猪水泡病和科赛奇B_5病毒的多肽成份与抗原差异的关系

自从Graves氏观察到一种感染人的肠道病毒科赛奇B_5(CB_5)的抗血清能中和猪水泡病病毒(SVDV),猪病毒也能感染人以来,人们就不断推测着两种病毒之间的关系和CB_5病毒在猪病病因学中可能起的作用。进一步的工作表明中和实验能区别两种病毒,也表明CB_5病毒存在着相当大的抗原性渐变。RNA杂交实验证实了这些抗原关系,英国SVDV分离物的RNA和原型(Faulkner)CB_5的BNA之间大约有50％的同源性,在原型CB_5     

科赛奇B_5型病毒的变异及其在猪水泡病病因学中可能起到的作用

科赛奇B_5型病毒(CB_5)和引起猪水泡病的病毒(SVDV)在血清学方面关系紧密。Graves氏曾用中和实验证明了病毒间有明显的交叉反应,并且它们的关系也被补体结合实验和免疫扩散实验所证实。在免疫扩散实验中,当两株病毒向SVDV所感染的猪的痊愈血清或者从科赛奇B_5感染康复的病人获得的血清扩散时产生了一致的一条沉淀线。此外,在同源反应中形成的刺线可以区别两病毒株或其各自的血清。     

通过血清学和核糖核酸(RNA)杂交的方法比较猪水泡病病毒和科赛奇B_5病毒

通过病毒的中和、免疫扩散试验及病毒RNA杂交研究猪水泡病病毒(SVDV)与科赛奇B_5病毒的关系,经过三个方法发现两种病毒之间有明显的差异。从几个国家分离的猪水泡病病毒的关系是很密切的,但也有差异。最近分离的科赛奇B_5病毒之间也是相似的,但发现它们与原始型(Faulkner)毒株有明显的差异。SVDV与Faulkner 毒株的关系比与最近分离的科赛奇B_5病毒更为密切。我们对于最近出现猪水泡病的关系的观察意义进行了讨论。     

野外猪中对猪水泡病病毒的低效价抗体的剖析——从与科赛奇B_5型病毒的关系来研究

1973年11月到12月,以神奈川县的种猪产地为原发地点,在日本开始爆发了由肠道病毒引起的猪水泡病(SVD)。后来,为了研究这种病毒对猪的侵害程度,而对猪水泡病病毒的抗体进行调查时,在认为同SVD的发病没有关系的血清中,即 在SVD发生以前采集的血清中,还有在认为同区域性发生没有关系的地方农家自养猪的血清中,检出了对SVD病毒的抗体。 SVD病毒是同人的肠道病毒的科赛奇B_5型(CB_5)病毒在抗原上极为一致的病毒。调查了野外猪血清中对CB_5病毒的扩体,研究了它同对SVD病毒抗体之间的关系,所得结果如下: 1.SVD发生前、发生终止1个月后、5个月后三个时间由全国收集的猪血清中,无论是来自哪一个时间的,均检出SVD的阳性例,两种病毒抗体效价的相关系数分别为0.34、0.31和0.34,是相当低的。 2.来自发生SVD养猪场的病猪血清中,发现两种病毒抗体效价间有非常高的关系系数(r=0.74～0.85)。 3.来自发生SVD养猪场的猪血清中,发病不明显的或者未发病而耐过的,其相关系数低到0.44,即使从认为处于抗体上升期的猪采集的血清(抗体效价<4~(4·0)),其相关系数也低到0.53。 从这些结果可以看出,在日本国内猪只中产生低效价抗体的主要原因是这种病不伴发水泡病症,即不显性感染所致;在这种病毒中,应考虑还存在同SVD病毒在抗原方面一     

~(35)S—甲硫氨酸标记诱导SVDV蛋白和CB_5蛋白条件的研究

本文探讨了应用~(35)S-甲硫氨酸对SVDV和CB_5这两个相关病毒体内标记的条件,并对病毒不同感染时间和不同标记时间进行了对比。结果表明病毒感染时间是标记成功的最重要因素,相比之下标记时间并不重要。病毒感染与标记也可以同时进行。标记液至少可以反复使用3次。     

