伊氏锥虫多因素致弱苗体液免疫及细胞免疫的相关性

伊氏锥虫多因素致弱苗体液免疫及细胞免疫的相关性刘俊华欧永春１）曹生福２）（解放军农牧大学军事兽医研究所长春１３００６２）锥虫病的免疫预防和免疫机理是国内外兽医界和医学界正在探讨和急待解决的难题，由于锥虫不断发生抗原变异和免疫抑制，使这项工作遇到了很大...     

伊氏锥虫同工酶的研究

本文对我国5株伊氏锥虫的5种同工酶进行了初步研究。应用琼脂糖凝胶电泳技术检测了5株伊氏锥虫的苹果酸脱氢酶(MDH)、L-苹果酸辅酶Ⅱ氧化还原酶(ME)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)、葡萄糖磷酸异构酶(GPI)和已糖激酶(HK)。5株伊氏锥虫的MDHME同工酶谱均相同,而G6PD、GPI和HK的同工酶谱显示出差别。分析表明,尽管某些同工酶谱存在着差异,但从总体水平分析,这些伊氏锥虫同工酶谱仍具有较高的相同性,属同源种群。     

伊氏锥虫体外培养的研究

用鼠体继代的水牛伊氏锥虫进行体外培养。经试验证实,以RPMI_(1640)加入20mmolHEPES、2mmol L-谷氨酰胺、2mmol L-苏氨酸、1.5mg/mlD-葡萄糖、0.5％水解乳蛋白(LH)及10％灭活犊牛血清组成的CM_3培养基,并以牛睾丸原代细胞为饲养层细胞效果最好,在37℃下可较好地支持伊氏锥虫的生长,接种虫体起始浓度为10~5/ml左右,可于第2天增至10~6/ml,并可维持该浓度达5天之久,从第6天开始,虫体逐渐减少,虫体可在该系统中存活14天,将培养12天的培养物接种小鼠,对小鼠致病性不变,同时还测定了HEPES、D-葡萄糖、培养不同时间的细胞单层、虫体不同接种浓度等对锥虫体外培养的影响。     

伊氏锥虫 布氏锥虫和马媾疫锥虫对锥46的药敏试验

在我国,伊氏锥虫病流行 极广,达二十多个省区,对畜牧业生产危害极大。长期以来,伊氏锥虫病的治疗主要依赖为数甚少的几种药物,导致抗药虫株的产生,从而给该病的防治带来新的困难(沈杰等,1991;方元等,1992),急待高效新药产生。为了解决这一问题,上海家畜寄生虫病研究所与上海医药工业研究院合作,成功地合成、筛选了一种抗锥虫新药——雄46(T46)。确定伊氏锥虫对其的药敏性,为锥46的临床应用奠定合理的用药理论基础是十分必要的。本试验通过体内(小鼠治疗)和体外(人工培养)的方法检测了伊氏锥虫布氏锥虫和马媾疫锥虫对锥46的敏感性。     

伊氏锥虫诱导鼠免疫抑制试验的研究

锥虫免疫抑制研究最早是由Goodwin于1970年报道的,他利用绵羊红细胞作为抗原来检查兔、鼠感染布氏锥虫后所产生的免疫抑制,以后其它学者也相继在刚果锥虫和活跃锥虫上进行过研究,并对其机制也进行了探讨。到目前还未见到国内外关于伊氏锥虫免疫抑制的研究报道,因此本试验旨在初步探索是否伊氏锥虫感染亦对机体产生免疫抑制,锥虫感染时间与免疫抑制有何关系以及抗锥虫药物治疗后又对其免疫有何影响?从而为伊氏锥虫研究以及为提高诊断和疫苗效果提供科学依据。     

