牦牛胎儿成纤维细胞的分离培养

采用30d胚龄左右的牦牛胚胎,用2种不同的消化液消化后,将所得的牦牛胎儿成纤维细胞(yak embryonic fibroblasts,YEF)培养于不同血清含量的RPMI1640培养液中,并接种于2种不同材质的培养瓶表面,对YEF的分离方法、培养所需胎牛血清(FBS)添加量和不同基质表面对YEF生长的影响进行了研究。结果表明,含150 mL/L FBS的RPMI1640培养基最适合YEF生长,可传代27次以上;经用RPMI1640和D-Hank’s液配制的2．5 g／L胰蛋白酶消化,所得的YEF的细胞活率差异不显著(P>0．05),其原代细胞在含100 mL／L胎牛血清的RPMI1640培养液中的贴壁率差异极显著(P<0．01);不同生长基质对YEF的形态没有显著影响。     

洁尔阴治疗乳牛子宫内膜炎

笔者据洁尔阴洗液有抗菌消炎、清热燥湿等功效 ,用其对乳牛慢性子宫内膜炎进行试治 ,取得显著疗效。药物及其配制　洁尔阴洗液为棕色至深棕色液体 ,由四川成都恩威制药有限公司生产 ,塑料瓶装 ,12 0ｍＬ/瓶。根据乳牛患病程度和时间长短 ,选用 3 0— 5 0ｍＬ/Ｌ的浓度 ,即取洁尔阴洗液 3ｍＬ或 5ｍＬ加蒸馏水 10 0ｍＬ混匀即成。试验乳牛　在河南省漯河市郊区 5个规模化奶牛场和周边散养农户以及郾城县城关镇、孟庙镇奶牛养殖户 ,选择有慢性子宫内膜炎所致不易受孕的乳牛 16 2头 (包括用高锰酸钾等药物治疗效果不佳而改用洁尔阴洗液治愈的 4…     

绵羊肺腺瘤病毒内蒙古株的分离与观察

以内蒙古某羊场自然感染绵羊肺腺瘤病的病肺组织 4例和 3月龄绵羊胎肺 2例作为材料 ,对胎肺细胞进行了原代培养并接种绵羊肺腺瘤病毒悬液 ,进行了绵羊肺腺瘤病毒 (JSRV)的分离 ,同时采用电镜负染色技术和超薄切片透射电镜技术对上述样品进行了观察。结果表明 ,自然感染绵羊肺腺瘤病的 4例病肺组织中都有散在的病毒粒子 ,其直径为 10 0～ 12 5nm ,接种病毒悬液的胎肺细胞从第 2代到第 9代均出现细胞病变 ,但对绵羊胎肺培养的病毒悬液电镜负染色观察未发现典型的病毒粒子 ,而超薄切片透射电镜观察发现了病毒样粒子     

带毒传代工艺在狂犬病细胞苗生产中的应用

狂犬病细胞苗的传统生产方法是取长成“ ”的BHK21 细胞单层,弃去生长液(血清含量 100mL/L),按1.5万mL细胞培养瓶每瓶 40 mL的量接毒旋转,使毒液浸润整个细胞面,37 ℃旋转吸附40~ 60 min,加入 2 000 mL 维持液(含血清 30mL/L),37℃旋转培养48 h后,调pH至7.2~7.4,继续培养至96~120 h,冻毒,收获细胞培养物。传统方法的生产成本高,劳动强度大,种毒使用量大。2004年笔者采用带毒传代工艺生产狂犬病细胞苗,效果较为满意。　　材料　毒种为中国兽医药品监察所提供的狂犬病病毒ERA 株适应株第 1 代毒,经本厂传至第 4代,经检验符合生产…     

