牛接种副结核病弱毒苗对禽型结核菌素变态反应的影响

副结核病是对牛危害较 严重的一种慢性传染病。由于该病的感染极为隐蔽,经过又漫长,因此所造成的损失相当严重。在无结核病而有副结核病的牛群,对新生犊牛接种副结核病弱毒苗是防制该病的有效方法,但接种副结核病弱毒苗能引起牛对结核菌素敏感,出现禽型结核菌素皮内变态反应阳转,而禽型结核菌素皮内变态反应又是诊断无症状的副结核病牛的一种方法。因此,揭示牛接种副结核病弱毒苗后对禽型结核菌素变态反应的规律,对该病的兔疫监     

副结核菌苗接种牛和结核病牛对副结核菌素及结核菌素的变态反应

由于牛分枝杆菌和副结核分枝杆菌之间存在着类属变态反应原,所以给由这两种病原所引起的疾病的诊断造成了困难。为了解决副结核注苗牛和结核病牛的鉴别诊断问题,我们采用副结核菌素、结核菌素做了以下对比试验。 (一)材料和方法 1.实验动物: (1)结核病牛:选自沈阳市某结核病牛隔离场的109头结核病牛。 (2)副结核菌苗接种牛:选自鞍山市某牧场曾用吉林省兽研所研制的牛副结核热灭活菌     

羊副结核病诊断方法的研究

羊副结核病是由副结核分枝杆菌引起的一种慢性传染病。流行于澳大利亚、美国、英国等养羊业发达的国家。我国在东北三省、内蒙古、四川等省(区)都有报道。病羊常无腹泻,有核桃样软便,只是消瘦,背毛粗糙容易拔掉,通常被误认为是寄生虫病所致,而忽视副结核病,使羊群潜在感染,蒙受较大经济损失。本病的诊断方法有:皮内变态反应、补体结合反应、琼脂扩散反应等。现将皮内变态反应和补体结合反应试验结果初步报告如下:     

牛结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白的原核表达及其在牛结核病检测中的应用

采用重组PCR技术从牛结核分枝杆菌AN5基因组DNA中扩增CFP10-ESAT6融合基因,并将其定向克隆至原核表达载体pET-32a,构建了原核表达质粒pET-CFP10/ESAT6.重组子经酶切及测序鉴定后转化至大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后经SDS-PAGE电泳鉴定,获得约42 ku带有6×His蛋白标签的rHIS-CFP10/ESAT6融合蛋白,表达量约占菌体总蛋白的40%.用HIS蛋白纯化柱纯化该蛋白,Western-blot分析显示,该融合蛋白能与抗牛结核分枝杆菌阳性血清发生特异性反应.将重组的该融合蛋白用于刺激单次皮内变态反应阳性牛全血,可以产生高水平的IFN-γ,其特异性优于结核菌素.结果表明,获得的重组融合蛋白rHIS-CFP10/ESAT6为牛结核病的诊断奠定了基础.     

用间接血凝法诊断奶牛结核病

结核病是人畜共患的一种慢性传染病。常规的诊断方法是结核菌素变态反应,此法在检疫中应用最广,准确性亦较高,而且有较明显的型的特异性,但费时费力,非特异性反应因素很多。为了进一步探讨对奶牛结核检疫的新方法,我们于1985年8月间以变态反应为依据,用间接血凝法(IHA)对30头阳性和阴性奶牛进行了比较试验。 (一)材料和方法 1.抗原:牛型结核菌素(由广州动检所提供)。 2.被检血清:采自韶关市奶牛场,结核菌素试验阳性奶牛血清26头份,阴性奶牛血清4头份,置于56℃水浴中灭活30分钟,供试验用。     

白唇鹿结核病变态反应试验

为了验证变态反应诊断白唇鹿结核病的可靠性 ,笔者于2 0 0 1年秋季用牛型结核菌素在一群白唇鹿中进行了结核菌素变态反应试验 ,结合临床检查、病理剖检进行了对比分析。1　材料与方法1.1　试剂和药品　牛型提纯结核菌素 ,系中牧实业股份有限公司生产 ,干粉制剂 ,批号 2 0 0 10 1,临用前用生理盐水稀释 ,当日内使用 ;保定用麻醉药、催醒药分别为鹿眠宁和速醒灵 ,均系解放军军需大学兽医研究所生产。1.2　受检动物　为青海省海北地区某鹿场的 117头白唇鹿。该鹿场除有白唇鹿外 ,还有梅花鹿、马鹿和牦牛、藏系羊等。1.3　试验方法1.3 .1　鹿的…     

穴位注射治疗奶牛结核病271例的报告

1977年7月至12月和1979年5月至11月间,我们用结核菌素皮内注射和点眼相结合的判定方法,对云南中甸地区23个牛场和436户社员家中的1605头奶牛进行检疫诊断,结果诊断出阳性结核病牛293头,占被检奶牛的18.25％。抽查两头阳性奶牛,进行病理剖检、细菌分离培养和动物接种,诊断为典型的结核病牛,是由牛型结核杆菌感染所致。我们采用链霉素、异烟肼针剂注射于苏气主、副穴内,结合口服中药白芨贝母散和西药异烟肼片,治疗271例,治愈率在90％以上。现介绍于后。     

