微量元素铜对软骨细胞胰岛素样生长因子mRNA基因表达的影响

分离培养仔猪关节软骨细胞,从中提取总RNA,采用RTPCR法扩增出关节软骨细胞中胰岛素样生长因子Ⅰ(IGFⅠ)的cDNA,与pMD18T载体相连,转化JM109大肠埃希氏菌,提取质粒,经鉴定,所扩增的片段为目的片段。在此基础上培养仔猪关节软骨细胞,并在培养液中添加不同水平的铜,分别在第0、12、24、48h收集软骨细胞,提取总RNA,采用RTPCR法扩增出IGFⅠ的cDNA,以βactin为内参,用凝胶分析系统对扩增出的cDNA进行扫描分析,计算IGFⅠmRNA基因表达的相对水平。结果,在细胞培养液中添加不同水平的铜能促进软骨细胞中IGFⅠmRNA基因表达,其中以铜浓度31.2μmol/L的效果最好。表明铜对软骨细胞的增殖作用是通过促进IGFⅠmRNA的表达来实现的。     

铜缺乏症远期疗效的研究

目前对原发性缺铜(因饲料中铜含量过低)和继发性缺铜(因饲料中钼和硫等含量过高)的治疗方法很多,如在饲料或饮水中添加硫酸铜,用氧化钢针投入瘤胃,用EDTA-Cu皮下注射及用含铜的可溶性玻璃     

磷对成骨细胞超微结构及其GJIC和Ⅰ型胶原含量的影响

在体外培养成骨细胞(OB)的基础上,添加0、1、2、4mmol/L磷,作用2d后,采用电子显微镜观察OB的超微结构,采用划痕标记染料示踪技术观察细胞间隙连接通讯(GJIC);作用2、5、8d后,用BCA法蛋白定量试剂盒、Goat Anti-rat Collagen TypeⅠ试剂盒分别检测OB内总蛋白及Ⅰ型胶原的含量,并用DⅠ型胶原/D总蛋白表示Ⅰ型胶原的含量。结果显示,作用2d,4mmol/L磷组OB内线粒体减少、肿胀。4mmol/L磷组GJIC的荧光扩散距离减弱,1、2mmol/L磷组基本不变;就Ⅰ型胶原含量而言,除1mmol/L磷组在作用2d抑制其分泌外(P<0.05),在磷作用2、5、8d均促进其分泌(P<0.05)。结果表明,添加1、2、4mmol/L磷能促进OB的分泌Ⅰ型胶原;4mmol/L磷能抑制OB的代谢活性,且能抑制OB间通讯。     

甲泼尼龙对鸡关节软骨细胞自噬的影响

为探究甲泼尼龙(MP)对关节软骨细胞自噬的影响,机械分离肉鸡膝关节软骨组织,剪碎后,0.25%胰蛋白酶消化30 min,在0.1%的透明质酸酶和0.2%的Ⅱ型胶原酶中消化12 h,于含10%胎牛血清的培养液中进行细胞培养。采用甲苯胺蓝、阿利新蓝染色法和PCR扩增鉴定关节软骨细胞,采用MP和三甲基腺嘌呤(3-MA)处理鸡关节软骨细胞。结果显示,MP促进软骨细胞自噬相关基因的显著表达,并降低细胞活性,3-MA对MP诱导的关节软骨细胞自噬有保护作用。本研究建立了原代肉鸡关节软骨细胞培养方法,初步揭示了MP及3-MA对软骨细胞自噬的作用机理。     

高剂量铜对断乳仔猪血液激素和生长因子水平的影响

将 60头断乳“军牧 1号”白猪分成 6组 ,分别饲以添加 0、10 0、15 0、2 0 0、2 5 0和 3 0 0mg/kg铜的基础日粮 ,进行80d的饲养试验 ,以探讨日粮铜水平对仔猪血液激素及生长因子的影响。结果表明 ,基础日粮中添加 10 0～ 3 0 0mg/kg铜能促进仔猪的生长 ,能显著促进循环血液中生长激素 (GH )、胰岛素 (INS)、游离甲状腺素 (FT4)、游离三碘甲腺原氨酸(FT3 )、胰岛素样生长因子 (IGF Ⅰ )及其结合蛋白 (IGFBP3 )的分泌量 ,其中以饲料中添加 2 5 0mg/kg铜水平 ,于试验的第2 0～ 40d最明显 (P <0 .0 1)。     