猪瘟兔化弱毒牛肾细胞疫苗的研究——牛肾细胞培养及其生物学性状的观察

用牛肾上皮细胞培养猪瘟兔化弱毒,生长繁殖良好,并不断从细胞中释放出来,猪瘟兔化弱毒在牛肾细胞上培养,不引起肉眼可见病变,用免疫荧光法可在接毒后6小时从胞浆中发现特异性荧光,接毒后18小时,可用家兔在细胞培养物中检出病毒。用带毒细胞传代,能促进兔毒在牛肾细胞上的适应能力,细胞传代后经3个多月培养,其间多次换液,不接毒,细胞收液的病毒滴度可稳定的达到1:20000,用盖玻片作带毒传代细胞单层培养,用姬姆萨染色镜检,可在许多细胞浆中发现原生小体样紫色颗粒,用H·E染色,可在胞浆中发现嗜伊红包涵体样颗粒,初步认为猪瘟兔化弱毒在牛肾细胞上培养,可产生包涵体。用牛肾细胞大瓶旋转培养猪瘟兔化弱毒,能生产疫苗,并可多次接毒、收毒,收毒次数达20余次,疫苗毒价可达1:50000,少数批次可达1:100000,对猪有良好免疫力,本试验1987年10月在云南生药厂已完成中试生产,先后冻干疫苗5批,一次效检50000倍合格的占80％,20000倍合格的占20％,各项检验指标符合规程要求,区域试验注射各种猪只40000余头,证明安全有效,疫苗在-18～-20℃保存1年,未见毒价下降。     

猪流行性腹泻病毒Vero细胞微载体培养条件的优化试验

通过研究搅拌速度、pH值、血清浓度等环境条件对细胞贴壁的影响以及细胞接种密度、微载体浓度与细胞生长的关系 ,对应用微载体技术和生物反应器系统生产猪流行性腹泻病毒(PEDV )的可行性进行了探讨。结果表明 ,搅拌转速、pH值、血清浓度均对Vero(PEDV )细胞在CT 3微载体上的贴壁率和均匀分布有影响 ;当接种密度为 15 .0× 10 4 /mL时 ,即每 1mg微载体接种 5 .0× 10 4 细胞时 ,可以获得较高的细胞密度 ;随着微载体浓度的提高 ,最高细胞密度也增加 ;在CelliGen反应器中 ,采用优化的培养条件 ,细胞密度可达到 174 .0× 10 4 /mL ,是方瓶培养的 3.5倍 ,每个细胞的PEDV含量与方瓶培养相当 ,制备的疫苗免疫原性好     

绵羊痘病毒固原株的分离与鉴定

取发病绵羊的皮肤痘疹研磨制成病料样品悬液,将该悬液感染未免疫的健康绵羊,同时接种原代绵羊羔羊睾丸(LT)细胞,盲传5代后,转接Vero细胞,进行间接免疫荧光试验和PCR鉴定。样品悬液感染未免疫的健康绵羊后出现绵羊痘的典型发病症状,经过LT细胞传代后转接Vero细胞,出现了特征性细胞病变;间接免疫荧光试验和PCR均检测出病毒存在。PCR产物的核酸序列测定结果显示,分离毒株的RPO30基因与已发表的绵羊痘病毒毒株的相应基因的同源性在99%以上。上述结果表明,本研究从宁夏固原市疑似绵羊痘病毒感染的绵羊体内成功分离到1株绵羊痘病毒,并将其命名为绵羊痘病毒固原株。     

动物细胞转瓶多层培养法

在动物疫苗生产中,需要大规模培养细胞以增殖病毒。目前,我国多采用10～15立升圆瓶旋转培养,不能满足日益增长的生产需要。影响转瓶细胞产量增加的主要原因是培养表面有限,一个10立升圆瓶培养表面约为2000平方厘米,15立升圆瓶培养表面约为3000平方厘米。增加细胞产量首先得增加培养表面。为此,我们设计并试验成功了以转瓶培养为基础,增加多层培养膜的转瓶多层培养法。     

BHK-21细胞在生物反应器中生长的观察

近年来,在超量培养动物细胞技术方面,已取得一定的进展,许多新型的生物反应器培养系统,包括微载体、中空纤维、多层年板式、微胶囊固定化细胞、滚瓶及灌注系统等。悬浮培养已在几千升的水平上生产口蹄疫、麻疹、狂犬病等疫苗及干扰素等产品。大规模的培养系统已达10000升的规模,但多数的生产系统是在几百升至几千升的规模中进行的。我国目前在兽用疫苗生产中基本还延用传统的液瓶单细胞层培养。我们实验的目的就是以BHK-21细胞的悬浮培养来替代其单层培养。     

传代细胞IB-RS-2的保存试验

IB-RS-2细胞引进我国后,由于其能适应多种病毒的生长,故应用广泛。该细胞分种后,在37℃培养10天左右即脱落。在生产及研究中,经常遇到暂不用细胞的情况,但为了维持细胞种子,最长不超过7、8天就要传代一次。这不但浪费人力物力,而且也增加了其它微生物污染的机会。几年来经我们实际培养发现,随代数增加,细胞形态逐渐变化。为了避免或减缓上述弊病,我们对此细胞在28℃、4℃及液氮中的保存进行了试验。     