猪传染性水泡病病毒和柯赛奇B_5病毒的血清学关系

(一)国外流行的猪水泡病病毒和我国流行的猪传染性水泡病病毒都能与柯赛奇B_5病毒发生交互中和反应。这就支持了这样一种观点,即我国的水泡病很可能就是国外的猪水泡病。 (二)同一份血清可以分别中和水泡病病毒和柯赛奇B_5病毒,而且其中和效价是十分接近的,这可能反映了这两种病毒在抗原结构和血清学关系上是很密切的。至于两病毒间的抗原差异也有待进一步探讨。 (三)测定和分析了与水泡病接触史不同的23份人血清对水泡病病毒的中和效价,发现末曾接触过水泡病工作的人员中有一部分人的血清呈明显的阳性反应。而且,水泡病病毒工作者血清的阳性率并不明显地高于非工作者的阳性率。由此对水泡病病毒以及柯赛奇B_5病毒与人类的关系进行了某些讨论。     

猪血清中牛病毒性腹泻病毒抗体ELISA检测方法的建立与应用

为建立检测猪源牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗体的ELISA方法,经ELISA反应条件优化、特异性试验、重复性试验及与中和法、IDEXX ELISA对比试验建立了特异性ELISA。用此方法对福州市周边20个猪场的222份猪血样进行了BVDV抗体检测。结果显示,本ELISA反应条件为:BVDV Oregon C24V与NADL株联合包被(质量浓度均为31.25μg/L,每孔加50μL)的条件为37℃1h加4℃8h,家兔抗猪瘟病毒(CSFV)超免疫血清(每孔血清效价可中和400RID CSFV)阻断时间为2.0h,封闭剂和血清稀释液中NaCl的浓度和Tween-20的体积分数分别为0.7mol/L和3.00mL/L,100mL/L马血清封闭剂、1∶50稀释的待检血清、0.625 mg/L HRP-家兔抗猪IgG酶标二抗(100μL/孔)及底物的反应时间分别为2.0、0.5、0.5h及15min;检测CSFV、伪犬病病毒、猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒阳性血清均为阴性;4份血样进行5次板内、板间重复试验结果均一致;参照中和试验,本ELISA方法的符合率(97.9%)高于IDEXX BVDV ELISA抗体检测试剂盒(93.8%);福州市周边猪群BVDV抗体阳性率为34.7%,猪场阳性率为80.0%,其中母猪群阳性率(44.6%)高于商品猪群(26.4%)。结果表明,本ELISA方法特异性强、符合率高、重复性好,适合用于猪源BVDV的血清学监测。     

新城疫病毒融合蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立

用新城疫病毒(NDV)F48E8株作为包被抗原,建立了检测由鸡痘病毒载体介导表达的NDV融合蛋白(F)抗体的间接ELISA方法.通过对20份阳性血清的P/N值与ELISA抗体效价(ET)的自然对数值(lnET)的线性回归分析,获得了回归方程lnET =0.201×P/N+4.632.应用该ELISA方法对表达NDV F基因的重组鸡痘病毒免疫鸡群进行了血清抗体检测,结果表明,血清的ELISA抗体效价与相应血清中和试验的抗体效价高度相关.攻毒保护试验的结果显示,ELISA抗体效价与机体的保护力表现一定程度的相关性.     

猪水泡病病毒结构蛋白基因的克隆及其蛋白二级结构和淋巴细胞表位的预测

以免疫信息学和反向疫苗学为理论根据,利用RT-PCR法获得了猪水泡病病毒(SVDV)HK/70株的基因组序列并测序,应用生物信息学相关软件和方法,对SVDV结构蛋白的二级结构的不同方面及其抗原特异性淋巴细胞表位进行了预测,综合评价了SVDV结构蛋白的抗原特异性细胞表位,并计算出一些潜在的抗原位点。结果表明,VP1蛋白含有的细胞优势抗原表位最多,但其他结构蛋白也含有抗原特异性淋巴细胞表位,有的甚至有可能成为优势抗原表位或对优势抗原表位有协同作用。     

猪传染性胃肠炎病毒重组N蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

以纯化的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)重组N蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,通过间接ELISA法对融合细胞进行筛选,采用有限稀释法对阳性细胞进行4次亚克隆,获得了3株能稳定分泌N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为JY(4)-1、JY(4)-2、JY(4)-3.分别采用体外培养法、诱导腹水法和实体瘤法制备单克隆抗体,并用间接ELISA法检测其效价,结果显示,这3株杂交瘤细胞的细胞培养上清、小鼠腹水和血清的单抗效价均分别为1:512、1:10~5、1:10~5,其中以诱导腹水法制备的单抗产量和效价最佳.间接免疫荧光试验结果显示,这3株单抗均能与TGEV感染的ST细胞产生特异性免疫荧光,而不与猪细小病毒、猪生殖与呼吸综合征病毒、猪轮状病毒等发生交叉反应;经鉴定,3株单抗的亚类均为IgG2a,这3株杂交瘤细胞具有良好的遗传稳定性.     

