杯口边缘附着微量口唇脱落细胞的检验

目的　探讨对遗留在杯口边缘的微量口唇黏膜脱落细胞进行DNA分型的可行性及影响因素 ,为案件的侦查提供指导作用。方法　分类提取饮水后容器边缘口唇黏膜脱落细胞中的DNA ,应用荧光标记PCR STR分型技术进行DNA分析。根据每个样本DNA基因座的检出个数 ,分别计算出基因座检出率。结果　不同容器、不同饮料对口唇黏膜脱落细胞DNA检验的影响不同。结论　杯口遗留的口唇黏膜脱落细胞 ,可作为一种法庭生物检材进行DNA分析 ,在实际办案中占有一席之地     

微量生物检材提取2例

微量生物检材的提取是DNA检验技术中经常碰到而又较难处理的问题。作者通过对在实际检案中遇到的两种特殊生物检材上微量DNA的提取,成功进行DNA分型,报道如下。1案例案例1:某日,我市一女子被杀,现场提取到有价值的物证仅为6个果冻壳。通过擦拭果冻壳“撕口处”脱落细胞,采用推柱去载体,离心浓缩细胞,Chelex-100法提取,均成功检见包括Amel在内的10个位点。结果显示有4个与死者血的DNA分型一致,另两个为同一男性的DNA,经过调查确认为犯罪嫌疑人所留。案例2:某日,某盗窃案现场提取到犯罪嫌疑人喝过的“娃哈哈鲜橙汁”饮料瓶1只。通过擦…     

签字笔上附着的脱落上皮细胞STR分型

目的 探讨遗留在签字笔上微量脱落细胞DNA分型的可行性以及保存时间对分型的影响.方法 17名志愿者每人使用7支签字笔,每支笔每天使用20 min,为期1个月,分别保存1、3、5、7、14、21和28 d,运用硅珠法提取签字笔上微量脱落细胞中的DNA,应用荧光标记PCR-STR技术进行DNA分型,同时采集上述17名志愿者口腔拭子作为对照,分析签字笔作为检材进行DNA分型的可行性以及保存时间对DNA分型的影响. 结果以基因座检出个数为指标,签字笔脱落细胞和口腔拭子的DNA分型结果随保存时间变化而产生的差异具有统计学意义(P＜0.01).签字笔保存1、3、5、7、14、21和28 d后进行DNA分型检出的基因座个数与对应的口腔拭子DNA分型检出的基因座个数相比差异均有统计学意义(P＜0.01).签字笔使用后保存1 d进行DNA分型.可明确判读12个以上基因座的占41.2%. 结论签字笔上附着的微量手指脱落细胞可作为一种法庭生物检材进行DNA分型,但其保存时间会影响DNA分型.     

微量口腔脱落细胞检材的DNA检验

目的寻求提高微量口腔脱落细胞检材的DNA检验成功率的简便有效的提取方法。方法对不同载体上的100份微量口腔脱落细胞检材采用小体积Chelex-100法提取DNA,在ABI7500型荧光定量PCR仪上进行定量,同时用IdentifilerTM复合扩增系统扩增,在ABI3130遗传分析仪上进行STR分型。结果从25根饮料吸管上提取的DNA量在0.72～116.7.8ng,16个水杯杯缘提取的DNA量在2.15-142.5ng,31个饮料瓶(罐)口提取的DNA量在1～34.65ng,10根筷子上提取的DNA量在3.35～26.6ng,12个果核中提取的DNA量在0.294～21.4ng,6份吃剩的骨头中提取的DNA量在0.88～5.88ng。100份检材性别及9个以上STR位点分型成功率平均为59.38%。除了使用者的个人原因外,检材的提取送检方式、检材的质地、饮料的性质对提取的DNA量有显著影响,是否加蛋白酶K对提取的DNA量无显著影响。结论采用小体积Chelex-100法可对60%左右的微量口腔脱落细胞检材提取DNA进行STR分型。     