犊牛酸中毒的治疗

发病情况　定西县城关乡福台村张某饲养的 6月龄母犊牛因偷食过量小麦后出现不吃、不反刍而来院就诊。犊牛表现精神沉郁、被毛逆立、口腔有多量涎液、舌苔微黄 ,结膜呈树枝状充血、呼吸促迫 ,瘤胃蠕动音废绝 ,排稀粪 ,喜卧 ,心跳加快 ,体温 3 9.3℃。初步诊断为酸中毒。治疗　 10 0 ｇ/Ｌ葡萄糖 5 0 0ｍＬ、生理盐水 5 0 0ｍＬ、5 0 ｇ/Ｌ碳酸氢钠 2 5 0ｍＬ、维生素Ｃ 2 0ｍＬ、10 0 ｇ/Ｌ安钠咖 10ｍＬ ,一次静脉注射 ;硫酸镁 2 5 0 ｇ、液体石蜡 5 0 0ｍＬ ,一次胃管投服 ;氨胆注射液 15ｍＬ一次肌肉注射。患牛于第 2ｄ痊愈出院犊牛酸中…     

中西医结合治疗猪顽固性便秘

20 0 1年春 ,某养猪场先后发生猪便秘 15例 ,一般疗法治愈10例。其余 5例患畜经 3ｄ的盐类及油类泻剂等治疗无效 ,且病情逐渐恶化 ,改用中西医结合治疗 :每头用 10 0 ｇ/Ｌ安钠咖 10ｍＬ 1次肌肉注射 ;5 0ｇ/Ｌ盐酸毛果芸香碱 2ｍＬ用注射用水 10ｍＬ稀释后 ,成年母猪 8ｍＬ、育肥猪 5ｍＬ 1次肌肉注射 ;5 0 ｇ/Ｌ氯化钠溶液成年母猪 15 0ｍＬ ,育肥猪 10 0ｍＬ ,1次静脉注射 ;中药用炙巴豆 (成年母猪 1ｇ、育肥猪 1.2 ｇ)、甘遂 (成年母猪 4ｇ、育肥猪 6ｇ)、大黄 40 ｇ、芒硝 5 0 ｇ、干姜 5 0ｇ ,共为细末 ,开水 5 0 0ｍＬ冲后候温 1次口…     

乳牛误用铁剂死亡1例

20 0 1年 11月 3日下午 4时许 ,陕西省渭南市乳牛专业户李某自己给其 8岁母牛补给葡萄糖酸钙及糖、维生素Ｃ ,并在 5 0ｇ/Ｌ葡萄糖液 45 0ｍＬ中加入右旋糖酐铁 2盒 (浙江瑞安制药厂产 ,规格 10× 2 .0ｍＬ ,每 1ｍＬ含元素铁 2 5ｍｇ) ,静脉注射 ,约10ｍｉｎ后当药液注入三分之一左右时 ,该牛突然吼叫、瞪眼、倒卧于地 ,李某即刻拔出针头并请兽医人员诊治。临床检查　牛卧地打颤 ,呼吸紧迫 ,张口喘气 ,口流白沫 ,四肢游泳状划动 ,心率 110次 /ｍｉｎ、节律不整 ,第二心音微弱 ,排少量粪、尿。治疗　立即肌肉注射 1ｇ/Ｌ盐酸肾上腺素 10ｍＬ…     

骡农药对硫磷中毒的救治

宁安市石岩农场刘某在田间播种休息时 ,2匹使役骡挣脱僵绳误食麻袋里拌有农药对硫磷 (16 0 5 )的小麦种子后 ,突然倒地 ,不能站立 ,遂来站求治。估计 2匹骡共吞食有毒麦种 3 .5ｋｇ ,每匹骡约食入对硫磷 15 0 0ｍｇ。临床症状　病骡出汗 ,流涎 ,呼吸迫促 ,肺泡音增强 ,脉搏增数 ,心音亢进 ,瞳孔缩小 ,全身性抽搐、痉挛。抢救措施　每匹病骡 1次肌肉注射 12 5 ｇ/Ｌ双复磷 10ｍＬ、5 ｇ/Ｌ硫酸阿托品 10ｍＬ ;用 10ｇ/Ｌ碳酸氢钠溶液洗胃 ,至导出液液体变清无大蒜气味为止 ;静脉注射 5 0ｇ/Ｌ葡萄糖液2 0 0 0ｍＬ、10 0 ｇ/Ｌ安钠咖 10ｍＬ。…     

