动物轮状病毒病的研究进展

近几年来,各国医学工作者相继注意到轮状病毒(Rotavirus),也称类呼肠孤病毒因子(ReoviruslikeAgents)、环状病毒(Orbivirus)或双层病毒(Duovirus),是一组引起牛、猪、马、绵山羊、兔、鹿和鼠等多种动物的新生儿及其幼畜发生急性胃肠炎的重要病因,也是人婴幼儿急性胃肠炎的重要病因。已在上述患者的腹泻粪便中检出了轮状病毒。最近又有豚鼠血清学轮状病毒感染的报道。实验研究已证明轮状病毒能引起其自然宿主的急性胃肠炎,而且有些还能使自然宿主外的其它畜种感染发病。此外,曾从南非小猴的直     

牦犊牛流行性腹泻病原的调查

流行性腹泻是山丹马场牦犊牛发病最多、危害最重的疾病之一。应用酶联免疫吸附试验和常规细菌检验方法,对采自本场区的106份腹泻粪便进行检查,检出致病病原物95份,阳性率90％(95/106)。95份阳性病原物中单独大肠杆菌、单独轮状病毒、大肠杆菌和轮状病毒混合感染率分别为44％(42/95)、19％(18/95)、37％(35/95)。用聚丙烯酰胺凝胶电泳对轮状病毒进行核酸电泳分析,查出不同于牛NCDV标准株的三种类型的电泳型。电镜观察呈典型轮状病毒结构。调查初步揭示:山丹场区牦犊牛流行性腹泻是由大肠杆菌、轮状病毒单独或混合感染所引起。     

用酶免疫检测仔猪轮状病毒感染

轮状病毒 (Ｒｏｔａｖｉｒｕｓ)是引起各种幼龄动物腹泻的主要病原之一。从 1975年Ｗｏｏｄｅ等首次分离出猪轮状病毒后 ,一些国家均有轮状病毒引起仔猪腹泻的报道。在我国仔猪腹泻已成为某些猪场的常发病 ,严重影响着养猪业的发展。为了查明仔猪轮状病毒的感染情况 ,笔者在 2 0 0 1年春 ,用轮状病毒抗原酶免疫测定 (ｅｎｚｙｍｅｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ ,ＥＩＡ )诊断试剂盒 ,对湖北省某大型猪场仔猪轮状病毒感染情况进行了检测。1　材料1.1　粪样采集及处理　采自湖北省某猪场腹泻仔猪 2 0 8头。其方法是用消毒棉签插入腹泻仔猪的直肠内采…     

羔羊轮状病毒RNA电泳型的研究

轮状病毒是引起初生羔羊急性传染性腹泻的主要病原之一,1981年我们从乌兰县的初生羔羊腹泻粪便中分离到本病毒,并在原代犊牛肾细胞上培养获得成功。用这种病羔的粪便和组织培养物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,测出羔羊轮状病毒的核酸基因组是由11个片段组成。目前国内外通过这一途径研究人和牛的轮状病毒RNA基因组成,已做了许多工作,但羔羊轮状病毒RNA基因片段的分析研究尚未见报道。聚丙烯酰胺凝胶电泳由丙烯酰胺单体和交联剂甲叉双丙烯酰胺在催化剂的作用下,聚合成三维网状结构的大分子凝胶,胶体颗粒在电场作用下,向着带相反电荷的电极移动,将样品中的各种核酸分子向下迁移,经染色显现出核     

伪狂犬病病毒和猪圆环病毒2型混合人工感染仔猪排毒的检测

为了解伪狂犬病病毒(PRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)感染仔猪后不同时间点的病毒载量及排毒规律,将34头健康仔猪分为4组,第1~3组分别为人工接种PRV、PCV2和PRV+PCV2组,第4组为空白对照组。分别在接种后第3、7、14、21、35天采集试验仔猪的鼻拭子和肛门拭子,用Taq Man荧光定量PCR(q PCR)对其进行定量检测,并分析仔猪排毒的变化规律。结果,接种后第3天,3个试验组仔猪肛门拭子、鼻拭子中均分离到PRV或PCV2;其中PRV单独感染后的病毒载量在第14天达到峰值331.67 copies/L;PCV2单独感染后的病毒载量在第3天达到峰值10 742.01 copies/L;PRV+PCV2混合感染后鼻拭子和肛门拭子的PRV分别在第14天和第7天达峰值980.96 copies/L和2 230.056 copies/L;鼻拭子和肛门拭子PCV2在感染后第14天达到峰值69.413 copies/L和271.72 copies/L;混合感染仔猪于感染后第8~14天发生死亡。3个感染组之间无论是肛门拭子还是鼻拭子,PRV、PCV2病毒载量均差异显著(P0.05)。上述结果表明,PRV单独感染、PCV2单独感染和二者混合感染均对仔猪造成严重危害,除引起仔猪发病死亡外,这2种病毒均能通过呼吸道和消化道向外排毒。     