微量细胞DNA分型的法医学应用研究进展

微量细胞DNA分型已成为目前法医学研究的热点之一。如果能够从犯罪现场遗留的微量疑难生物检材中提取到细胞,并获得DNA分型,这无疑将会大大拓宽检材的范围。同时可以为刑事案件的侦查提供线索、为法庭量刑提供有力的证据。本文从微量细胞的捕获、DNA模板的制备、扩增和检测及应用前景几个方面综述了微量细胞DNA分型在法医学中的研究进展。     

微量细胞DNA分型的法医学应用研究进展

微量细胞DNA分型已成为目前法医学研究的热点之一。如果能够从犯罪现场遗留的微量疑难生物检材中提取到细胞，并获得DNA分型，这无疑将会大大拓宽检材的范围。同时可以为刑事案件的侦查提供线索、为法庭量刑提供有力的证据。本文从微量细胞的捕获、DNA模板的制备、扩增和检测及应用前景几个方面综述了微量细胞DNA分型在法医学中的研究进展。     

Chelex-100法提取脱落细胞检材DNA的实时定量研究

目的研究脱落细胞检材DNA检验的简便有效的提取方法。方法对76份包括帽子、眼镜、牙刷、剃须刀、梳子、口香糖、羊水在内的7种脱落细胞检材采用Chelex-100法提取DNA,在ABI7500型荧光定量PCR仪上进行定量,同时用Identifiler复合扩增系统扩增,在ABI3130遗传分析仪上进行STR分型。结果从帽子（头套）中获得的脱落细胞DNA平均含量为8.31ng,眼镜擦拭物上获得的脱落细胞DNA平均含量为6.20ng,牙刷上获得的脱落细胞DNA平均含量为49.40ng,剃须刀擦拭物上获得的脱落细胞DNA平均含量为6.92ng、梳子擦拭物上获得的的脱落细胞DNA平均含量为10.68ng,口香糖的脱落细胞DNA平均含量为16.30ng,羊水的脱落细胞DNA平均含量为320ng。以上76份检材性别及10个以上STR位点分型成功率为75.8%。结论从帽子、眼镜、牙刷、剃须刀、梳子、口香糖、羊水等检材提取的脱落细胞可用Chelex-100法提取DNA作STR分型。     

两种包装方式对小体积生物检材DNA检验的影响

目的探讨一种适用于小体积生物物证检材的包装方式。方法选择M4型螺丝钉作为研究对象,经去污消毒处理,通过手握方式转移人体脱落细胞到其表面,对螺丝钉采用两种不同的包装方式(滤纸包裹和悬空固定),经KingFisher Flex自动提取工作站进行DNA提取,从基因座等位基因检出情况、STR分型谱带峰高、均衡性等方面比较两种包装方式对螺丝钉上DNA检出率的影响。结果悬空固定包装螺丝钉实验组获得的STR分型谱带峰高、均衡性等方面均优于滤纸包裹包装实验组,其在基因座检出数量、分型完全相同样本数及有效分型样本数方面也多于滤纸包裹包装实验组。结论为降低微量生物检材DNA二次转移造成的损耗,提高小体积生物检材DNA的检出率,建议对小体积生物检材采用悬空固定方式进行物证包装。     

脱落细胞类DNA提取方法的研究应用

笔者在DNA检案过程中,运用Chelex法和硅珠纯化法联合提取脱落细胞类生物检材DNA作STR分型,获得了较满意的结果。     

车辆上脱落细胞STR检验

目的对汽车方向盘及变速杆把手上的皮肤脱落细胞进行STR检验研究。方法用EZ-tape采集车辆方向盘及变速杆上的脱落细胞,Chelex-100法与磁珠法结合提取DNA,延长保温时间。定量后调整PCR反应体系,适当增加PCR循环数,增加PCR产物量及延长进样时间进行电泳检测,使用GeneMapperIDV3.2软件进行STR分型。同时,对比使用多重置换扩增技术对提取的DNA进行全基因组扩增。结果对33份车辆方向盘和变速杆上脱落细胞的检测,其中19份检出全部基因座的基因分型结果,9份检出部分基因型,5份未检出DNA分型结果。而利用多重置换扩增技术未获得满意图谱。结论本研究建立的脱落细胞收集、DNA提取、PCR扩增及检测方法适合于车辆上脱落细胞的检验,其结果优于使用多重置换扩增技术获得的分型。     