家畜伊氏锥虫多因素致弱苗免疫试验观察

用伊氏锥虫多因素致弱苗免疫小白鼠３０只，在免疫后３０，４５，６０ｄ各取１０只小白鼠攻虫，保护率依次为９／１０，８／１０，６／１０；３次空白对照小白鼠均于注锥虫后４～７ｄ死亡。免疫豚鼠３０只，在免疫后３０，６０，９０ｄ各取１０只豚鼠攻虫，保护率依次为１０／１０，９／１０，８／１０；３次空白对照豚鼠均于注锥虫后１７～２３ｄ死亡。免疫马９匹，在免疫后３０，６０，９０ｄ各取３匹马攻虫，均获３／３保护；继续观察至１１个月，免疫后攻虫马均正常，镜检阴性，动物试验阴性；３次空白对照马均在注锥虫后４５～５０ｄ死亡。     

分泌抗伊氏锥虫单克隆抗体杂交瘤株的建立

本试验以DEAE纤维柱层析法从感染小鼠血液中分离得纯净锥虫,再通过超声乳化,制备锥虫可溶性抗原,用其免疫BALB/c小鼠,再以此BALB/c小鼠脾细胞与SP_2/o骨髓瘤细胞融合,采用Dot-ELISA和间接ELISA法筛选出7株分泌针对伊氏锥虫的单克隆抗体的杂交瘤株(IH_(10)、AE_7、EB_6、BE_5、AG_(11)、BA_5、GB_6),实验结果表明,间接ELISA和Dot-ELISA符合率良好。分泌的7种克隆抗体有5株属于IgG_1,2株属于IgG_(2a);用阴性血清封闭试验及交互抑制试验证实7株单抗都是针对伊氏锥虫的,并证明是针对不同决定簇的。     

伊氏锥虫动基体DNA微环的克隆

把伊氏锥虫云南株动基体DNA微环重组于puc19质粒载体,转化入大肠杆菌JM103菌株,获得KDNA全微环克隆。用α-~(32)P-dATP经缺口翻译标记的重组质粒(PTK)能与伊氏锥虫及其KDNA杂交,而不与核DNA杂交。该质粒探针具有高度的敏感性,能检测出10pg的KDNA和100个锥虫体,是快速鉴定伊氏锥虫的理想工具。     

伊氏锥虫灭活苗对役牛的免疫效果观察

用从湖北当地水牛分离的伊氏锥虫制备伊氏锥虫灭活苗,在湖北省当阳市以10 mL/头剂量免疫接种役牛12 500头.免疫后1个月,随机抽取其中15头免疫牛,每头经皮下攻虫1×104条,仅有1头牛出现虫血症,保护率为99.33%(14/15).其余免疫牛中有22头出现虫血症,保护率为99.82%;免疫牛血清间接血凝效价为18～11280.药物预防组的12 407头牛中,有763头出现临床症状和虫血症,其中12头死亡,保护率为93.87%.     

伊氏锥虫PFR2蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

为了探究伊氏锥虫副鞭毛杆蛋白2(paraflagellar rod protein 2,PFR2)的分子特征和免疫特征,利用PCR扩增伊氏锥虫PFR2基因,将扩增产物插入p QE-80L载体,经原核表达后,将纯化后的重组蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体,利用Western-blot鉴定反应原性。结果表明,PFR2基因大小为1 803 bp,编码含601个氨基酸残基的蛋白质,SDS-PAGE电泳显示该蛋白大小约为66 ku,主要以包涵体的形式表达。用间接ELISA方法检测小鼠抗PFR2多克隆抗体的效价为1∶25 600;Western-blot检测显示重组PFR2蛋白具有较好的反应原性。本研究为进一步研究伊氏锥虫PFR2蛋白的功能奠定了基础。     

用电泳法对七株伊氏锥虫蛋白酶的分析比较

用电泳法对七株伊氏锥虫蛋白酶的分析比较钟淑梅，周勇志，沈杰，郑韧坚，王云飞（中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所２００２３２）蛋白酶不仅在寄生虫致病方面是重要的，而且在免疫治疗、化学治疗和血清学诊断方面提供了潜在的靶标（Ｍｃｋｅｒｒｏｗ１９８９）。特...     