以禽型提纯结核菌素诊断羊副结核病

我国对羊副结核病诊断尚未见报道。1978年中国兽药监察所研制成功的禽型提纯结核菌素(以下简称禽结素,PPD),用于羊副结核病诊断。该变态反应原与国外同类产品的效价相似,特异性高,非特异性反应小,而效价稳定,是较为理想的诊断液。我们于1982年对英国进口羊427只(其中林肯羊55只,边来羊244只,沙能奶山羊64只,土根堡奶山羊64只);河北围场屠宰场的健羊93只,共520只羊用禽结素PPD皮内变态反应、补体结合反应(CF)、病理组织学检查、细菌学检查,以及与副结素PPD(英、日)对比试验,得到满意结果。 (一)材料和方法 1.诊断液     

海南地区牛结核病调查

结核病是由结核杆菌引起的人、畜共患慢性传染病 ,牛结核病对牧区、城镇人民群众的健康有直接危害 ,摸清其发病情况是对该病进行防制的前提。青海省海南州自解放以来 ,从未进行过牲畜结核病调查。笔者从 1996年 6月开始 ,对贵南县茫拉乡和共和县次汗苏村的母黄牛、共和县恰卜恰镇的黑白花乳牛、同德县谷芒乡自然放牧的母牦牛进行了结核病检疫。结核菌素　牛型提纯结核菌素 (黑龙江省兽药厂生产 )批号960 2 ,每瓶按 10ｍＬ稀释 ,每 1ｍＬ含结核蛋白 0 .3ｍｇ。检测方法　皮内注射方法及点眼方法均按常规进行。判定标准　参照产品使用说明书。…     

牛副结核病的免疫学诊断与免疫病理形态学的关系

副结核病是反刍动物的一种以肠道慢性增生性炎症为特征的传染病。本病的生前诊断除了根据临床症状和粪便检菌外,主要检疫手段是靠免疫学诊断。目前使用较多的免疫学诊断方法是皮内变态反应、补体结合反应、间接血凝反应(以下简称变态、补结、血凝)和琼脂扩散反应等。为提高本病的检出率和控制本病流行,我们进行了免疫学诊断方法与免疫病理形态学的关系的研究。     

华南军警犬结核病调查

采用结核菌素皮内变态反应试验，对广东、广西两省（区）的军（警）犬进行了结核病调查。共检测９０只军（警）犬，其中广东５１只，广西３９只。共检出结核病阳性８例，总阳性率为８．８９％；广东检出５例，阳性率为９．８０％；广西检出３例，阳性率为７．６９％。     

牛布氏杆菌和副结核分枝杆菌双重PCR检测方法的建立

为快速检测牛布氏杆菌和副结核分枝杆菌,根据GenBank中的布氏杆菌OMP31基因序列(JF918757)及副结核分枝杆菌ISMav2基因序列(AF286339)设计、合成2对特异性引物,通过对PCR条件的优化,建立了快速鉴别检测牛布氏杆菌和副结核分枝杆菌的双重PCR方法。经对建立的方法进行特异性和敏感性试验,结果表明,分别扩增出602、246bp的特异性牛布氏杆菌和副结核分枝杆菌DNA目的条带,作为对照的双芽巴贝斯虫、大肠杆菌、沙门氏菌、弓形虫、链球菌、牛放线菌的DNA及其混合物均未扩增出任何条带。牛布氏杆菌与副结核分枝杆菌的最低检测限分别为1.92和2.51pg;牛肉样品中人工污染的牛布氏杆菌和副结核分枝杆菌的检测敏感性分别为6×104和7×104 CFU/mL。该双病原检测体系的成功建立为牛布氏杆菌病及副结核病的检测、鉴定和流行病学调查提供了有力的技术支持。     

牛分枝杆菌CFP-10基因的原核表达及其表达产物的变态反应原性的鉴定

以牛分枝杆菌基因组为模板,PCR扩增获得CFP-10基因,并连入pET-32a(+)载体,获得了重组质粒pET-32a-CFP-10。将重组质粒转入宿主菌大肠杆菌Rosetta,经IPTG诱导后,重组蛋白rCFP-10以可溶形式表达并被纯化,将rCFP-10在致敏豚鼠皮内做迟发型变态反应(DTH)检测,并以PPD作为阳性对照。结果显示,测得rCFP-10组豚鼠皮肤红斑直径平均值为10mm,接近于PPD组(13mm)。结果证明,以pET-32a(+)为载体进行原核表达,获得的重组蛋白rCFP-10依然具有较强的迟发型变态反应原性,同时也证明了CFP-10具有作为皮试诊断试剂抗原的潜力,这一结果为牛结核病新型DTH皮试诊断的研究奠定了基础。     

用斑点金免疫渗滤试验检测牛结核分枝杆菌IgG抗体

用牛结核分枝杆菌制备牛结核菌糖脂抗原 ,并固定在NC膜上 ,将牛IgG单克隆抗体与胶体金连接。通过临床检验 ,在结核菌素皮肤试验 99例阳性牛中 ,斑点金免疫渗滤试验阳性 60例 ;皮肤试验 13 9例阴性牛中 ,金标阴性 111例。该法简便快速 ,可作为皮肤试验的辅助试验     

