制子孢子入侵DF-1细胞,抑制率约为45%,表明其参与了虫体入侵宿主细胞。荧光定量PCR结果显示,该基因在未孢子化卵囊阶段的转录水平最高;转录、翻译水平分析发现,与敏感株相比,2个耐药株(地克珠利耐药株和马杜拉霉素耐药株)中EtNADP-GDH的转录水平显著提高,而翻译水平无明显差异;酶活性分析结果显示,耐药株和敏感株差异不明显。结果表明,该蛋白可能对虫体在宿主细胞内的生长发育起作用并参与了子孢子入侵宿主细胞的过程。     

鸡柔嫩艾美耳球虫CDPK和鸡IFN-γ重组质粒的构建与体外表达

采用SOE-PCR技术将鸡柔嫩艾美耳球虫CDPK抗原基因与鸡干扰素-γ(IFN-γ)基因用(GGGGS)315个疏水柔性氨基酸接头融合,扩增出IFN-γ-CDPK融合基因,将其克隆到pMAL-p2X载体上,构建了重组原核表达质粒pMAL-IFN-γ-CDPK,用IPTG诱导表达并纯化重组蛋白,经免疫印迹分析该蛋白的生物学活性。结果显示,成功构建了共表达IFN-γ-CDPK融合基因的原核表达载体,表达纯化了具有良好的免疫反应性的IFN-γ-CDPK融合蛋白,表达纯化的IFN-γ-CDPK融合蛋白能够和鸡柔嫩艾美耳球虫甘肃株抗血清发生特异性结合,为进一步研制高效力的鸡球虫新型基因工程疫苗奠定了基础。     

耐氯羟吡啶柔嫩艾美耳球虫株的鉴定

鸡球虫病的防治主要依赖于抗球虫药，但用药失败的现象时有发生，其中主要原因是耐药性虫株的出现。检测耐药虫株出现的时间及范围对指导合理用药，提高疗效极为重要。河北省张家口市某鸡场连续五年用氯羟吡啶防治鸡球虫病效果良好，但1993年夏用该药防治失败，爆发鸡球虫病，造成严重经济损失。现将从该场分离到的一株柔嫩艾美耳球虫耐氯羟吡啶株的鉴定过程报告如下。（一）材料和方法1.实验鸡:刚出壳的艾维茵雏鸡200只，饲养在火焰消毒的铁丝笼内，饲料经80℃干烤4小时，饮水煮沸消毒。至12日龄开始试验。2.药物：盐霉素（钙）预混剂，含…     

牦牛艾美耳球虫的研究

寄生于牛的艾美耳球虫,在国内仅有少数病例报告。关于牦牛艾美耳球虫的报告更为少见。1982年7月,我们在四川省阿坝藏族自治州红原县,对牦牛的球虫进行一些调查研究工作,现报告如下:     

柔嫩艾美耳球虫感染鸡的盲肠上皮间淋巴细胞表达白介素17的动态变化

以1×104个柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)孢子化卵囊感染10日龄AA肉鸡,于感染后第24、48及72小时分离鸡盲肠上皮间淋巴细胞(IELs)。提取鸡盲肠IELs总RNA,用实时荧光定量PCR方法检测IL-17的表达动态;然后用FITC标记的抗鸡CD4单抗和PE标记的抗小鼠IL-17单抗作为抗体对盲肠IELs进行荧光抗体染色,再进行流式细胞术分析,检测了表达IL-17的CD4+盲肠IELs在柔嫩艾美耳球虫感染后的动态变化。实时荧光定量PCR结果表明,鸡在感染柔嫩艾美耳球虫后能够显著上调IL-17mR-NA的表达水平,流式细胞分析结果表明,在球虫感染后表达IL-17的CD4+细胞数量显著上升。这些结果表明,IL-17参与了宿主抵抗球虫感染的反应。     

中药体外抗柔嫩艾美球虫的研究

根据中兽医学理论和鸡球虫病的特点选用中药组方,进行体外抗球虫试验.结果所用中药组方具有明显抑制未孢子化卵囊的孢子化过程,且对已孢子化卵囊具有杀灭作用.     

