猪胆汁醋液直肠导法治疗猪便秘

猪胆汁醋液直肠导法治疗猪便秘笔者用猪胆汁醋液直肠导法治疗猪便秘２８６例，一次治愈２１５例，占７５％；二次治愈６３例，占２１％；三次治愈８例，占３％，效果满意。方法取大猪胆囊一个，将胆汁和少许醋混合均匀。另将一细竹管两端修削平整，一端打磨光滑，插入患猪...     

猪囊虫抗原基因TS21的真核表达

构建了猪囊虫抗原基因TS2 1的VR10 2 0真核表达载体 ,以菌落原位杂交法筛选获得正确插入的重组质粒 ,用RNA印迹 (Northernblotting)和ELISA检测插入片段的转录及其翻译表达产物。结果 ,VTS2 1在真核细胞中能够转录TS2 1基因的mRNA ;兔抗猪囊虫超免疫血清可识别其蛋白表达产物 ,表明VTS2 1能正确表达猪囊虫抗原蛋白     

大承气汤灌肠治疗猪便秘

笔者用大承气汤灌肠治疗猪便秘多例,方法简便,安全可靠,疗效好。 方剂组成 大黄30g,枳实20g,厚朴20g,芒硝100g(单包)。 具体用法 处方内前3味药加水煎2次取汁合在一起约2000ml,放入芒硝溶化。待药液降温与猪体温接近可用。病猪站立或卧地保定均可,将投药胶管慢慢插入肛门,深度视猪体大小可为30～50cm。操作时要轻缓,灌院后抽出胶管,用拳头轻轻触动几下肛门促使肛门括约肌收缩,以防药液外流。     

猪泛素基因与PRRSV GP5基因融合表达质粒的构建

采用RT PCR技术从长白猪的肌肉组织中扩增出了泛素 (Ubiquitin)基因 ,并将其克隆到 pGEM Teasy载体 ,经测序表明 ,所克隆的基因与GenBank中已登录的序列同源性达 99%。利用设计的融合表达引物 ,分别将泛素基因与猪生殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV )GP5蛋白成熟肽基因进行扩增 ,用重叠区扩增基因拼接法将 2个基因片段进行拼接 ,并插入真核表达载体 pcDNA4 .0HISMAXA中 ,构建出了 pcDNA U GP5重组质粒。     

猪促卵泡激素α和β亚基基因的克隆及其重组腺病毒表达载体的构建

为探索人工制备猪促卵泡激素的可行性,从猪的脑垂体中抽提总RNA,通过RT-PCR方法,克隆了猪促卵泡激素α、β亚基基因,并将其分别定向插入腺病毒穿梭质粒中,通过转化BJ5183-AD-1细胞继而构建含有猪促卵泡激素α、β亚基基因的重组腺病毒质粒;将含有猪促卵泡激素α、β亚基基因的重组腺病毒质粒转染AD-293细胞,细胞产生病变,证实猪促卵泡激素α、β亚基基因重组腺病毒表达载体构建成功.     

氦氖激光治疗家畜创伤

笔者用北京朝阳激光厂生产的He-Ne600L兽用激光治疗机治疗家畜的某些创伤,收到了较好的效果。 方法 根根患畜受伤面的部位和大小,采用扩光、深部插入和多点照射的方法。患畜行常规保定,创伤面采取常规法处理(不用药物)后涂上墨汁或龙胆紫,以减少光折射率增加光吸收量。用氦氖激光光束直接照射受伤部位,将激光管输出端对准患部,采取肿胀与健部交界处和中心部位分点照     

猪痢疾的诊断与治疗

近两年来,我们用细菌培养方法对唐山市7个县、区的8个猪场的60～120天育成猪和部分种猪275头进行了猪痢疾病的检查。材料与方法 ①肛拭:用消毒过的棉花拭子插入采样猪只肛门内,拭取少量粪便,然后放入消毒过的含有少量生理盐水或PBS液的小试管内,加盖置于放冰的保温瓶内,当天送回试验室。②镜检:     

检查活猪囊虫的简便方法

将猪侧身压在地上,半固定好,使其不能乱动。检查人员左手持一根小木棒(长约40厘米,直径约5厘米),从侧面插进猪嘴,把猪嘴撬开;右手持普通手钳,将猪舌头轻轻拉出,尽量拉长一些,但不能夹破。然后将猪舌头向上翻卷,观看舌底部。无囊虫猪的舌底部,光滑平整呈淡桃红色;囊虫病猪的舌底部,有白泡或小白点,呈半透明,稍高于皮肤。如果舌底部有粘液看不清楚时,用左手食指和中指轻轻擦拭,一边擦拭,一边细心观看,如果有囊虫,即可看出。     