以牛用结核菌素检验猕猴结核病

作者在1987年和1988年对新进猴群以牛用结核菌素行眼皮内注射检疫其结核病,经对249头猕猴的应用,证实此法简便易行,结果准确。 用法 用成都兽医生物药品厂出品的牛用结核菌素(每瓶20ml),检疫时将牛用结核菌素与注射用水以1∶3进行稀释,随用随配。不论猕猴性别、年龄,每猴在右跟上眼皮皮内注射0.1ml,如右眼有眼疾时,可在左眼进行,并作记录。注射完毕后24、48、72小时各观察1次,观察时要仔细看注射部位的变化,     

氯化钾浸出抗原进行牛结核ELISA的研究

作者用高浓度氯化钾自牛分枝杆菌(M.bovis)浸出细胞壁成分,通过ELISA方法证明其用作ELISA抗原有抗原活性,并比较了该浸出物与结核菌素(OT),超声粉碎茵体3种抗原的ELISA值。证明氯化钾浸出物的特异性优于超声粉碎菌体和OT。用氯化钾浸出物为抗原ELISA法检测了118头OT变态反应阳性牛和39头变态反应、病变、细菌学检查阳性牛及55头其它疾病牛血清OD位。结果表明,OT变态反应阳性牛与细菌学检查阴性牛及其它疾病牛OD值有显著差异(P<0.01)。     

牛分枝杆菌PPE68与Mb1230以及PPE57和PE-PGRS35的表达纯化及其在牛结核病血清学诊断中的初步应用

为筛选和评估牛分枝杆菌毒力菌株与卡介苗(BCG)基因差异区域(region ofdifferences,RD)蛋白在牛结核病诊断中的效果,本研究表达了牛分枝杆菌RD1区的PPE68、RD9区的Mb1230、R11区的PPE57和RD2区的PE-PGRS35,并纯化得到纯度大于90%的重组蛋白。通过优化条件建立了间接ELISA检测方法,并采用该方法检测了结核病阳性牛和健康牛血清中针对PPE68、Mb1230、PPE57和PE-PGRS35的IgM和IgG抗体水平,评价其在牛结核病血清学诊断中的潜力。结果显示,在结核病阳性牛中,针对PPE68、Mb1230、PPE57和PE-PGRS35的IgG抗体检出率分别为13.3%、43%、50%和30%,IgM抗体检出率分别为30%、10%、36%和33%。结果表明,R11区的PPE57和RD2区的PE-PGRS35有潜力作为牛结核病血清学检测的候选抗原,用于牛结核病的诊断。     

牛型提纯结核菌素与副结核菌素对供港育肥牛的皮内变态反应试验

我站于１９８７～１９８９年,采用牛型提纯结核菌素和提纯副结核菌素,对本地区的１５４１头供港育肥牛进行了结核病和副结核病的检查。结果,阉牛组结核病阳性率为８．６７％;副结核病阳性率为０．６８％。公牛组结核病阳性率为０．４６％;副结核病阳性率为０。经过对...     

消除副结核菌交叉反应机理的探讨

本试验用吸收处理、免疫转印技术分析了5种分枝杆菌抗血清:副结核阳性血清、牛型结核阳性血清、草分枝杆菌牛抗血清、堪萨斯分枝杆菌牛抗血清和偶发分枝杆菌牛抗血清经草分枝杆菌胞浆蛋白吸收处理前后与副结核菌P18株胞浆蛋白各组分抗体反应性的变化,以及副结核阳性血清经牛型结核菌全菌体、胞浆蛋白吸收处理前后抗体反应性的变化。其结果:草分枝杆菌胞浆蛋白的吸收处理可以在很大程度上消除或减弱因感染牛型结核菌、草分枝杆菌引起的交叉反应,而对消除或减弱偶发分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌的交叉反应的作用不理想,吸收前后,对副结核菌的抗体反应影响不大。与副结核菌有交叉反应的牛型结核菌抗原既存在于菌体表面,也存在于胞浆中,与25.4KD副结核菌胞浆蛋白分子有交叉反应的牛型结核菌抗原存在于胞浆中,24.6KD副结核菌胞浆蛋白抗原是副结核菌的特异性抗原。     

鸡结核病变态反应诊断方法的研究

鸡结核病系由禽结核杆菌引起的一种慢性传染病。鸡群一旦染患本病则能长期存在,且甚难根除。患鸡日渐消瘦,产蛋率下降,终至死亡。 关于禽结核病变态反应诊断方法的研究专著甚少。目前,国外进行变态反应诊断的判定时间是注射结核菌素后48小时,观察一次,注射侧肉髯肿胀为阳性,无变化者为阴性。我国规定的判定时间是注射结核菌素后48、72小时,观察两次,注射侧肉髯增厚、下垂、发热、呈弥漫性水肿者为阳性,肿胀不明显者为可疑,无变化者为阴性,两次可疑反应判为阳性。