尼龙膜套管分离技术对混合斑中精子细胞DNA的提取

目的建立新型的混合斑中精子细胞分离的方法,并评价其应用价值。方法收集性侵案件中的40份混合斑检材,分别采用常规差异裂解法和尼龙膜套管分离技术进行精子细胞分离,使用硅膜试剂盒(Forensic DNA Extraction Kit for Soft Tissues)提取精子细胞DNA,Amp FlSTR~ Identifiler~ Plus PCR扩增试剂盒进行PCR扩增,3500x L基因分析仪进行电泳检测,并对两种分离方法的结果进行对比。结果 40份混合斑检材中,采用尼龙膜套管分离技术的检材仅3份有女性成分微弱残留,余均获得了完整的单一男性分型。而采用常规差异裂解法分离的检材中,有25份完全未检出男性精子细胞STR分型,15份检出男性精子细胞STR分型(7份不完整男性精子细胞STR分型,6份有女性成分残留,2份单一的男性精子细胞STR分型)。结论本研究建立的尼龙膜套管分离技术适用于混合斑中精子细胞的分离,特别是对含有大量女性细胞而精子细胞较少的检材提取效果明显,整个提取实验成本低廉、快速简便。     

利用AutoMate Express~(TM)系统提取陈旧性骨骼DNA

目的建立利用AutoMate Express~(TM)系统提取陈旧性骨骼DNA的方法。方法将骨骼用冷冻研磨机研磨成骨粉,经AutoMate Express~(TM)系统提取后,用Identifiler~Plus、MiniFiler~(TM)试剂盒扩增分型。结果10例保存在不同环境中、死亡时间在10~20年的骨骼样本利用AutoMate Express~(TM)系统3 h内完成DNA提取,有8例获得完整STR分型。结论 AutoMate Express~(TM)系统能快速、高效地提取陈旧性骨骼DNA,可应用于法医实际案件检验。     

亲子鉴定检出染色体三倍体1例

<正>1案例资料1.1简要案情受检者为孕妇、疑父和孕妇腹中胎儿。孕妇22岁,怀孕24周。签署知情同意书后,采集孕妇和疑父外周静脉血、胎儿羊水样本用于鉴定分析。1.2 DNA分型检测Chelex-100法提取DNA,采用Power Plex?21试剂盒(美国Promega公司)进行复合扩增,扩增产物用3500XL基因分析仪(美国ABI公司)进行DNA分型检测。应用Identifiler~(TM)试剂盒(美国     

多套试剂盒在亲权鉴定特殊案例中的应用

目的分析山东汉族人群21个常染色体STR基因座的遗传多态性,同时对用Goldeneye~ DNA身份鉴定系统25A和20A检测存在基因突变或等位基因丢失的案例进行分析。方法用Goldeneye~ DNA身份鉴定系统25A和22NC对山东汉族人群273个无关个体的40个常染色体STR基因座进行分型,对其中21个STR基因座的遗传多态性进行分析。同时对6个存在基因突变的案例增加检测Goldeneye~ DNA身份鉴定系统22NC、20Y、17X。另外3个存在等位基因丢失的案例,用Amp FlSTR~ Identifiler~ Plus PCR扩增试剂盒验证并测序分析。结果获得山东汉族人群21个常染色体STR基因座的遗传学参数。增加到40个常染色体STR基因座:5个存在基因突变的案例可达到鉴定要求,X-STR或Y-STR分型结果一致;另外1个可能基因突变的二联体案例,共有6个基因座的基因分型在被检父找不到生物学来源,两人的Y-STR基因分型相同,说明来自同一父系,但通过常染色体分型排除父子关系。2个在D18S51基因座存在等位基因丢失的案例,经基因测序分析,在相应的引物结合区被检母和孩子存在碱基的突变或丢失;另1个被检母和孩子在D13S317基因座存在等位基因丢失的案例,通过Amp FlSTR~ Identifiler~ Plus PCR扩增试剂盒检测得到确认。结论山东汉族人群21个常染色体STR基因座有较高的遗传多态性,可用于日常的亲权鉴定案例。对部分存在基因突变的二联体案例,Goldeneye~ DNA身份鉴定系统25A无法满足鉴定要求,应适当增加常染色体STR基因座的检测个数。对于存在等位基因丢失的案例,改用不同公司的试剂盒或进行基因测序可以解决。     