激光捕获显微分离技术在DNA检验中的应用研究

目的建立一套显微细胞捕获技术用于法医学生物检材DNA检验方法。方法使用VeritasTM LCM激光捕获仪,采用紫外加红外的捕获方式,对框架覆膜玻片上经苏木素染色口腔上皮细胞进行捕获,采用改良硅珠法提取细胞DNA,使用Identifiler TM试剂盒在5μL体系中进行PCR扩增。结果成功获得20个口腔上皮细胞的13个以上完整STR基因座分型谱带。结论本研究建立的方法适合法医学生物检材制成的染色涂片上细胞的DNA检验。     

脱落上皮细胞类生物检材的自动化提取

目的建立一种自动化提取脱落上皮细胞类生物检材DNA的方法。方法附着于不同载体上的脱落上皮细胞类生物检材共278份,应用Eppendorf epMotion 5075LH工作站结合DNA IQTM系统提取模板DNA,并用Identifiler试剂盒进行STR检验。结果在278份被检的生物检材,其中126份检材获得13个基因座以上的STR分型,不同类型的检材其检出率不相同,最高达73.44%,最低为10.89%。结论脱落上皮细胞类检材应用自动化工作站提取DNA模板可在法医日常检案中广泛应用。     

荧光标记复合扩增检测4个STR基因座多态性

目的建立荧光标记复合扩增D1S2142,D13S1492,D14S306,D15S659基因座检测分型方法,并对成都汉族群体4个基因座的遗传多态性进行调查。方法用6-FAM标记D1S2142和D15S659引物,HEX、TMR分别标记D14S306和D13S1492引物,PCR复合扩增,310基因分析仪电泳自动收集电泳结果数据,GeneScan Analysis Software3.7NT软件计算扩增产物片段相对大小,Genotyper(3.7NT软件进行样本基因型分型,建立了荧光标记复合扩增检测4个STR基因座基因型的方法,对145名成都汉族无关个体样本进行分型。结果荧光标记复合扩增D1S2142,D13S1492,D14S306,D15S659基因座,每个STR基因座都获得了清晰的基因型分型结果。145份样本,4个STR基因座分别检出10,14,7,12个等位基因和22,54,21,39种基因型,其基因型分布均符合Hardy-W e inberg平衡。4个基因座在成都汉族群体的杂合度分别依次为0.7793,0.8345,0.7793和0.8345;多态信息含量分别依次为:0.7656,0.8730,0.7470和0.8312。累计非父排除率为0.9783,累计个人识别机率为0.9999 917。结论荧光标记复合扩增D1S2142,D13S1492,D14S306,D15S659基因座,可实现对每个基因座准确分型;成都汉族群体该4个基因座的遗传学数据,可为群体遗传学和法医学研究与应用提供基础资料。     

成都汉族、甘肃东乡族群体D10S1432和D10S1213 位点的遗传多态性分析

目的本研究的目的是了解人类基因组中D10S1432及D10S1213两个STR位点在成都汉族和甘肃东乡族群体中的遗传多态性分布及两个群体之间的关系。方法采用PCR、聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染技术,共调查了209例样本。结果在D10S1432位点上观察到5个等位基因,15种基因型。在D10S1213位点上观察到9个等位基因,31种基因型。两位点的基因型频率在调查的两个群体中的分布符合Hardy-Weinberg平衡定律（P>0.05）。经统计,D10S1432在这两个群体中的杂合度为0.664和0.737,个人识别几率为0.827和0.820。D10S1213的杂合度为0.664和0.657,个人识别几率为0.836和0.882。结论结果表明,D10S1432和D10S1213两个位点在法医学个人识别和亲子鉴定中有较高应用价值。     