抗不同株伊氏锥虫排泄分泌抗原抗体的交叉反应

抗不同株伊氏锥虫排泄分泌抗原抗体的交叉反应谢超孙恩贵刘俊华王祥生（解放军农牧大学军事兽医研究所长春１３００６２）伊氏锥虫病免疫预防和免疫诊断一直是国内外学者非常重视的研究内容，但因为锥虫存在抗原变异现象，并对宿主造成免疫抑制，所以到目前为止尚无理想的...     

伊氏锥虫抗原变异型及其优势代表变异体的分离鉴定

以连续克隆分离的方法,从1株水牛伊氏锥虫中分离到40个克隆群体,从中分离鉴定出18个抗原变异型.经间接免疫荧光试验检测,发现其中2个抗原变异型(即HbTatl.18和HbTatl.15)分别能与约80%和60%克隆群体的血清发生较强的阳性反应,初步确定这2个抗原变异型为该虫株的优势代表变异体.这为伊氏锥虫免疫预防、免疫诊断、分子诊断以及遗传进化等的研究奠定了良好的基础.     

应用IHA检测实验感染伊氏锥虫山羊血清抗体的消长动态

早在1941年,印度的Kuppaswamy就通过研究认为山羊与牛都可以看作是伊氏锥虫的保虫宿主。本研究的目的是,应用间接血凝试验(IHA)来检测人工感染伊氏锥虫的山羊血液中抗体变化的规律,从而为山羊感染伊氏锥虫的血清学诊断提供必要的理论依据。     

马(骡)体内伊氏锥虫循环抗原与抗体的相互关系研究

本文利用抗伊氏锥虫表膜抗原的单克隆抗体ELISA双抗体夹心法,对健康、人工接虫及先用伊氏锥虫弱毒株免疫后用强毒株攻击马(骡)血清的循环抗原(CAg)进行了追踪检测,同时用常规ELISA法检测了相应的循环抗体(CAb),结果为:CAg与CAb不全呈平行关系;部分免疫马(骡)首次攻虫前CAg即可呈现阳性,CAb为阴性;免疫马(骡)攻虫后大多经1～3个CAg高峰而后健活,CAg逐渐转阴,CAb则上升较慢,上升后则一直维持在较高水平:人工接虫马(骡)接虫后经1～2个CAg高峰而死,濒死前4/5动物CAg呈现阳性,而CAb在濒死前只有1/5呈现阳性;人工接虫马(骡)的CAg水平高于免疫马(骡),二次攻虫后的CAg水平高于首次。     

鸡IB弱毒疫苗对鸡ND弱毒疫苗免疫干扰的试验观察

鸡ＩＢ弱毒疫苗对鸡ＮＤ弱毒疫苗免疫干扰的试验观察郑厚旌邓纪英１）张健林陈桂霞（河南农业大学牧医工程学院郑州４５０００２）据报道，应用鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）与新城疫病毒（ＮＤＶ）分别先后接种ＳＰＦ鸡胚，两种病毒之间存在干扰现象，被干扰的ＮＤＶ毒...     

鸡传染性腔上囊病超强毒致弱株疫苗的研制

以国内分离的鸡传染性腔上囊超强毒(vvIBDV)G株的致弱株Gt为种毒研制疫苗,实验室免疫效力试验和安全性试验表明,该疫苗对雏鸡的最适免疫剂量为50万PFU/只,免疫后7 d开始产生抗体,14 d时抗体阳转率为100%,对强毒攻击的保护率为100%以500万PFU/只的剂量免疫雏鸡,不引起腔上囊病的临床症状和病理变化,对雏鸡安全可靠;现地应用证明,对肉用鸡免疫一次可保护至其出栏.     