羔羊轮状病毒高免血清对犊牛轮状病毒性腹泻的保护性试验

1985～1991年青海省西宁市廿里铺园艺场畜牧一队初生黑白花犊牛发生一种以腹泻为主要特征的疾病,随机取粪样应用聚丙烯酰胺凝胶电泳法确诊病原为犊牛轮状病毒,感染率为33.33％,试用抗体效价1∶64～128的羔轮状病毒(RV)高免血清对37头药物治疗无效的腹泻犊牛进行保护性试验,结果病犊牛获得全部保护。(一)材料与方法1.材料:(1)试验材料:从该场畜牧一队采集犊牛腹泻粪便9份,-50℃保存备用。(2)羔羊RV高免血清:由青海省畜牧兽医科学院羔羊病课题组制备。     

用羊血清IgG制剂防治新生羔羊腹泻试验

免疫球蛋白G(以下简称IgG)对多种细菌和病毒有抑制和中和的作用,还能固定补体从而杀伤细菌。产后立即给新生羔羊输入IgG,可补充其从初乳中吸收IgG量的不足,这对羔羊生后最初几周内的生命活动是重要的(王克恭,1987)。我们于1987～1988年在南北疆(农一师四团、农五师八十七团)两个试验点的19个羊群,口服,注射羊血清IgG防治羔羊腹泻,获得极佳效果,羔羊成活率达95.9％～96％;并于1988～1990年在农5师87团面上推广应用,在母羊群数和母羊数基本上均未增加的情况下,与推广应用本技术前的1987年比较,取得了净增羔羊7497只(其价值人民币32万余元)的     

轮状病毒弱毒疫苗田间效力试验

1981年,我们在乌兰县从剖检3～7日龄下痢羔羊采集肠道及其内容物,进行细胞培养分离,获得了引起初生羔羊腹泻的轮状病毒,后经犊牛肾初代细胞培养高代次低温致弱,获得了轮状病毒弱毒株,用于制备弱毒疫苗。1988～1989年,用该疫苗在乌兰县赛什克乡进行田间效力试验,取得了较好效果。(-)材料     

粘膜病

粘膜病(Mucosal Disease)又称牛病毒性腹泻、病毒腹泻—粘膜病复合症。是一种急性、亚急性或无临床表现的接触传染病,以高热、腹泻、厌食、鼻漏、白细胞减少及口腔、食道、前胃、皱胃和肠道粘膜糜烂为特征。多数病畜的临床表现不明显,在畜群中血清阳性率可达60～73％。病原为病毒。主要感染牛,绵羊能发生亚临床感染,鹿有自然发病的报道。 历史和分布     

羔羊腹泻病原轮状病毒的电镜观察

我们从拉萨市当雄、林周、达政县采集病羔粪样,经ELISA法检出的轮状病毒阳性粪样,回归初生羔羊腹泻成功;用人工复制病羔粪样提取物,接种羔羊肾细胞,产生CPE;任选人工复制的羔羊粪样和肾细胞培养物,在中国科学院上海生物化学研究所制成悬滴负染标本,进行电子显微镜观察,见到了典型的轮状病毒粒子。这是首次发现羔羊轮状病毒性腹泻存在于西藏高原,轮状病毒是西藏羔羊腹泻的病原之一。     

猪轮状病毒腹泻病的诊断

笔者对贵阳市乌当区30头腹泻病猪进行了调查,认为仔猪从出生到断奶期间均可发病。猪感染后24小时后表现抑郁、厌食、不愿活动。以腹泻为主要特征,有时发生呕吐。粪便粘稠或呈灰白色的水样便,经3～7天后,由于脱水严重,体重可减轻30％,患猪死亡率为3％～8％。10～20日龄的仔猪症状较轻,4～8周龄的猪,特别是断奶猪症状较重,死亡率亦较高。通过用聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳(PAGE)、电镜观察检查仔猪白痢粪便,分别发现了特征性轮状病毒基因组条带和病毒粒子,证实轮状病毒是导致贵州省仔猪发生急性腹泻病的原因之一。     

狼体内犬细小病毒的分离

犬细小病毒 (Canineparvovirus ,CPV )最早在1978年分别从澳大利亚和加拿大患肠炎的病犬中分离获得。CPV可导致犬出血性腹泻和心肌炎 ,在幼犬中发病率和死亡率都很高。该病后来在美国、英国、法国、德国等国家相继发生 ,已经成为犬的一种重要传染病。我国也有该病的暴发流行 ,并已获得多株病毒。 2 0 0 3年 3月 ,北京市某野生动物园饲养的狼突然发病死亡 ,生前有腹泻症状 ,粪便潜血 ;尸体剖检可见出血性、坏死性肠炎 ,经实验室诊断 ,确诊其为犬细小病毒感染。1　材料与方法1.1　病料　分别采集病死狼的肠道、肝、肺、脾以及同群发病但未…     