高锌日粮对鸡蛋中锌铜锰含量的影响

锌、铜、锰是人和动物所必需的微量元素,有重要的生物学功能。锌、铜、锰在吸收水平上的相互拮抗作用已有诸多报道,高锌日粮可以降低机体组织中铜、锰的含量,补充铜制剂,在很大程度上可以纠正或缓解锌中毒所致的贫血及其生化改变。但有关日粮锌对鸡蛋中铜、锰等元素的影响报道极少,本试验通过日粮中添加不同水平锌饲喂蛋鸡,观察了高锌日粮对鸡蛋中锌、铜、锰含量的影响。     

高剂量铜对生长猪血清铜锌铁水平和含铜酶活性及其生产性能的影响

将 60头军牧 1号生长猪 (体重为 19.2 6kg± 1.2 0kg) ,随机分成对照组和试验Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组 ,共 6组 ,每组 10头 ,公母各半。使用硫酸铜作为铜源 ,对照组生长猪日粮中不添加铜 ,各试验组生长猪日粮中分别添加 10 0、15 0、2 0 0、2 5 0和 3 0 0mg/kg铜 ,试验期为 80d。结果表明 ,日粮中添加不同水平的铜可显著降低血清锌水平 ,而对血清铁含量影响不大 ;试验组血清铜蓝蛋白和铜锌超氧化物歧化酶活性均有明显的增加 ;在日粮中添加不同水平的铜 (15 0～ 3 0 0mg/kg)可明显提高生长猪日增重 ,降低料重比 ,但前期 (0～ 60d)效果优于后期 (60～ 10 0d)。     

亚慢性锰中毒对鸡肝中锰铁铜锌钙含量的影响

在饲料中添加600、900、1800mg/kgMnCl2建立亚慢性锰中毒模型,分别在试验开始后第30、60、90d剖杀鸡取肝组织,采用火焰原子吸收法检测了锰、铁、铜、锌及钙含量。结果显示,与对照组相比,各染锰组鸡肝中锰、铜含量升高;锌呈波动性升高;铁、钙含量降低,呈一定的时间-剂量效应。其中锰与铜呈显著正相关,锰与铁呈显著负相关。表明,过量锰对鸡肝中铁、钙、铜、锌等元素有不同程度的干扰,对肝造成损伤。     

昆明白小鼠胚胎生殖细胞的分离与培养

以昆明白品系小鼠胎儿生殖嵴为材料,以不同的培养液分离培养胚胎生殖细胞(EGcells),发现小鼠胎儿肝细胞条件培养液的效果好于未添加白血病抑制因子(LIF)的基础培养液,而差于添加了1 000 IU/mL LIF的基础培养液。同时,试验对比了从不同胎龄胎儿分离培养原始生殖细胞(PGCs)的情况,鉴定了EG细胞的生物学特性;EG细胞经体外培养,可以分化为神经样细胞、上皮样细胞和简单类胚体。     

高铜日粮对生长猪中脑和下丘脑中儿茶酚胺类含量的影响

选用断乳仔猪45头,随机分为3组,每组5个重复,每个重复3头,采用完全随机化设计进行生长试验,研究了不同添加水平(5、125、250mg/kg)的硫酸铜日粮对猪下丘脑及中脑儿茶酚胺类物质分泌的影响。结果,日粮中添加125mg/kg(P<0.01)、250mg/kg(P<0.05)硫酸铜均显著提高了中脑、下丘脑多巴胺含量,但是随着铜水平的提高,多巴胺含量呈下降趋势;中脑黑质去甲肾上腺素浓度在试验组与对照组之间有显著差异,并且随着铜浓度的提高有升高趋势。据此推断,高剂量铜可能通过调节中枢儿茶酚胺代谢,促进生长激素的分泌进而促进动物生长。     

