鸡白色念珠菌五种染色方法的比较研究

为建立鸡白色念珠菌的最佳染色方法,探讨了苏木精-伊红(HE)染色、过碘酸雪夫氏(PAS)染色、Grocott六胺银(GMS)染色、CalcofluorWhite(CFW)荧光染色和CFW+HE复染共5种染色方法对鸡嗉囊白色念珠菌感染的染色效果。结果显示,HE染色组织结构清楚,但菌丝和孢子结构不十分清晰;PAS染色和GMS染色菌丝和孢子结构清晰,但步骤较多,且耗时长;CFW荧光染色简单、特异,菌丝、孢子结构清晰,但组织结构不清晰;CFW荧光染色后、再用HE复染能清晰显示菌丝孢子结构及病料组织结构,是较理想的鸡嗉囊白色念珠菌的染色方法。     

鸭疫里氏杆菌平板凝集抗原的制备

为了对鸭传染性浆膜炎进行快速的型别诊断,探索了不同灭活方法、菌液浓度、染色方法和保存条件对标准1型和2型鸭疫里氏杆菌凝集抗原的影响。结果显示,用甲醛溶液灭活细菌制备的抗原比加热灭活的灵敏度高;石炭酸复红染色液的染色效果优于虎红染色液和草酸铵结晶紫染色液;经石炭酸复红染色液染色的菌液浓度达到109数量级时,常温和4℃保存1年稳定性良好。结果表明,制备的鸭疫里氏杆菌平板凝集抗原可用于临床鸭疫里氏杆菌感染或免疫后抗体的检测。     

家兔须癣毛癣菌皮屑涂片染色方法的比较研究

为了建立须癣毛癣菌快速诊断方法,采集疑似患真菌病的家兔皮屑样品96份,制作涂片,分别进行直接镜检、G rocott六胺银染色、过碘酸雪夫氏染色、Calcofluor W hite荧光染色和定量PCR检测。结果显示,4种常规方法的阳性率依次为69.78%、71.19%、72.92%和84.38%,特异性和阳性预测值没有显著差异,而荧光染色检查的敏感性和阴性预测值明显高于其他3常规种方法(P0.01)。定量PCR的阳性率略高于荧光染色,但没有显著差异。与其他3种常规方法相比,Calcofluor White荧光染色方法相对简单、快捷、敏感、阳性率高,其阳性率与定量PCR相当,但费用低。由此可见,Calcofluor White荧光染色方法是须癣毛癣菌感染可选择的检测方法。     

兔脑炎原虫病快速诊断的临床病理学研究

为了在临床上能快速检出兔脑炎原虫,尽快诊断兔脑炎原虫病,对病兔进行了尿沉渣涂片的特殊染色、尿沉渣透射电镜的负染色、肾触片的特殊染色和肾病理组织学切片的比较观察。就尿沉渣涂片和肾触片的特殊染色而言,经光学显微镜检查,可从涂片和触片上的肾小管上皮细胞内检出兔脑炎原虫及其假囊,据此可对兔脑炎原虫病做出快速诊断。而对尿沉渣透射电镜的负染色和肾病理组织切片的检查,可与尿沉渣涂片检查结果相互印证,使临床诊断更加准确。结果表明,尿沉渣涂片和肾触片的特殊染色是临床上用于诊断兔脑炎原虫病的一种快速、准确和简便的新方法。     

不同保存期吸虫标本胭脂红染色时间的比较

将采集的小、中、大型液浸吸虫标本按不同保存期 10d、5～ 10年、15～ 2 0年用胭脂红进行染色 ,比较最佳染色时间。结果 ,小型虫体保存 10d以内其染色时间不超过 2 0min ,5～ 10年和 15～ 2 0年约为 3 0min ;中型虫体保存 10d以内其染色时间约为 40min ,5～ 10年和 15～ 2 0年约为 180～ 2 10min ;大型虫体保存 10d以内其染色时间约为 90min ,5～ 10年和15～ 2 0年约为 2 40min。     