联苯胺试验对血痕DNA检验的影响

目的探讨联苯胺试验及相关试剂对血痕DNA检验的影响。方法制作含1μL静脉血的滤纸血痕970份,其中10份为对照样本,960份经联苯胺试验及相关试剂分别处理后,采用Chelex-100法和硅珠法提取DNA,Amp F詛STR~(TM)Identifiler~(TM)Plus PCR扩增试剂盒进行复合扩增,对比各组STR分型结果。结果联苯胺试验后立即提取DNA,硅珠法的STR基因座检出数为(3.80±1.34)个,而Chelex-100法均未获得STR分型结果;联苯胺试验后干燥处理,硅珠法有13例(21.7%)获得全部STR基因座分型结果,且STR基因座检出数[(12.90±1.49)个]远高于Chelex-100法[(4.70±1.96)个](P0.05);加入冰醋酸后立即提取DNA,硅珠法的STR基因座检出数为(9.40±2.09)个,而Chelex-100法均未获得STR分型结果;只加冰醋酸后干燥处理以及只加四甲基联苯胺乙醇饱和溶液或3%过氧化氢溶液,两种方法均获得完整15个STR基因座分型结果。结论联苯胺试验对血痕的后续DNA检验有很大的影响,Chelex-100法不适合联苯胺试验后血痕的DNA检验,联苯胺试验后干燥处理及采用硅珠纯化的方法可有效提升联苯胺试验后血痕的STR基因座检出数。     

DNATyper19~(TM)与Identifiler~(TM)Plus试剂盒对疑难检材检验比较

<正>本研究应用DNATyper19~(TM)试剂盒和Identifiler~(TM) Plus试剂盒对骨骼、牙齿和脱落细胞等疑难检材DNA进行平行扩增,从分型结果一致性、检出率等方面进行分析,探讨DNATyper19~(TM)试剂盒在疑难检材检验中应用的可行性[1-5]。1材料与方法1.1样本来源510例生物检材均来自本实验室日常检案积累,其中包括:骨骼70例、牙齿50例、脱落细胞390例(包     

“502”胶熏显指印后5种脱落细胞转移方法对STR分型影响观察

目的黑色塑料袋上潜在指印经"502"胶熏显后,观察比较5种脱落细胞转移方法对STR分型影响。方法在黑色塑料袋上捺印手印230枚,经"502"胶熏显后分别采用实物剪取、去离子水、无水乙醇、丙酮、解胶剂等5种方法转移脱落细胞,硅珠法抽提DNA,Amp FlSTR~ Identifiler~ Plus试剂盒进行STR复合扩增,3500XL遗传分析仪电泳检测扩增产物,等位基因分型用GeneMapper~ ID-X软件判读分析。记录每个样本检出等位基因的个数。各组间差异利用SPSS13.0软件进行统计学分析。结果 5种方法转移后的检材STR检出率差异明显。以STR检出≥13个基因座为标准,去离子水组最高(检出率82.6%),解胶剂组次之(检出率78.3%),实物剪取组最低(检出率34.8%),以每例样品RFU值≥5000为检验满意标准,解胶剂组的检验满意度最高(26.1%)。结论使用解胶剂类溶剂可以有效转移"502"胶中的脱落细胞,为"502"胶熏显客体中的脱落细胞的STR检验提供新思路。     

基于重组质粒制备STR分型阳性参照物

目的基于重组质粒制备可用于校准法医STR分型的阳性参照物。方法以常用阳性参照物9948人类基因组DNA STR分型为依据,基于重组质粒构建包含CSF1PO、D7S820、TH01等40个常染色体位点,DYS391、DYS522、DYS385a/b等22个Y染色体位点以及性别判定基因座Amelogenin的STR分型阳性参照物。将重组质粒定量、稀释后等比例混合,分别应用于DNATyper~?19、DNATyper~?24、DNATyper~?Y、Amp F?STR~?Identifiler~?Plus以及Power Plex~?18D System五种扩增试剂盒。结果阳性参照物中各重组质粒浓度为0.01pg/μL~0.001pg/μL;应用于Amp F?STR~?Identifiler~?Plus PCR扩增试剂盒,基于重组质粒制备的阳性参照物与人类基因组DNA扩增检测结果差异较小;将此阳性参照物分别应用于不同公司、不同STR基因座的四种STR扩增试剂盒,电泳检测图谱显示各基因座基因型完整,分型正确,峰高相当,基因座间均衡性良好。结论基于重组质粒制备STR分型阳性参照物,是一种可以替代细胞系制备阳性参照物的方法,具有一定的参考价值。基于此方法制备的阳性参照物可适用于市面上常用的STR检验试剂盒,普适性较强,对法医DNA分型检测有一定的实用价值。     

衣物类生物检材DNA检验的研究

目的建立对衣物类生物检材STR检验的有效自动提取纯化方法。方法对100例衣物类生物检材用EZ1DNA Investigator试剂盒、EZ1Advanced XL工作站的Large-Volume程序(大体积法)进行提取纯化,AmpFLSTR~Identifiler~Plus荧光STR复合扩增,3500x L型遗传分析仪分析结果。结果 69份检材中检出了单一DNA分型结果,9份检出了混合基因型,22份未检出基因型。结论该方法对衣物类生物检材DNA提取纯化后进行荧光STR检测,可应用于法庭科学实践。     