地克珠利对柔嫩艾美耳球虫SAG4表达的影响

建立地克珠利抗柔嫩艾美耳球虫感染鸡动物模型,收集获得柔嫩艾美耳球虫第2代裂殖子,采用PCR扩增柔嫩艾美耳球虫第2代裂殖子SAG4基因不含N端信号肽的编码序列,构建p ET-28a-SAG4表达质粒,转化至BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导表达融合蛋白,镍亲和层析柱法纯化蛋白,通过免疫BALB/c小鼠制备SAG4抗血清。用Real-time PCR检测SAG4 m RNA的表达,用Western-blot和免疫荧光技术检测SAG4蛋白的表达情况。结果显示,p ET-28a-SAG4表达的重组蛋白为可溶性蛋白,地克珠利显著降低了柔嫩艾美耳球虫第2代裂殖子SAG4基因m RNA和蛋白的表达。这提示SAG4基因可能与地克珠利抗球虫作用相关,这将为地克珠利抗球虫作用机理的阐述提供理论依据。     

柔嫩艾美球虫感染对鸡体内一氧化氮水平的影响

对33日龄健康罗曼公鸡口服接种1.5×105个柔嫩艾美球虫孢子化卵囊,分别于感染0、2、4、6和8 d扑杀,检测其血清、心、肝、脾、肺和肾组织NO含量.结果表明,试验鸡血清NO水平在感染第4 d显著低于对照鸡(P＜0.05),至感染第8 d显著高于对照鸡(P＜0.05);心、肺NO水平与对照鸡相比差异不显著(P＞0.05);肝NO水平在感染第6 d极显著高于对照鸡(P＜0.01),其他时间与对照鸡无显著差异(P＞0.05);脾NO)水平在感染第2 d和第8 d均显著低于对照鸡(P＜0.05);肾NO水平在感染第2 d极显著高于对照鸡(P＜0.01),自第4 d到试验结束与对照鸡相比差异不显著.提示在鸡柔嫩艾美球虫感染过程中NO)可能通过介导机体免疫而参与抗病作用.     

实验性鸡腔上囊病对柔嫩艾美球虫感染的影响

鸡传染性腔上囊病（ＩＢＤ）是鸡的一种急性、高度接触性传染病，鸡的腔上囊是传染性腔上囊病病毒（ＩＢＤＶ）攻击的主要靶器官。由于腔上囊受损伤后影响Ｂ细胞的形成，产生免疫抑制，使机体对多种疾病的抵抗力下降，极易感染其它疾病。本试验旨在观察鸡感染ＩＢＤＶ强毒...     

柔嫩艾美耳球虫DF-1细胞培养体系的建立及应用

为了建立柔嫩艾美耳球虫的鸡胚成纤维传代细胞(DF-1)培养体系,并应用于柔嫩艾美耳球虫子孢子的细胞入侵活力检测,将CFDA-SE标记的子孢子接入DF-1细胞,利用流式细胞仪测定子孢子的细胞入侵活力。比较了37℃和41℃培养温度下,子孢子对DF-1、MDBK、Vero、BHK、MDCK五种细胞的入侵活力。优化了在子孢子入侵活力检测时,DF-1细胞最佳培养条件。结果表明,柔嫩艾美耳球虫子孢子在DF-1细胞中可发育为第一代裂殖子。在不同培养温度下,子孢子对DF-1细胞的入侵活力均高于其他细胞。优化后的DF-1细胞培养体系的培养程序为:用含100mL/L胎牛血清的DMEM稀释DF-1细胞,以每孔1×105个细胞铺被24孔板,37℃、50mL/L CO2培养24h后,用含50mL/L胎牛血清的DMEM换液后,每孔接入3×105个子孢子,41℃、50mL/L CO2培养8～12h,收集细胞进行检测。     