不同日龄雏鸡免疫新城疫病毒弱毒疫苗后体液免疫和黏膜免疫反应的变化规律

采用新城疫LaSota弱毒株疫苗经滴鼻、点眼途径免疫不同日龄雏鸡,然后采集血清、泪液和鼻洗脱液,应用血凝抑制试验(HI)和间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对抗原特异性IgM、IgG和IgA或SIgA抗体水平的消长规律进行检测。结果显示,血清中IgG抗体水平最高,IgA和IgM抗体水平相对较低。免疫组血清HI效价明显高于空白对照组血清HI效价。泪液和鼻洗脱液中新城疫病毒(NDV)特异性IgM出现的最早,于免疫后第4天可检测到,并于第7天达到高峰,而后迅速下降;而NDV特异性IgG、SIgA于免疫后第7天可检测到,并于第21天达到较高水平。13日龄免疫组总抗体水平分别高于6日龄免疫组和3日龄免疫组总抗体水平,但是1日龄免疫组不能诱导呼吸道黏膜产生抗体。研究结果表明,泪液、鼻洗脱液中抗体和血清中抗体均存在日龄相关性变化的特点,为雏鸡出壳后免疫机制的研究和更有效控制新城疫的发生提供了试验依据。     

猪流行性腹泻弱毒疫苗的研究

用从广州地区流行性腹泻病猪分离并适应到Ｖｅｒｏ等传代细胞的猪流行性腹泻病毒（ＰＥＤＶ）Ｇ１强毒株，通过Ｖｅｒｏ、ｐＫ１５、ＳＴ细胞株的连续传代，证明第７２代毒已被致弱。用８３代毒（Ｐ８３）对吃初乳前的小猪以８～１０ｍｌ剂量口服连续传５代，每代都从接种猪小肠取样接种细胞进行培养鉴定，并于增殖后作为次代接种材料，结果５代毒均未引起小猪发病，证实该代次毒株的安全、稳定，达到了常规弱毒疫苗株要求的标准。用Ｐ８３制成弱毒疫苗，对２２头８～１０日龄小猪进行免疾效力试验，１４头口服免疫，８头颈肌注射免疫，剂量均为２ｍｌ／头。免疫后２１ｄ以最小发病量（即原毒液的１：１２稀释液）及原毒液的２倍、４倍和８倍的稀释液经口进行强毒攻击，对照组１２头也以相对剂量同时攻击。结果免疫组仅口服免疫、经大于最小强毒攻击量６倍剂量攻击组中１头（１／２）有一过性轻微腹泻，发病不到２４ｈ即恢复。对照组的１２头中有１０头典型发病，严重腹泻，并有寒颤等症状，病程长达３～６ｄ，７ｄ后腹泻症状消失，但体况明显削瘦。试验证明Ｐ８３制备的弱毒疫苗的总免疫效力达９４．６％，表明Ｐ８３已具备弱毒疫苗株的要求。     

鸡球虫三价弱毒疫苗对鸡的免疫效果研究

将100只3日龄罗曼雏鸡随机分成空白对照组、攻虫对照组、Ⅰ组(1个免疫剂量)、Ⅱ组(2个免疫剂量)和Ⅲ组(0.5个免疫剂量)共5个试验组,每组20只鸡,对研制的鸡球虫三价弱毒疫苗的安全性和免疫效果进行初步评价。结果,各组的相对增重率依次为100.0%、86.8%、81.8%、89.2%和89.7%;攻虫后第10 d剖检所有鸡,各组肠道病变记分依次为0、2.7、2.2、2.3和2.6;免疫期间,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的OPG值依次为5.7×106、6.7×106和7.3×106;攻虫期间,攻虫对照组的OPG值为12.3×106,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的OPG值依次为7.2×106、8.5×106和9.0×106。攻虫后各组的死亡率依次为0、5%、0、10%和0;各组的抗球虫指数依次为200.0、115.8、135.8、140.2和143.7。结果表明,该三价弱毒疫苗抗柔嫩艾美球虫的效果并不理想,还需要进一步改进和完善。