以CE-PCR产物为模板的STR序列多态分型方法

目的实现以荧光标记复合扩增产物为扩增模板的STR序列多态分型。方法筛选常用STR分型试剂盒基因座并设计引物,构建常染色体STR复合扩增体系。分别以毛细管电泳(CE)试剂盒GlobalFiler~(TM)、PowerPlex~?21和Identifiler~(TM) Plus的扩增产物为模板,扩增、建库测序及数据分析,评估体系分型准确性及对CE扩增产物的通用性,并与Precision ID GlobalFiler~(TM) NGS STR Panel体系进行比较。结果该复合扩增体系能够从3款CE试剂盒的扩增产物中获得所有基因座的正确分型和序列多态信息,其体系均衡性和杂合子均衡性亦良好,且均优于Precision ID体系。结论该复合扩增体系建立了CE技术与二代测序技术之间的桥梁,实现了检材的零利用,能够进一步挖掘荧光标记扩增产物的STR序列多态信息,是对现有技术的提升和有效补充。     

大规模汉族个体15个STR基因座遗传多态性调查

本文利用苏州市公安系统DNA数据库资源,进行大规模汉族人群的15个基因座的遗传多态性分析。采用Amp FISTR Identifiler试剂盒、Amp FISTR Identifiler Plus试剂盒、AGCU 17+1试剂盒进行扩增,经测序后获得510 000名汉族个体15个STR基因座的DNA分型,应用Excel软件计算等位基因的分布频率等群体遗传学数据。在15个STR基因座共检出等位基因344个、基因型1890个。所调查的汉族人群15个基因座具有较好的识别力。     

D12S391基因座检出四等位基因1例

正1案例1.1简要案情1例父子关系鉴定中采集被鉴定人的末梢血进行检测,发现被检父D12S391基因座STR分型为20,21,22,23,后单独采集被检父带毛囊的毛发样本进行验证。1.2DNA检验采用Chelex-100法提取样本基因组DNA。采用Goldeneye誖20A试剂盒[基点认知技术(北京)有限公司]对被鉴定人血样进行扩增,后用EX22试剂盒(无     

PuriTyper~(TM)法医学纯化试剂盒的性能验证

目的验证PuriTyperTM纯化试剂盒各项性能指标和法医学应用价值。方法收集及制备抗凝血液、常见案件检材(唾液、烟头、精液、毛发、指甲、骨骼及组织块)、斑痕样本(血斑、唾液斑、精斑)以及模拟添加抑制剂和模仿自然环境中放置的血斑。采用PuriTyperTM纯化试剂盒提取纯化并进行DNA定量,IdentifilerTM复合扩增试剂盒扩增,产物经ABI 3130遗传分析仪进行检测,Genemapper软件分析结果,对该试剂盒灵敏度、稳定性、重复性、检材适应性进行测试。结果采用该试剂盒提取0.1～40μL血液分别获得0.042～26.45ng/μL的DNA。3种斑痕样本DNA产量平行试验结果稳定。不同类型检材重复检验所获IPC的CT平均值在27.60至28.03之间。常见案件检材所得分型与已知结果均一致。结论 PuriTyperTM纯化试剂盒能够满足法医DNA检验的要求,对法医学实践具有重要的应用价值。     

PowerPlex21直扩法与磁珠法用于毛发STR检验的比较

目的比较Power Plex21直接扩增法与磁珠提取后扩增法用于带毛囊毛发STR检验的效果。方法带毛囊毛发平均分成2组,每组含拔取毛发20根、自然脱落带毛囊毛发20根,剪取毛囊后1组用Power Plex21试剂盒直接扩增,1组先用磁珠法提取DNA然后扩增Power Plex21试剂盒,扩增产物在3130XL遗传分析仪上进行电泳检测分析。结果拔取毛发直接扩增和磁珠提取后扩增均成功检出全部STR基因型。自然脱落带毛囊毛发直接扩增检出STR基因型的成功率为55%,磁珠提取后扩增检出STR基因型的成功率为25%。结论 Power Plex21直接扩增法比磁珠提取后扩增更适于带毛囊毛发的STR检验。     