鸡球虫田间混合种和柔嫩艾美球虫单一种的抗药性试验

用上海某鸡场分离的球虫田间混合种及从其中分离纯化的 4株柔嫩艾美球虫 (Eimeriatenella)单一种对常用抗球虫药的抗药性进行检测。发现该球虫田间种对氯羟吡啶 (clopidol)、马杜拉霉素 (maduramicin)、莫能菌素 (monensin)、氨丙啉 (amprolium) 4种抗球虫药已产生完全抗药性 ,对氯苯胍 (robenidine)轻度抗药 ,对地克珠利 (diclazuril)无抗药性。 4株柔嫩艾美球虫单一种对氯羟吡啶、马杜拉霉素、莫能菌素、氨丙啉的抗药谱与该球虫田间混合种基本一致     

脆弱艾美耳球虫、波氏艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫在培养细胞里的发育

在培养细胞里培养了鸡艾美耳球虫、波氏艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫,观察了它们的生长形态和培养条件。已获得的结果摘要如下。 (一)脆弱艾美耳球虫在用孢子体接种的细胞培养中发育成卵囊,波氏艾美耳球虫发育到成熟的第二代裂殖体。没有发现处于生长期的堆型艾美耳球虫。 (二)在培养脆弱艾美耳球虫第二世代裂殖体时,只有少数裂殖子侵入培养细胞,不过没观察到进一步的发育。 (三)裂殖体区分为三种形态学类型。第一种类型的裂殖体跟在活体里发现的形态一样。第二种类型裂殖体的细胞质分裂成大小不一的团块。每一团块包含一个或较多的细胞核。第三种类型裂殖体同细胞里的孢子体相似,尽管它们在量度上比后者明显大些。它们有一个折光体,一个大细胞核和丰满的细胞质。 (四)在裂殖子形成过程中看到三种不同的方法。裂殖子是由第一种类型的裂殖体,第二种类型裂殖体的球形体和第三种类型裂殖体的球状物的表面分裂而形成的。 (五)在试管里培养脆弱艾美耳球虫的最适条件在于应用鸡肾细胞和含有0.2％酵母浸出物的No.199培养基,并置40℃培养。当应用鸡胚成纤维细胞和把培养物保存在Eagle's最小必需量培养基里并在40℃孵育波氏艾美耳球虫时取得了满意的结果。     

复方敌球灵对鸡柔嫩艾美耳球虫孢子生殖及致病力的影响

复方敌球灵对鸡柔嫩艾美耳球虫孢子生殖及致病力的影响１）胡庭俊梁纪兰党萍樊斌堂刘大义（中国农业科学院中兽医研究所兰州７３００５０）鸡球虫病是一种严重危害养鸡业的寄生虫病，病原体为艾美耳属球虫。近年来，中国农业科学院中兽医研究所研制出了抗鸡球虫中药制剂敌...     

柔嫩艾美耳球虫SSADH基因的克隆原核表达与序列分析

为研究柔嫩艾美耳球虫琥珀酸半醛脱氢酶(SSADH)的生物学功能,参考已公布的柔嫩艾美耳球虫SSADH(EtSSADH)的基因序列设计特异性引物,运用RT-PCR方法扩增EtSSADH基因序列,将扩增产物克隆入pGEX-4T-1载体进行诱导表达。同时,利用在线软件对该基因编码蛋白的氨基酸序列进行生物信息学分析。结果显示,EtSSADH基因的ORF序列长1896 bp,编码631个氨基酸;该编码蛋白主要定位于线粒体,不含信号肽,无跨膜结构域;将EtSSADH与不同物种SSADH氨基酸序列进行比对,发现该蛋白氨基酸序列之间具有较强的保守性。诱导表达后获得分子质量约91.18 ku的重组蛋白。EtSSADH基因的成功克隆与表达为该酶的功能研究奠定了基础。     

中药复方禽球灵抗鸡柔嫩艾美球虫的效果

采用人工感染发病方法 ,观察了中药复方禽球灵抗鸡柔嫩艾美球虫的效果。结果表明 ,10 g/kg禽球灵对柔嫩艾美球虫的感染有较好的预防效果。抗球虫指数 (ACI)达 15 1.4 8,血便分数较感染不给药组降低了 4 8.2 2 % ,料肉比较感染不给药组降低了 2 6 .2 9%。