新生猪胰腺干细胞培养方法的建立

通过对不同饲养层和培养基以及细胞因子进行筛选,比较了各种培养基和细胞生长因子对细胞传代时间和增殖细胞比例的影响,选择最佳分离条件,建立了新生猪胰腺干细胞体外培养的最佳体系。结果显示,以成纤维细胞为饲养层,在含100 mL/L胎牛血清的L-DMEM中添加表皮生长因子、干细胞因子、白血病抑制因子的培养液中培养,细胞能快速增殖,多突起、多角形、小圆形、长梭形4种类型干细胞的增殖比例适中,而且各种类型的细胞都能长期传代培养。     

铜中毒(二)

影响铜中毒的因素 影响铜在动物组织内蓄积以致中毒的一些因素,在很久以前人们就有所认识(铜和硫酸盐)。而另外一些因素(动物的遗传组合)最近才有记载,还有一些因素仍然未被认识。 钼和硫酸盐或硫化物的摄入 把铜添加到含有适量的硫酸盐的饲料中,可使羊的肝铜含量明显下降,这一观察可为铜中毒提供有效控制;用羔羊试验,在喂给中毒水平的铜以后约8周,便发现血清谷氨酸草酰乙酸转氨酶(GOT)升高,因供给钼酸胺(100毫克/日)和     

铜对肉鸡肝细胞线粒体膜通透性及呼吸的影响

为进一步了解铜对生物体的生物学效应,选用硫酸铜作为铜源,向即时分离的肉鸡肝细胞线粒体培养液内加入终浓度分别为5、10、20μmol/L的铜(以铜计),孵育10 min后,观察肝细胞线粒体膜通透性及呼吸的变化。结果显示,铜对线粒体膜通透性转换孔有较显著的影响,造成线粒体不同程度的肿胀,表现为线粒体悬液在540 nm处的吸光值下降,且铜浓度越高,吸光值下降越明显,在孵育6 min后3种浓度的吸光值下降百分比差异显著(P<0.05)。随着铜浓度的升高,线粒体呼吸逐渐减弱,RCR、P/O、OPR均显著降低(P<0.05),这些变化可能是微量元素铜对生物机体产生毒害作用的本质原因之一。     

高铜对雏鸭肝影响的病理学观察

将360只1日龄天府肉鸭随机分为6组,分别喂以对照日粮(Cu 8 mg/kg)和高铜日粮(Ⅰ组:Cu100 mg/kg;Ⅱ组:Cu 200 mg/kg;Ⅲ组:Cu 400 mg/kg;Ⅳ组:Cu 600 mg/kg;Ⅴ组:Cu 800 mg/kg)6周,研究日粮铜添加水平对雏鸭肝及其相关生化指标的影响。结果显示,Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组雏鸭肝出现不同程度的病理损伤,肝细胞颗粒变性、空泡变性。Ⅳ组、Ⅴ组肝铜含量和血清铜含量均显著高于对照组(P<0.01)。Ⅲ组、Ⅳ组和Ⅴ组血清丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶活性显著升高(P<0.01)。结果表明,日粮铜含量达400~800 mg/kg即可引起肝的病理损伤。     

褪黑素对高龄小鼠卵母细胞体外成熟的影响

为探究褪黑素对高龄小鼠卵母细胞体外成熟的影响,本研究以10～12月龄ICR雌鼠的卵母细胞为研究对象,在体外成熟培养液中添加不同浓度的褪黑素(0、10-4、10-6、10-8mol/L),以第一极体排出率作为卵母细胞成熟的评判依据筛选出褪黑素最佳添加浓度,并通过活性氧(ROS)水平检测、谷胱甘肽(GSH)水平检测、三磷酸腺苷(ATP)含量检测以及纺锤体组装来分析褪黑素对高龄小鼠卵母细胞体外成熟的作用。结果,1×10-6mol/L的褪黑素能够降低细胞内ROS水平,提高GSH水平,减弱高龄小鼠卵母细胞的氧化应激,同时还可以通过维持细胞内正常的能量(ATP)供应来保证纺锤体的正常形态,促进卵母细胞体外成熟。结论认为,在体外成熟培养体系中添加1×10-6mol/L的褪黑素可以通过改善卵母细胞的质量,促进高龄小鼠卵母细胞的体外成熟。     