鸡传染性法氏囊病灭活疫苗免疫鸡中和抗体效价与攻毒保护力的相关关系

为了探讨鸡传染性法氏囊病病毒中和抗体效价与攻毒保护力的相关关系,以不同剂量的鸡新城疫、传染性法氏囊病二联灭活疫苗免疫21日龄的SPF鸡,免疫后采血测定鸡传染性法氏囊病病毒中和抗体,并用传染性法氏囊病病毒强毒攻击,攻毒后第72小时,剖检所有试验鸡,观察鸡法氏囊等器官病变。将每只试验鸡的传染性法氏囊病病毒中和抗体效价与攻毒保护情况进行一一对照。结果显示,当传染性法氏囊病病毒的中和抗体效价≥1∶16 384(214)时,可获得100%的保护;效价为1∶8 192(213)时,保护率为95.5%;效价为1∶4 096(212)时,保护率为92.9%;效价为1∶2 048(211)时,保护率为86.1%;效价为1∶1 024(210)时,保护率为76.5%;效价为1∶512(29)时,保护率为53.3%;效价为1∶256(28)时,保护率为33.3%,效价≤1∶128(27)时,保护率为0。试验证明,鸡传染性法氏囊病病毒中和抗体效价与攻毒保护力密切相关。     

关于猪水泡病病毒轻度和亚临床感染

有关猪水泡病病毒(SVDV)自然和实验感染的报告中指出,某些猪不表现临床症状,但能产生有意义水平的中和抗体(Nardelli等,1968;Mowat等,1972;Kubin,1973;Dawe等,1973;Burrows、Greig和Goodridge,1973;Burrows、Mann和Goodridge,1974)。这些报告的大多数,认为所涉及的猪是曾与临床病猪,因而与大量病毒有过接触,但有一部分猪只是接触过较少量的病毒。在自然爆发中,本病的发病率波动于25％(Nardelli等,1968)至65％(Anon,1973)之间。虽然在一个感染农场,总的发病率可能低,但对一个单栏来讲,则可达到90％或更高。     

新生仔猪接种猪瘟兔化弱毒疫苗抗体效价的测定

我们对新生仔猪在吮吸母猪初乳之前、后,给予接种猪瘟兔化弱毒疫苗,待60日龄后测定其抗猪瘟中和抗体效价,以观察母源抗体对仔猪免疫的干扰。 (一)材料和方法 1.试验猪:选自本省渭源县莲峰乡农户饲养的健康杂种母猪7头于分娩前一个月免疫注射猪瘟兔化弱毒疫苗(每猪1头份量)。然后,将其所产仔猪共65头供试验用。随机分为7个组, (1)哺乳前免疫组(简称A组):给刚出生的仔猪颈部肌肉注射猪瘟兔化弱毒疫苗。产     

猪传染性水泡病病毒与科赛奇B_5病毒在猪体交互免疫试验

我国流行的猪传染性水泡病病毒(简称水泡病病毒)具有人类肠道病毒中科赛奇病毒(Coxsackie virus)相类似的特征——能引起新生乳鼠麻痹致死。这曾促使我们通过交互中和实验,证实了我国流行的水泡病病毒与科赛奇B_5病毒之间存在着密切的血清学关系,曾用以上两种病毒分别测定了同一份血清的中和效价,说明它们确实存在着共同的抗原结构。我们还从电镜比较观察中,发现两种病毒颗粒的大小与形态基本相同,病毒在细     

ELISA抗体水平评价口蹄疫灭活疫苗免疫效果的可行性分析

为了探讨免疫抗体评价口蹄疫灭活疫苗效果的可行性,分别用5批次的口蹄疫O型-亚洲1型二价灭活疫苗(OS/99株+JSL/06株)、5批次的猪口蹄疫O型灭活疫苗(OZK/93株+OS/99株)免疫动物,在攻毒的同时采血分离血清,用液相阻断ELISA测定抗体效价,以分析抗体效价与免疫保护的关系。统计学分析表明,二价灭活疫苗的O型免疫抗体值与攻毒保护率(概率单位)之间呈正相关关系(P<0.01),相关系数为0.986;亚洲1型免疫抗体值与攻毒保护率(概率单位)之间呈正相关关系(P<0.05),相关系数为0.997,猪口蹄疫O型灭活疫苗免疫抗体值与攻毒保护率(概率单位)之间不呈正相关关系(P>0.05)。结果表明,应用抗体水平评价二价灭活疫苗的免疫效果是完全可行的,但用其评价猪O型灭活疫苗的免疫效果不具有可行性。     