直接扩增法在血痕、肋软骨和唾液检材中的应用

目的采用Identifiler Direct PCR试剂盒直接扩增法进行棉签擦拭血痕、肋软骨和烟蒂唾液斑DNA分型检验,并评价其应用价值。方法收集棉签擦拭血痕、烟蒂各20份,肋软骨10份,采用Identifiler Direct PCR试剂盒进行直接扩增及分型检验,以相同检材采用磁珠法/Chelex-100法提取模板DNA后扩增检验结果作为对照,对两组所得结果进行比较分析。结果棉签擦拭血痕和肋软骨一次检测完整分型率均为100%,分型结果与对照组一致;烟蒂上唾液斑有2份检材第一次未能完整分型,调整方法再次检验后获分型成功。结论实际检案中的棉签血痕、肋软骨和烟上唾液斑,采用直接扩增法检测,方法简单、快速、稳定、检材用量小,可在实际检案中选择使用。     

IDentifier DNA分型盒（炎黄34）的法医学验证及应用评估

目的 测试IDentifier DNA分型盒(炎黄34)的技术性能指标,评估其法医学应用价值。方法 根据《法庭科学人类荧光标记STR复合扩增检测试剂质量基本要求》(GB/T 37226—2018),从种属特异性、分型准确性、灵敏度、适应性、耐受性、一致性、均衡性、反应条件验证、混合样本、稳定性、批间差11个方面对IDentifier DNA分型盒(炎黄34)进行测试。比较IDentifier DNA分型盒(炎黄34)与Power Plex^?Fusion 6C系统、Versa Plex^?27PY系统、Veri Filer^TM Plus PCR扩增试剂盒的系统效能。使用IDentifier DNA分型盒(炎黄34)检测日常案件中的拭子类生物检材,观察其STR检验结果 。结果 IDentifier DNA分型盒(炎黄34)具有良好的种属特异性、分型准确性、适应性、耐受性和均衡性,灵敏度可达0.062 5 ng,能检测案件中不同类型的检材、降解检材及混有抑制剂的检材,对混合比例为4∶1以内的样本均能获得完整分型。该试剂盒的系统效...     

脱落毛发及毛干DNA的STR分型研究

目的探讨脱落毛发及毛干细胞核DNA提取、含量和STR分型问题。方法对脱落毛发或毛干进行DNA提取和定量,使用低扩增体系、增加循环次数和多次平行扩增等方法扩增DNA样本,采用叠加比较的方法分析STR分型。结果15cm脱落毛发样品DNA含量大于0．3ng的样品占52．8％,STR分型成功率为55．6％;15cm毛干样品DNA含量大于0．3ng的样品占30．6％,STR分型成功率为25％。结论采用增加循环次数、多次平行扩增等LCN—STR分型方法和Mini—STR试剂盒有助于脱落毛发及毛千的STR基因座分型获得。     

SiFa~(TM) 23 Plex试剂盒(提取测试版)在汉族人群中的法医学调查

目的评估SiFa~(TM) 23 Plex试剂盒(提取测试版)的性能及其所包含的STR基因座在汉族人群中的群体遗传学信息。方法应用试剂盒对1 000名汉族健康无关个体进行分型检测,检测试剂盒有效性并统计分析STR基因座的频率数据及群体遗传学参数信息。结果该试剂盒最小扩增体系可以为6.25μL,标准体系25μL中DNA含量低至125 pg可获取理想分型图谱。试剂盒中包含的21个常染色体STR基因座在1000人份中共检测到267个等位基因,均符合Hardy-Weinberg平衡。新增加的两个STR基因座D1S1656和D10S1248分别检测到15和11个等位基因,多态信息含量丰富。结论 SiFa~(TM) 23 Plex试剂盒(提取测试版)对于血液样本检测性能优越,准确性、重复性、灵敏度均可满足法医学检案需求,可以应用于法医学实际检案及DNA建库工作。     

DNATyper Y21试剂盒基因座在河南人群中的遗传多态性

本文采用DNA Typer Y21试剂盒对中国河南地区汉族604个健康无关个体进行19个Y-STR基因座和1个常染色体STR基因座遗传多态性进行调查。采用血卡样本进行直扩,用DNA Typer Y21试剂盒进行扩增及检测。结果在20个基因座共检出164个等位基因和601种单倍型,其分布符合Hardy-Weinberg平衡定律(P0.05)。所调查的河南人群20个STR基因座具有较好识别能力,该试剂盒与Yfiler Plus相同基因座遗传学数据比较无显著差异。     

全基因组扩增法应用于低拷贝数DNA检测

目的建立基于多重置换扩增(MDA)技术的全基因组扩增(WGA)方法,实现对低拷贝数(LCN)DNA样品进行分析。方法采用REPLI-g试剂盒对样本进行等温全基因组扩增,扩增产物采用ProfilerPlus试剂盒确定样本的十个STR基因座的等位基因型。结果10pgDNA模板经全基因组扩增后,能够进行DNA分型。结论全基因组扩增可以用于LCN的DNA分析,帮助提高微量物证的检出成功率。