绵羊骡马肿瘤间质构造的比较组织学观察

采集绵羊、骡、马肿瘤组织,通过石蜡切片的常规染色(HE染色)、胶原纤维染色(Masson三色染色法)和网状纤维染色(Gomori银染色法)技术,对腺瘤、腺癌、纤维瘤、纤维肉瘤、平滑肌瘤、平滑肌肉瘤和鳞状细胞癌的间质构造进行比较观察。结果显示,胶原纤维的走向和分布具有一定的特异性;网状纤维在鳞状细胞癌的癌巢周边较多,瘤细胞之间未见分布,但在纤维瘤、纤维肉瘤、平滑肌瘤和平滑肌肉瘤的瘤细胞之间均有分布;间质内毛细血管极少分化成熟。上述结果进一步明确了上述动物常见肿瘤间质的构成及其纤维和血管在分布、数量、染色特性和结构等方面的特点。     

BHK-21细胞蛋白样品双向凝胶电泳条件的优化

分别从BHK-21细胞处理方法、样品上样量、聚丙烯酰胺凝胶浓度和染色方法4个方面优化了BHK-21细胞蛋白双向凝胶电泳的技术条件,以为口蹄疫病毒感染细胞比较蛋白质组学研究奠定基础。结果表明,处理细胞时,采用超声破碎方法优于反复冻融方法;用考马斯亮蓝染色时,7cm胶条上样量为100μg时图谱的蛋白点较多且分离清晰;浓度为10%的聚丙烯酰胺凝胶所得的蛋白点较多;通过2种染色方法的比较,硝酸银染色方法优于考马斯亮蓝染色方法。优化后的双向凝胶电泳技术得到的图谱,蛋白点多且清晰,重复性好,拖尾现象减少,符合软件分析的要求,可用于口蹄疫病毒感染BHK-21细胞蛋白质组学研究。     

简便超薄切片染色方法

超薄切片的染色质量,直接影响电镜观察及摄影效果。目前虽有瑞典LKB公司生产的超薄切片自动染色器,但价格昂贵,难以普及,国内仍延用传统的液滴染色法。这种方法不仅麻烦费时,而且在染色过程中,由于与空气中的二氧化碳接触,表面形成碳酸铅沉淀,对观察和摄影影响颇大。我们摸索改良的染色方法,不需特殊设备,操作简便,可提高功效3～4倍,而且消除了碳酸铅污染,切片反差均匀,观察、摄影效果良好。     

几种斑点试验灵敏度比较的研究

本文对几种单克隆抗体参与的斑点试验在检测牛外周血淋巴细胞表面抗原的灵敏度进行了比较,其结果:免疫金/银染色>放射自显影>免疫酶染色>免疫金染色的灵敏度。     

隐孢子虫病的诊断研究——隐孢子虫卵囊染色标本光镜检查

用5种不同染色方法对病牛粪便涂片染色,藉助卵囊和标本背景染成不同的颜色进行形态观察与鉴别诊断。试验结果,抗酸和Giemsa染色方法较好;负染法可作为大量粪样检查时初筛标本使用。     

绵羊胎盘滋养层细胞的体外培养与鉴定

为建立一种稳定、方便地获得较高纯度的绵羊绒毛膜滋养层细胞的方法,为后续的细胞转染和RNA干扰试验提供细胞学基础,采用组织块法培养滋养层细胞,消化差速法纯化细胞,相差显微镜观察滋养层细胞的形态学特点,应用常规HE染色和免疫组织化学染色、透射电镜及PCR技术鉴定细胞来源。结果显示,倒置相差显微镜下,可见细胞为上皮样细胞形态,呈片状铺展生长。免疫组织化学染色显示,细胞角蛋白染色阳性细胞占90%以上,波形蛋白染色呈阴性;透射电镜可观察到滋养层细胞所特有的结构;台盼蓝排斥试验检测细胞活力,存活率超过95%,细胞活力良好。常规RT-PCR技术可扩增出滋养层细胞所分泌的特有的干扰素蛋白-1基因片段。证实该方法可以有效获得较高纯度的、具有生物学活性的绵羊绒毛膜滋养层细胞,为本实验室后续的体外研究提供试验基础。     