日粮VE在低硒饲养雏鸡体内的分布规律及其与硒代谢的关系研究

本文通过在低硒基础日粮中添加不同水平的维生素E饲喂雏鸡,对维生素正在低硒饲养雏鸡体内的含量和分布规律及其与硒代谢的关系进行了研究,结果表明,日粮维生素E水平可直接影响雏鸡血液和组织维生素E含量,血液和组织维生素E含量间呈良好的正相关关系,维生素正在低硒饲养雏鸡各组织器官的含量依次为肝脏>血液>胰腺>肌肉>脑。在本实验的条件,低硒日粮添加维生素E能影响血硒含量,但组织硒含量则不受日粮维生素E水平的影响。     

影响小鼠腔前卵泡体外发育因素的研究

通过在培养液中添加胎牛血清(FCS)、牛血清白蛋白(BSA)及卵泡刺激素(FSH),对小鼠腔前卵泡进行体外培养,观察卵泡腔的形成及雌二醇(Estradiolam,E2)和睾酮(Testosteroni propionas,T)的分泌情况.     

高铜日粮对肉鸡肝细胞线粒体呼吸链复合物活性的影响

在对照组(Cu 11 mg/kg,A组)基础上设高铜组3个(110 mg/kg、220 mg/kg和330 mg/kg,分别对应为试验组B、C、D),试验期为60 d,在12、24、36、48、60日龄采集肝组织,提取线粒体,测定线粒体复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ的活性变化.结果表明,11 mg/kg和110 mg/kg铜日粮添加组线粒体复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ的活性呈增加趋势.220 mg/kg和330 mg/kg铜日粮添加组肉鸡肝细胞线粒体复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ活性减弱,但主要在试验后期,尤其是48日龄之后,比对照组和各组内的试验前期下降明显(P＜0.05).说明高铜日粮在一定程度上对线粒体复合物活性是有利的,但过高的铜添加到日粮中(≥220 mg/kg)可降低肉鸡肝细胞线粒体呼吸链复合物的功能活性.据此可以推测,线粒体是机体铜过量状态下侵害的靶部位之一,而且能作用于线粒体各个复合物,造成线粒体呼吸功能减弱,呼吸链中电子传递发生故障,从而影响线粒体功能的正常发挥.     

高锌日粮对蛋鸡肝锌和肝铜硫蛋白含量的影响

高锌日粮可使蛋鸡肝锌和含锌硫蛋白含量明显增加,同时使肝铜和含铜硫蛋白含量明显减少.日粮锌对机体在铜的吸收代谢方面有竞争抑制作用.     

慢性铜中毒山羊临床症状、血液及肝脏变化的观察

人们对家畜急性铜中毒的认识已有数百年历史,而对慢性铜中毒的认识则主要是从本世纪20年代开始的。研究者们概括了引起家畜铜中毒的可能原因:①在含铜高的土壤上放牧;②过量食入含铜的舔盐或混合物;③不恰当地使用含铜灌剂(dre-nch);④吃食污染有农业或工业来源的铜化合物的饲料;⑤用铜作为猪的生长促进剂,误给反刍动物食用,或用此种猪粪给牧草施肥,绵羊在此草地上放牧而引起中毒。近年来,国内许多猪场也应用添加硫酸铜等制剂促进猪生长,猪粪施肥造成饲草含铜量增加,在这种牧地及某些矿山周围被铜污染的区域不宜放养绵羊,能否饲养山羊呢,回答这一问题对合理利用牧草资源大有意义,为此进行了本试验,以了解本地山羊对铜的敏感性。通过血浆铜、TCA可溶性铜、肝铜及某些血清酶测定。来监测和诊断山羊慢性铜中毒。