人类DNA小卫星区域RNA探针制备及应用的研究(Ⅰ)──pGEM-4Z-MYO亚克隆的构建

利用DNA重组技术，由pUC19－MYO质粒中获得MYO小卫星DNA探针片段，将其插入到具有RNA聚合酶启动子的pGEM－4Z质粒的多克隆位点，从而构建了pGEM－4Z一MYO亚克隆，为制备RNA探针并将其应用于DNA指纹检测，提高DNA指纹的敏感性和小卫星DNA多态性的检出率奠定了基础。     

利用人类c-Ha-ras-1埃可基因顺序串联28-bp重复子显示DNA纹印图谱

<正> 利用人类c-Ha-ras-1基因中28bp顺序串联重复子作为一个探针研究DNA纹印。以质粒PET为载体制备这个探针。从日本人外周血样中获取高分子量DNA。用识别位点为4个碱基的限制性内切酶Hinf·I或Sau3AI消化上述DNA。我们观察了洗脱条件不强烈情况下的由     

人DNA指纹检测的初步研究

根据随机探针检测DNA限制片段长度多态性的原理和人与鼠的髓鞘硷性蛋白(MBP)基因cDNA有90％以上同源序列的事实,我们选用rMBP-cDNA 3'端非表达区高度重复顺序的0.81kb片段作探针,检测用HaeⅢ酶解的人DNA限制性片段结果可以分解出22条谱带,受检的30例无血缘关系的个体之间,没有两个人的谱带是完全相同的,显示出此方法的高度特异性。本文还比较了若干DNA片段作探针和几种限制性内切酶检测人DNA指纹的结果。     

JL-02多位点探针DNA指纹的法医学应用研究

以自制的JL－02探针进行了DNA指纹分析，对北京地区无关个体进行了调查，计算出任意两无关个体的偶合机率为6．6×10－15；家系分析表明，谱带在亲代与子代间的传递符合孟德尔遗传规律；同一个体不同组织的DNA指纹图相同；混合斑精子DNA指纹图与相应男性血液DNA指纹图完全相同；该探针对0．5μg的基因组DNA杂交，可获得清晰可辩的DNA指纹图。证明了新探针适用于法医物证检验中的个人同一认定及亲子鉴定。     

小卫星DNA探针MZ1.3:制备、法庭案例上的应用及DNA片断图型与常规父权检验结果的比较

<正> 小卫星DNA探针MZ1.3是从人类基因库中通过筛选随机选择克隆中的超可变重复序列而分离的。详细制备方法及该选择性DNA克隆序列的细节将另行发表。自外周血细胞及尸解材料组织标本抽提的人DNA用限制性内切酶HinfI酶解,再作Southern印迹法分析。在与经~(32)P-dCTP缺口翻译的探针MZ1.3杂交后,经放射性自显影,每一个体DNA样本平     

DNA指纹的个体特异性和细胞稳定性研究

人类基因组的许多高度可变区域能够与小卫星探针杂交,而同时被检测出来,小卫星探针由串联重复的"核心"顺序构成.采用Southern印迹杂交获得的DNA指纹图包含多条高度可变的DNA片段杂交带,这些带主体细胞和生殖细胞中都表现出稳定性,而且安全具有个体特异性.本文用小卫星探针33.15,调查了北京地区的60名无关个体,     

用M13噬菌体作探针进行人的DNA限制性片段长度多态性分析

用M13噬菌体作为探针,可以检测人和动物基因组DNA中高度可变的小卫星区域,其有效顺序是该噬菌体基因Ⅲ中的两组15bp的串联重复。本文介绍的是采用随机引物与PCR过程相结合的方法标记M13噬菌体,得到高比活性的探针,与经HinfⅠ消化的人DNA杂交,产生具有高度多态性的DNA图谱,并与33.15探针杂交的DNA图谱进行了比较,证明M13噬菌体是进行DNA多态性分析的一种非常有用的探针。     

不同方式标记非放射性探针原位杂交效果评价

目的比较不同方式标记非放射性探针的原位杂交效果。方法通过两种方法标记地高辛随机引物DNA探针和反意RNA探针,在大鼠损伤模型的皮肤组织上进行原位杂交。结果两种探针均可满足要求,以反意RNA探针在阳性染色深度和背景方面效果更佳。结论RNA探针在杂交效果方面优于DNA探针。     

DNA指纹技术在强奸案和亲子鉴定中的应用

在同一张膜上测定了18例无关个体血样,并计算出α-珠蛋白-3'HVR探针DNA指纹图的相关机率为4.0×10~(-12),平均每条谱带的相关机率为0.21。用此探针检验的14起强奸案和6起亲子鉴定案均获得肯定的结论。     

位点特异性小卫星探针的特点及其在法庭科学上的应用

<正> 在人类DNA上发现了许多事变区,它们通常是由前后重复被称为小卫星的短顺列所组成。由于高度变异性,含有微小卫星的DNA为个体识别及亲子鉴定提供了有价值的遗传探针。为了分离出更多的有效的DNA探针,我们建立了一个由许多高度DNA片段组成的Cha-     