病毒电镜负染色条件试验

近年来,电镜负染色技术广泛应用于病毒学研究,对于观察病毒的形态结构和病毒性疾病的临床诊断有重要意义。为改善负染色方法制备样品的稳定性,提高成像效果,我们在应用电镜负染色法观察病毒的过程中对影响负染色效果的诸因素进行了试验。     

革兰氏染色与革兰氏变性

革兰氏染色是丹麦医生HansChristianGram于 1884年提出来的[1] ,当时是用三苯代甲烷及碘溶液染后 ,再用酒精脱色 ,若是革兰氏阳性菌用这种方法染后则不能被酒精脱色。此染色法经过多次改进 ,成为现在普遍应用于细菌染色的方法。现用的方法 ,多采取美国细菌学会推荐的方法 ,国内自编的《兽医微生物学实验指导》[2 ] 对该方法包括染料的配制、染色程序等作了详细论述 ,笔者根据多年实践 ,在其中详细介绍了操作方法 ,并被全国高等农业院校教材采用[3] 。　　革兰氏染色有 3种情况 ,即革兰氏阳性 (Gram’spositive)、革兰氏阴性 (Gram’snegat…     

犬肝细胞肝癌和猫胆管型肝癌的病理组织学诊断

采用2015版W H O肝癌组织学分类方法,对临床上犬和猫的肝癌进行病理学分析。通过石蜡切片的常规染色(HE染色)及免疫组织化学方法进行组织学鉴定。犬的病理学检查结果为肝脏组织的外部多处坏死出血与肝硬化。我们进一步应用HE染色的方法对肝组织进行染色,观察到其病理改变为细胞有异型,3层的细胞排列成柱状,梁索状和腺泡状,细胞异型性明显,核仁显著,最后确诊为为肝细胞癌。猫的病理学检查结果为胆管上的肥大部分,胆管的纤维组织显著增加,是狭窄胆管胞膛,黏膜红色。在狭窄的部位,胆管扩张。胆管上皮增生管状腺,纤维增加,淋巴细胞浸润。胃、十二指肠、结肠黏膜固有层淋巴细胞浸润,纤维分生固有层淋巴细胞浸润。最后确诊为肝胆管癌。     

犬半月板脱细胞基质支架的制备及其特性的研究

半月板是膝关节中的基础纤维软骨组织。损伤半月板会损害正常膝关节功能和易患骨关节炎。人和其他动物半月板的脱细胞处理均有文献报道,但犬半月板的脱细胞支架制备鲜有文献报道。本研究采用高低渗反复冻融和1%十二烷基硫酸钠溶液(SDS)脱细胞处理,制备犬半月板脱细胞基质支架。通过HE染色、天狼猩红染色、阿尔新蓝染色和DNA含量测定检测细胞脱除成度。组织学观察和扫描电镜结果显示犬半月板的胶原纤维主要呈线性沿圆周方向排列,鲜有径向排列,细胞陷窝沿纤维束排列。力学性能检测显示,脱细胞基质与天然半月板相比压缩模量有所降低,这与阿尔新蓝染色显示的脱细胞后蛋白多糖丧失具有一定的关系。体外细胞毒性测定结果表明半月板脱细胞支架对犬骨髓间充质干细胞(BMSCs)没有毒性。细胞增殖、扫描电镜观察和活/死细胞染色试验表明犬BMSCs可粘附于支架并且不断增殖。这说明犬半月板脱细胞基质支架可作为构建组织工程半月板的支架。     