猪传染性水泡病细胞弱毒疫苗试制试用

猪传染性水泡病在我国流行至今没能彻底控制。根据农林部提出用组织培养法生产疫苗的科研任务,我们在学习推广上海龙华四系鼠化弱毒疫苗的基础上,1974年底开展用国外引进的IB-RS-2猪肾传代细胞制取龙华毒细胞弱毒苗的研究。两年来,通过一系列试验,在北京郊区试用,1975年和甘肃省兽药厂协作,在大生产条件下,取得用大转瓶旋转培养试制     

猪血管内皮细胞体外生长特性的研究

试验以体外分离培养的猪血管内皮细胞为材料 ,研究了细胞的生长曲线、不同基础培养基对细胞生长的影响及胰岛素在生长液中的适宜含量。结果表明 ,传代猪血管内皮细胞接种后有1d左右的滞留期 ,然后细胞进入对数生长期 ,可持续 2d ,第 5d进入平台期 ,第 8d细胞开始脱落死亡 ;与MEM相比 ,M 199更适合于用作培养猪血管内皮细胞的基础培养基 ;在不用贴附基质和内皮细胞生长因子 (ECGF)的条件下 ,生长液中加入胰岛素 ,可明显促进细胞的生长和增殖 ,胰岛素的最适用量为 8μg/mL。     

猪传染性胃肠炎病毒在ST细胞中增殖规律的研究

通过孔板培养系统以及微载体和转瓶培养系统,研究了感染复数(MOI)、病毒感染时间(TOI)和病毒维持液对细胞生长和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)繁殖的影响。结果表明,MOI影响细胞生长速率和单位细胞病毒产量,TOI影响细胞对病毒的敏感程度以及胞内病毒的增殖速率;丰富的维生素、氨基酸等物质有利于病毒效价的提高;采用微载体和生物反应器系统生产TGEV,病毒效价可达11.3lgTCID50/0.2mL,比方瓶培养系统提高约100倍。     

食醋在畜禽养殖中的应用

食醋味酸 ,性温、微苦咸 ,有下气消胀、和胃助消化、散淤消肿排毒之功效。现代医学认为醋含丰富的有机酸、游离氨基酸及维生素等多种营养物质 ,具有调味、助消化、补营养、杀菌、消炎、解毒等作用 ,用于畜禽生产和疾病防治效果甚佳。提高生产性能　牛 :每日给乳牛喂用苹果汁酿制的醋 5 0ｍＬ ,可提高产奶量 12 %左右 ;给肉用牛每日喂 5 0— 80ｍＬ醋 ,增肉率可提高 11.9% ;母牛产后 1月不发情时用 10 0ｍＬ醋加水至 10 0 0ｍＬ早晚 2次供牛饮用 ,连用 10ｄ即可发情。猪 :猪喜欢吃带酸味饲料 ,每 1ｋｇ饲料中加 5— 10ｍＬ醋 ,能提高采食量、…     

卫可和泛福露益消毒剂抗猪瘟病毒试验

卫可 (Ｖｉｒｋｏｎ’ｓ)和泛福露益 (Ｆａｒｍｆｌｕｉｄ’ｓ)是英国生产的 2种兽用消毒剂 ,本试验仅在实验室条件下检测了其对猪瘟病毒的杀灭效果。1　试验材料1 .1　消毒剂卫可和泛福露益为Ａｎｔｅｃ产品 ,均由中国台湾省府泉实业有限公司提供。本试验按产品使用说明操作。1 .2　猪瘟兔化弱毒用农业部兰州生物药厂生产的猪瘟弱毒疫苗毒(Ｃ株 ) ,2 0倍稀释后用于本试验。1 .3　试验动物体重 2～ 3ｋｇ的健康兔 ,由中国农业科学院兰州兽医研究所实验动物场提供。1 .4　传代细胞和试剂ＰＫ 1 5细胞购自中国兽药监察所。培养细胞的营养液为…     

IBRS_2、BHK_(21)细胞在不同种牛血清中培养的生长状况

1983～1987年,我们采用不同种牛源血清培养和传代IBRS_2和BHK_(21)细胞20000多大转瓶,观察了在中间试生产(以下简称中试)条件下传代细胞的生长状况。 (一) 材料和方法 1.血清种类和来源:①奶犊牛血清:采自上海市、西宁市和兰州市奶牛场出生24～48小时的奶公犊;②小牦牛血清:采自甘肃天祝和甘南牧区2岁以内的小牦牛;③大牦牛血清:用天祝和青海省海南屠宰厂冬季屠宰牦牛放的血制备。