猪肌生成抑制素基因成熟蛋白编码序列表达载体的构建及其转录水平的检测

构建猪肌生成抑制素 (MSTN)成熟蛋白编码序列的克隆与表达载体 ,并对mRNA进行转录水平的检测 ,为获得较好的猪肌生成抑制素抗原、制备抗体打下良好的基础。猪MSTN基因的cDNA去除信号肽后 ,用PCR扩增的 1.2kb目的片段与 pMD18 T载体连接 ,将克隆载体的质粒DNA与同样用BamHⅠ和SalⅠ限制性内切酶酶解的表达载体 pET2 8a(+ )质粒定向连接 ,对筛选出的阳性克隆用酶切及测序法鉴定。对猪MSTN基因成熟蛋白编码序列进行反转录 ,对mRNANorthern杂交进行转录水平的检测。结果 ,所得到的序列与所设计的序列完全一致 ,表明成功地进行了猪MSTN基因编码序列的克隆及筛选 ;目的片段定向插入 ,阅读框架正确 ;RT PCR成功地反转录得到约 1.2kb的目的DNA片段 ,Northern杂交后对mRNA印迹放射自显影 ,见到清晰的 1.2kb特异带     

猪传染性胃肠炎病毒S蛋白基因的克隆与表达

根据GenBank中登录的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)TS株全基因的核苷酸序列,设计1对引物,采用RT-PCR技术扩增出一条含S蛋白A、D位点的S基因,大小约980bp。将其插入Simple-T克隆载体中,进行PCR、酶切鉴定及序列测定。将阳性基因插入表达载体pET-28a(+)中,转入Rossetta(DE3)感受态细胞,经诱导表达后,表达产物用SDS-PAGE和Western-blot进行分析。结果显示,表达产物的分子质量约为33.7ku,主要以包涵体的形式存在。Western-blot分析表明,表达的S蛋白能被兔源抗TGEV阳性血清所识别,说明表达产物具有反应原性。     

猪生殖与呼吸综合征病毒N基因的扩增与克隆

应用RT PCR方法扩增出猪生殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV)的核衣壳蛋白基因 (N基因 ) ,并将其克隆到 pET 32a载体 ,构建了高效原核表达载体pETN。将 pETN重组质粒转化BL2 1(DE3)宿主菌后 ,对插入片段进行了序列测定及同源性分析。结果表明 ,插入片段序列与PRRSV美洲型ATCCVR2 332株的ORF7核苷酸序列同源性达 99.9% ,与分离毒株的同源性达 99.0 %。     

穴位割治埋线治疗猪喘病效果显著

多年来,笔者用传统的兽医割治和埋线疗法,治疗猪喘气病1241例,治愈1088例,有效率为87.68％。 治疗方法 治喘一穴:肘头顶端向背中线作垂线与督脉线的交点为割治中点;治喘二穴:在倒数第6～9肋间,背最长肌下缘处作埋线。操作方法:先将治喘一穴按常规方法消毒,沿督脉作5～7厘米深达脊突的切口,然后用止血钳或手术镊子,在切口深部四周扩创,并反复5～7次机械刺激皮下组织和脊间韧带等,同时割取出少量皮下组织。最后埋入羊肠线7厘米,撒布消炎粉,缝合切口。治喘二穴,与背最长肌平行,在深部肌肉组织内仅只埋入羊肠线7cm,施术完毕。     

碘甘油治愈家畜口腔炎41例

我站从1977年至1980年用碘甘油治疗马、猪等家畜不同程度的口腔炎41例,均治愈。 方法是:2％碘酊每100毫升加甘油20毫升,充分振荡均匀后,用镊子夹适量脱脂棉蘸取药液插入患畜口腔,充分擦拭炎症粘膜,擦完后取出脱脂棉充掉。每日两次用药,一般2～6次即愈。     

猪传染性胃肠炎病毒国内分离株S基因克隆及与国外分离株的同源性比较

用猪睾丸细胞增殖并扩增猪传染性胃肠炎病毒 (TGEV)国内分离株TH 98,根据基因库中已发表的TGEVS基因cDNA序列 ,利用Oligo软件设计并合成 2对引物 ,进行逆转录聚合酶链反应 (RT PCR) ,扩增出 2 .3kb和 2 .1kb2个片段 ,即Sa与Sb。将Sa与Sb先后插入到pUC18质粒载体上的EcoRⅠ和PstⅠ多克隆位点上 ,构建了重组质粒pUC S。根据TGEVS基因位点和 pUC18的物理图谱 ,用相应的限制性内切酶进行酶切及套式PCR方法鉴定、分析 ,证明克隆的pUC S为TGEVS基因。同时对pUC S进行序列测定分析 ,并与来自美国、英国和日本的 5个毒株进行核苷酸及编码氨基酸同源性比较 ,证明了S基因的高度保守性     