兔脑炎原虫引起脑星形胶质细胞增殖和胶质纤维酸性蛋白的表达

为了研究兔脑炎原虫引起脑组织星形胶质细胞增生的特点和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的丰度,经特殊染色、免疫组织化学染色和免疫印迹技术对30只病兔和10只对照兔的脑组织进行了详细的研究。结果显示,病兔的脑组织出现了弥漫性或局灶性非化脓性脑炎病变及不同形态的特异性肉芽肿。用改良的革兰染色可在肉芽肿的上皮样细胞及坏死组织中检出蓝色的兔脑炎原虫;用甲基绿派若宁染色可在上皮样细胞的胞质中检出红色的兔脑炎原虫;用抗-GFAP免疫组织化学染色,见病兔脑组织中有大量星形胶质细胞增生,在脑肉芽肿及血管套周围也有大量反应态星形胶质细胞,使之与正常脑组织隔离,增生的星形胶质细胞的足突在血管周围、脑软膜下和室管膜细胞的基底部形成厚层屏障膜。用免疫印迹技术检测,病兔脑组织中GFAP表达的丰度明显高于对照兔,且与抗-GFAP免疫组织化学染色的结果相一致。研究结果表明,兔脑炎原虫能引起脑组织中星形胶质细胞增生,反应态的星形胶质细胞形成的各种屏障膜可保护脑组织免受更大的损伤。     

绵羊肺炎支原体免疫组织化学及间接免疫荧光检测方法的建立

以病理组织学观察为基础,建立检测绵羊肺炎支原体的间接免疫组织化学和间接免疫荧光方法,以绵羊肺炎支原体标准血清为一抗,分别以家兔抗山羊Ig G-HRP和家兔抗山羊Ig G-FITC为二抗,对绵羊肺炎支原体阳性肺组织切片及阴性对照组切片进行HE染色、免疫组织化学染色及间接免疫荧光染色,并优化染色条件,以确保组织切片在最佳的条件下进行鉴定。结果显示,本试验所建立的免疫组织化学方法与PCR方法对病样的检出率相符,且高于传统的分离培养法。结果表明,本试验建立的间接免疫组织化学方法和间接免疫荧光方法可用于对临床病例的组织样本检测,具有很强的特异性和可靠性,可直观地观察和探究该病原在机体内的定位、动态分布以及致病机理,以期为临床诊断提供更可靠的方法。     

山羊成骨细胞的体外培养和鉴定

采用初生山羊羔股骨骨膜,通过植块培养法、完全消化法和半消化植块法分离、培养成骨细胞。结果表明,植块培养法、完全消化法和半消化植块培养法的贴壁时间分别为4、24、4 h;培养4 d时的细胞数量分别为少量细胞、少量细胞、大量细胞,细胞汇合时间分别为21、19、10 d。传代后第7 d即可汇合,第14 d出现矿化结节,茜素红染色呈橘红色,Von Kossa染色呈黑色;姬姆萨和HE染色后可见体外培养的细胞呈三角形、多角形,胞质丰富,胞核卵圆形,单核,有1~3 个核仁;碱性磷酸酶染色后胞质呈黑色颗粒或块状沉淀;扫描电镜观察胞突发达,伸出的突起与临近细胞的突起相连。体外培养传至15代时细胞的生物学性状未发生变化。试验结果显示,半消化植块培养周期短,细胞损害小,有利于细胞贴壁,是一种可行的骨组织工程研究方法。     

H3N8亚型马流感病毒人工感染马的病理学观察及抗原定位

为验证鸡胚传代对H3N8亚型马流感病毒致病性的影响,利用F3代马流感病毒经鼻腔感染2匹蒙古马,应用苏木素-伊红染色和免疫组织化学染色方法,对1例临床症状明显的马进行了病理组织学观察和抗原定位。结果表明,该人工感染马镜检病变明显,鼻黏膜、气管、肺、心肌、肝、肾和脾等组织器官均出现不同程度的充血、淤血、水肿,并伴以各实质细胞的变性、坏死以及炎性细胞的渗出和增生。其中呼吸系统病变最为严重,肺表现为支气管性间质性肺炎。免疫组织化学染色结果显示,病毒抗原主要存在于呼吸系统的黏膜上皮组织中,初步证明了马流感病毒F3代对马具有致病性。     

人工接种猪瘟强毒的病理学研究——脏器及淋巴结内网状纤维的变化

网状纤维是全身组织的支架。当器官组织遭受破坏或发生改建时,网状纤维则呈现胶原化、凝聚或溶解液化等各种变化,即使是一些很小的坏死灶,在H.E染色的切片中很不明显,但用网状纤维染色则可得到清晰的显示。因此网状纤维的变化对疾病的诊断有着极大的