2个Y-STR基因座在成都汉族群体中的遗传学研究

目的　为了寻求新的适合于法医学应用的Y染色体STR基因座 ,我们调查了基因座DYS44 2和DYS44 6在成都群体中的分布。　方法　样本来自于成都地区汉族无血缘关系的个体 ,通过Chelex法提取样本DNA ,利用PCR扩增硝酸银染色方法进行分型。　结果　DYS44 2是一个四核苷酸简单重复基因座 ,而DYS44 6则为五核苷酸简单重复基因座。男性样本都出现了谱带 ,而女性样本则无PCR产物。DYS44 2基因座和DYS44 6基因座变异度分别为 :0 .6 86 7、0 .75 5 2。　结论　DYS44 2和DYS44 6是非常适合于法医学应用的STR基因座。     

荧光染料掺入PCR检测STR基因座多态性的研究

目的研究荧光染料掺入PCR检测STR基因座多态性。方法 利用荧光染料掺人PCR扩增技术,测定FABP、CYP19、FOLP23、MBP、DYS19五个基因座的梯阶片段长度,将带有荧光标记物的dCTP通过PCR反应加入到目的片段PCR产物中,通过PE 377 DNA测序仪分离和基因扫描软件分析。结果 获得了清晰、准确的图谱,计算出各基因座中核心序列的重复次数,并按照ISFH标准对各基因座命名。结论 该方法具有灵敏度高、结果客观准确、操作简便、产物定量等优点,在新基因座开发和法医鉴定实践中具有较理想的应用价值和发展前景。     

微量体表脱落上皮细胞的DNA检验

目的　建立微量体表脱落上皮细胞的DNA检验方法。　方法　采用Chelex -10 0法提取DNA ,以Microcon -10 0纯化柱纯化浓缩DNA ,用ProfilerPlus试剂盒PCR扩增后用 3 10基因分析仪检测。　结果　 10种常见粘附有体表脱落上皮细胞的样本 10 0个 ,其中 7种 70个样本成功检测到 10个STR位点的分型 ,检出率为 10 0 % ,其余 3种样本检出率分别为 5 0 %、2 0 %、10 % ,将该方法应用于 2例实际检案 ,取得满意效果。　结论　所建立方法稳定可靠 ,易于操作 ,适用于多种检材 ,为微量体表脱落上皮细胞的DNA检验提供了确实可行的检验方法     

茚三酮薰显法在人体接触细胞发现采集中的应用

目的 研究茚三酮薰显法在人体接触细胞发现采集中的应用价值.方法 对衣服、口罩、棍棒等可疑人体接触细胞检材258份,采用1％茚三酮溶液进行显色反应,然后用磁珠法提取DNA,并进行DNA定量和STR检测.结果 可疑人体接触细胞检材中有172份显色反应阳性,其中115份检出的DNA浓度在0.02ng/μL以上并检出6个以上STR基因座的基因型,检出率为66.86％;显色反应阴性的86份检材均未检出DNA浓度或成功进行STR基因型.结论 茚三酮薰显技术可用于指导案件人体接触细胞的发现采集.     

应用常染色体STR预测近亲关系调查案件

目的通过两起案例讨论利用常染色体STR全不同基因座数预测血亲关系,从而快速、高效地侦破疑难案件。方法应用全不同基因座数预测血亲关系,包括预测叔侄、祖孙或半同胞关系;应用IBS评分预测全同胞关系;结合家系调查、侦查信息调查案件。结果这种侦查模式有助于预测目标的同胞、叔侄、祖孙等血亲关系人,可充分挖掘样本的亲缘遗传信息,指导案件侦查方向。结论应用常染色体STR全不同基因座计数法和共有等位基因计数法可帮助预测血亲关系,能为调查案件提供新思路,对侦查更具指导意义。