猪乳头瘤病毒荧光定量PCR检测方法的建立

为建立可以快速检测猪乳头瘤病毒(SsPV)的方法,根据SsPV E2基因的保守序列设计引物,利用普通PCR方法扩增SsPV E2保守基因片段,将其克隆到pMD18-T载体,构建重组质粒pMD18-T-SsPV作为标准品质粒,经实时荧光定量PCR(qPCR)条件优化后,进行特异性、灵敏性和重复性试验。结果显示,所建立的qPCR方法在7.2×10¹～7.2×10⁸ copies/μL模板浓度区间内与Ct值呈现良好的线性关系,检测下限为7.2×10⁰copies/μL,灵敏度比普通PCR高100倍;与猪德尔塔冠状病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪捷申病病毒、猪圆环病毒2型、猪圆环病毒4型无交叉反应;该方法组内变异系数和组间变异系数均小于2.0%;对44份猪皮肤组织样品进行检测,检测阳性率为2.27%,普通PCR检测阳性率为0%。综上所述,本试验成功建立了SsPV qPCR检测方法,为SsPV的快速检测提供了可靠方法。     

口蹄疫病毒表位嵌合蛋白在枯草芽胞杆菌中的分泌表达

为了将口蹄疫病毒(FMDV)中和表位展示在病毒样颗粒(VLP)表面,以猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳蛋白为骨架,用FMDV O/Mya-98/2010毒株G-H环替换PCV2自身中和表位,构建嵌合衣壳蛋白CaO。为分泌表达CaO蛋白,在芽胞杆菌穿梭质粒pHCMC05的多克隆位点中顺次插入枯草芽胞杆菌P43启动子和中性蛋白酶B分泌信号肽(nprBsp),构建分泌型大肠杆菌-枯草芽胞杆菌穿梭质粒p7257-P43。然后将合成的CaO基因插入p7257-P43质粒nprBsp的下游,构建分泌表达质粒p7257-P43-CaO。将该质粒转化枯草芽胞杆菌WB800,氯霉素诱导表达。上清经SDS-PAGE检测,嵌合蛋白CaO在枯草芽胞杆菌中得到表达。Western-blot证实,该蛋白具有反应原性。免疫电镜可观察到直径约15nm±2nm的VLP,表明嵌合蛋白在体外能有效组装。     

猪、犬的鼻饲法和洗胃法

几年来,笔者参考大家畜洗胃及人医鼻饲、洗胃方法,对猪、犬中毒病17例采用鼻饲法和洗胃法进行治疗,取得了较好效果。 (一)保定方法 站立或右侧卧保定,对小猪及犬可把两前肢抱起站立施术。 (二)胃管选择 大猪用长1.5～2米,口径4～6毫米的胃管或硬胶管;小猪和狗用人的导尿管。先从鼻腔口至剑突测距,相当于从口至胃体部距离,贴以胶布为记。 (三)插胃管 先用开口器或火钳撬开上、下颌使口张开,再把管头涂以润滑油经口腔缓缓插入,也可经鼻孔插入。当胃管到达会咽部时要轻轻刺激引起吞咽,如咽喉麻痹无吞咽动作时,可直接向咽喉稍后上方伸     

一针缝合法治疗猪脱肛

病猪保定 双手握住猪后肢小腿部,使猪头向下,背向内,呈垂直竖立状;大猪保定,用两腿夹住猪的胸腹部。 手术方法 手术宜在喂饲前进行。术前用5％的明矾液洗涤患部,如有炎症时加用青霉素处理。将脱出的直肠缓慢送入肛门,并予整复,严防直肠折叠。然后用一般缝衣     

滴通法治疗水牛咽部放线菌肿

1981年笔者在公社兽医站按常规治疗牛咽部放线菌病11例,8例痊愈,其中3例咽部肿胀顽固不消,后用滴通法(即药液直接滴至患部)治愈。 方法 取站立保定,头稍高,选70厘米的一软胶管(可用猪输精器代),清洗消毒后,在体表量准鼻孔至咽部的长度,再将胶管从鼻孔插入,将所量胶管长度插完为止。助手固定胶管,术者用注射器抽取先备好的10％碘化钾液,从胶管外端徐徐注入。每10分钟20毫升,边注边前后左右稍移动胶管,使药液浸润整     

猪圆环病毒2型ORF2基因插入猪细小病毒VP2基因3'端对病毒样颗粒形成的影响

以猪细小病毒(PPV)四川分离株SC-1的VP2基因3'端为靶点,在第1215和1216位之间插入长约700 bp的猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因片段,将重组后的PPV VP2-PCV2 ORF2克隆到真核表达载体pEGFP-C1中,构建了重组质粒pEGFP.VO;经酶切和PCR鉴定后,采用脂质体介导法将重组质粒pEGFP.VO转染COS-7细胞,应用倒置荧光显微镜、电镜、免疫荧光以及生物信息学技术对表达产物进行观察分析.结果显示,重组质粒pEGFP.VO在COS-7细胞中得到表达,但在电镜下没有观察到病毒样颗粒.通过对PPV衣壳蛋白的三维结构分析及免疫荧光检测发现,PCV2 ORF2基因的插入位点位于PPVVP2基因的3'端,相应表达产物则位于VP2蛋白多肽的C端,且被其包裹在内,这可能影响了病毒样颗粒的形成,表明,PPV VP2基因3'端不适合外源基因插入构建重组病毒样颗粒.