猪圆环病毒2型Cap蛋白单克隆抗体的制备与应用

利用纯化的猪圆环病毒2型(PCV2)免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞技术,筛选获得3株能稳定分泌抗PCV2蛋白抗体的杂交瘤细胞株,分别被命名为3E5、3E6和5A6。经ELISA测定,它们的培养上清的效价分别为1∶12 800、1∶1 600和1∶6 400,腹水效价分别为1∶6 400 000、1∶640 000和1∶800 000;亚类鉴定结果显示,3株单克隆抗体为IgG2a亚类,轻链为κ型;Western-blot结果显示,3株单克隆抗体均能与PCV2Cap蛋白发生特异性反应;间接免疫荧光试验(IFA)结果显示,3株单克隆抗体均能与感染PCV2的PK-15细胞产生特异性荧光反应;病毒中和试验显示,3E5和3E6具有中和活性。利用单克隆抗体3E5建立了检测PCV2抗原的夹心ELISA;它可被用于检测经β-丙内酯灭活的PCV2和杆状病毒表达系统表达的PCV2Cap蛋白。上述研究成果为PCV2感染的诊断和PCV2蛋白功能的研究提供了重要工具和手段。     

猪传染性胃肠炎病毒间接免疫荧光检测方法的建立

为建立猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)直观、特异和快速的检测方法,将TGEV接种PK-15细胞后,以抗TGEV N蛋白的单克隆抗体为一抗,荧光素FITC标记的山羊抗小鼠Ig G为二抗,建立了TGEV的间接免疫荧光(IFA)检测方法。结果显示,TGEV的最佳接种效价为1×102TCID50,培养时间为24 h,细胞最佳固定液为40 m L/L多聚甲醛,最佳封闭条件为10 g/L BSA 37℃封闭30 min,一抗的最佳使用浓度为1 ng/L,二抗的最佳稀释度为1∶100。对常见的猪流行性腹泻病毒、猪轮状病毒和猪圆环病毒2型等猪病病原检测均为阴性。结果表明,建立的检测方法对TGEV具有良好的特异性。本研究建立的方法为TGEV的实验室诊断及TGEV在感染细胞中的定位和动态分布提供了有效的检测手段。     

细菌CpG-DNA对犬免疫增强效果的研究

以犬瘟热病毒为模式病毒,将CpG-DNA与铝胶、蜂胶2种对照佐剂分别与犬瘟热病毒灭活疫苗配合,给犬接种疫苗前后用微量中和试验抽查血清中和抗体效价,根据抗体效价高低判断佐剂的免疫增强效果.结果表明,3种佐剂疫苗均能诱导产生特异性抗体,但组间抗体效价有显著差异(P＜0.01),CpG-DNA的免疫增强作用明显高于其它2种佐剂,CpG-DNA所诱导的抗体效价较蜂胶佐剂高5倍,较铝胶佐剂高7倍.     

科赛奇B_5型病毒感染猪的尝试

尽管猪水泡病(SVD)和科赛奇B_5型(CxB_5)二种肠道病毒间存在着一种紧密的血清学关系,但是通过各种途径,将此型科赛奇病毒接种易感猪均不发生临床疾病。 攻毒之后,没有检出病毒血症,但是从粪便和口拭子断断续续地找到了病毒。曾证实了在一些猪只的粪便培养物中是一种混合病毒群,包括科赛奇B_5病毒和其它病原,大概是本地的猪肠道病毒,初次攻击之后一直到8天粪便中的科赛奇病毒量才开始下降。 抗科赛奇病毒的血清中和抗体显现出一种暂时的上升,攻击之后14天达到高峰,28天即降低到可查证滴度之下。所获抗体滴度与所给予的病毒剂量是相应的,并且中和SVD和CxB_5两种病毒的程度也是很相近的。 攻击CxB5病毒之后28天再交叉攻击SVD病毒,虽然血清中和抗体滴度对两种病毒均显示出一种特有的既往症的反应,但是大部分动物(5/6)没有典型的水泡损伤。     

抗猪传染性胃肠炎病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

应用杂交瘤技术获得了1株分泌抗猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞2D6。经检测,其分泌的抗体亚类为IgG3;杂交瘤染色体数为88;间接ELISA检测细胞培养上清液效价为1∶256,诱生腹水抗体效价达1∶6×104,与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒(PRV)、猪致病性大肠埃希氏菌(Escherichia coli)以及禽传染性支气管炎病毒(IBV)抗原之间均无交叉反应;ELISA阻断试验表明,TGEV特异性阳性血清对TGEV-McAb有明显的阻断作用,该McAb所识别的抗原是TGEV所特有的抗原决定基。