单位点DNA探针在早孕期亲子鉴定中的应用研究

本研究利用限制性片段长度多态性分析技术，从3O例早孕期绒毛组织及其父母血液中提取DNA，以两种单位点DNA探针PAC255及PAC256进行检测，根据所获等位基因的大小，查国人此二位点基因频率及每一家系三组合中该基因传递相对机会，计算出相应的亲子关系指数和亲子关系概率。结果．累积条子关系指数和累积亲子关系概率的范围分别是56．80～8333.50和98.27～99.99％、按照国际通用标准，这30个家系中，可以肯定亲手关系者20例（66.7％），极可能有亲子关系者8例（26.7％），非常可能有亲子关系者2例（6.7）。说明同时使用此二单位点探针，在早孕期亲子鉴定中有很高的应用价值。     

国人六个高变DNA位点的基因频率分布

使用6个单位点探针，用Southern印迹杂交技术研究了国人的D2S44，D17S79，D14S13，D14S1，DXYS14及D18S27等位点的基因频率分布。发现它们的DNA指纹图均具高度多态性，等位基因数27～107个。非父排除率（EPP）分别为0．8407、0．7691、0．9792、0．9040、0．9400及0．8177，累积非父排除率为0．99999；个人识别能力（DP）分别为0.9880、0.9766，0.9996，0.9961，0.9973及0．9338，累积个人识别能力接近1，故可作为亲子鉴定及个人识别非常有力的工具。此外还对单位点探针的优缺点进行了讨论。     

单管实时PCR快速检验ABO基因型

目的建立快捷特异的ABO基因分型检测方法。方法根据ABO基因结构特点,设计特异性引物和四色双链探针,采用单管实时PCR方法检测ABO基因,结果与传统免疫学方法相对比。结果该方法可检出常见的3个等位基因,区分常见的6种基因型,全部检测过程可在100min内完成。110例中国人的随机个体定型结果与传统免疫学方法一致。结论实时PCR法进行ABO基因分型,简便快捷,灵敏度高,可以有效地为侦查破案服务。     

Identification in blood stains through DNA typing with C4 and HLA-DR probes

A restriction fragment length polymorphism analysis using double digestion of DNA preparations with XbaI and BglII restriction enzymes and hybridization with C4 and HLA-DR probes is described. The typing conditions selected reveal extensive individual variation in both C4 and DR gene regions. In our panel of 46 unrelated individuals, 37 different phenotypic patterns were recognized when both probes were used, and preliminary discriminative power values of 0.865 and 0.914 were calculated for C4 and DR beta, respectively. The probability of a chance match using both systems is probably about 1.5.10(-2). The potential of this method for individual identification of blood stains was demonstrated on DNA prepared from 6-month-old dried blood stains from seven panel individuals. The seven individuals were all identified when comparing stain DNA patterns with panel control patterns. No RFLP pattern changes were observed following storage of blood stains. Based on these experiments with C4 and DR beta DNA typing under laboratory conditions, it is concluded that DNA typing with such probes may become a powerful tool in future stain identification analyses.     

DNA指纹图在法医学鉴定中应用的研究(Ⅰ)

应用 MYO DNA 探针对中国人进行了 DNA 遗传指纹图检验。从两个家系16人及100个无关个体中取肘静脉血提取 DNA,用限制性内切酶 HinfⅠ或 HaeⅢ水解,1%琼脂糖凝胶电泳分离,经 Southern印迹转移,MYO DNA 探针杂交,获得了清晰可辨的 DNA 指纹图谱。结果每个个体在3.0Kb 以上均能检出10条以上杂交区带,个体间的相关概率<4×10~(-9),由杂交区带构成的图谱是个体特异的,杂交区带遵循孟德尔的显性遗传方式由亲代向子代遗传;具有 DNA Fingerprints 的特点。对两起亲子鉴定的案例进行指纹图检验,孩子所存在的杂交区带,除来自母亲外,其余可在嫌疑父亲带中找到,肯定了孩子与嫌疑人的父子关系。MYO DNA 探针在亲子鉴定与个人识别的法医学鉴定中有着重要的实用价值。     

32例父权鉴定DNA指纹图结果与血型血清学方法检测结果的比较

32例父权鉴定案例,应用‘Myo’小卫星DNA探针,以Southern印迹杂交技术进行DNA分析,所得结果与血型血清学检测方法(15～24种红细胞抗原、血清蛋白型及红细胞酶型系统)的结果比较,获得一致性结论。其中8例排除父权,24例肯定父权。并就两种检测方法的内部联系进行了讨论。     

DNA芯片技术的发展及其应用

介绍了DNA芯片技术的制备和工作基本原理,以及其在生命科学、医学及法庭科学中的应用.     

Big game species identification by deoxyribonucleic acid (DNA) probes.

Species identification is important in many big game forensic science cases but cannot always be accomplished because of the lack of adequate techniques. The authors have developed deoxyribonucleic acid (DNA) probes for elk, deer, and antelope by isolating highly repeated satellite sequences. These DNA probes distinguish among deer, elk, and antelope, although not between different species of deer. Because of the high number of sequence copies per genome, these probes are extremely sensitive, requiring less than 10 ng of total genomic DNA. The developmental protocol for these probes is relatively simple and is applicable to many other species.