ELISA检测拉萨黄牛的轮状病毒性腹泻

据1982～1983年在拉萨、日喀则和那曲三地(市)的6县10区的不完全统计,共产黄犊牛5432头,发生腹泻的有1343头(发病率为24.72％),死亡496头(致死率为36.93％)。1987年5～9月,我们在拉萨市城关区、达孜县和林周县采集发病黄犊牛粪样,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测,证实拉萨市黄牛存在轮状病毒性腹泻。     

猪四种病毒性腹泻病原多重PCR检测方法的建立及应用

分别以猪流行性腹泻病毒(PEDV)M基因、猪轮状病毒(Po RV)VP6基因、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N基因、猪源牛病毒性腹泻病毒(BVDV)Npro基因为靶基因,参照Gen Bank上登录的基因序列,利用DNAStar和Oligo7软件设计了4对引物。采用PCR分别扩增各病毒基因,并克隆至p MD18-T载体,获得4个阳性重组质粒。以重组质粒为模板,进行多重PCR方法的优化。特异性试验检测可分别扩增出相应的病毒基因片段;敏感性试验结果显示,检测PEDV、TGEV、Po RV及BVDV质粒的最低拷贝数分别为730copies/L、547 copies/L、6.47×103copies/L、705 copies/L。应用该方法对猪场44份猪腹泻样品进行检测,结果检出15份PEDV样品,3份TGEV样品,2份BVDV样品,其中PEDV与TGEV混合感染样品2份,TGEV与BVDV混合感染样品1份。随机抽取其中2份PEDV阳性样品进行病毒分离,病毒经细胞传3代以上PCR检测均为阳性,对PCR产物测序证实为PEDV。结果表明,本研究建立的多重PCR方法具有快速、简便、特异性强、敏感度高的特点,能够对PEDV、Po RV、TGEV和BVDV单个或混合感染的临床样品进行快速鉴别诊断。     

长江中下游地区规模化猪场猪繁殖障碍性疾病的病原学检测

应用PCR与RT-PCR方法,检测了127份来自于长江中下游地区7省市24个规模化猪场患繁殖障碍的病猪的病料,检测病原包括猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪细小病毒(PPV)及日本脑炎病毒(JEV).结果显示,在上述127份样品中,有10份样品为PRRSV单独感染,占检测样品数的7.87%,有54份样品为PRRSV与PPV混合感染,占样品总数的42.52%,有50份样品为PRRSV与PCV-2混合感染,占样品总数的39.37%;有15份样品为PRRSV与PRV混合感染,占样品总数的11.81%;有8份样品为PRRSV与JEV混合感染,阳性率为6.30%;有18份样品为PRRSV与CSFV混合感染,占样品总数的14.17%.提示,长江中下游地区规模化猪场的猪群普遍存在PRRSV与PPV、PCV-2、JEV及PRV的混合感染.     

用ABC-Dot-ELISA检测轮状病毒抗原与抗体

Hawkes等(1982)建立了斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)后,已有许多学者将其用于寄生虫、细菌、病毒的检测,认为比普通ELISA简单、特异、敏感、快速。70年代末建立的生物素亲和素酶联免疫吸附试验(ABC-ELI-SA),大大提高了ELISA的敏感性。我们结合两者之长,建立了生物素亲和素斑点酶联免疫吸附试验(ABC-Dot-ELISA),用于检测仔猪、羔羊及婴儿腹泻粪便中轮状病毒抗原及羊(山羊、绵羊)与人血清中的轮状病毒抗体,并同Dot-ELI-SA、ABC-ELISA及ELISA进行了比较。     

珍珠鸡病毒性腹泻的病原与防治

随着珍珠鸡集约化养殖业的发展，珍珠鸡腹泻已极为常见。由病毒引起的珍珠鸡腹泻，在临床上具有发病急、传播迅速和发病率高等特点。１引发珍珠鸡腹泻的常见病毒１．１呼肠孤病毒５～６日龄珍珠鸡即可感染该病毒。急性感染早期可引起５０．０％的幼龄珍珠鸡发病，死亡率可...     

牦牛腹泻病原—轮状病毒的调查

国内外研究资料表明,轮状病毒是引起小儿腹泻的主要病原,也是引起家畜腹泻的重要病原之一,特别是对新生犊牛和猪的感染更为重要,本实验为了解四川省阿坝自治州牦牛腹泻病原,于1985年5月在该地区采集腹泻牦牛的粪便标本,应用酶联免疫吸附试验(HLISA)、酶联免疫吸附试验阻断试验(ELISA阻断)、免疫电镜(IEM)和聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)进行检测轮状病毒的感染情况。     

广西猪瘟流行现状的调查分析

据对广西 13个发病猪场 (疫点 )猪瘟 (CSF)的流行病学调查分析 ,发现当地CSF流行以非典型为主 ,典型CSF同时存在 ,发病猪多在 3月龄以下且病程较长。母猪存在隐性感染 ,部分表现为繁殖障碍 ,一些临床健康猪存在着带毒问题。此外 ,从疑似CSF病料中扩增出牛病毒性腹泻病毒 (BVDV) ,表明广西猪群中存在着BVDV的感染。分子流行病学调查结果表明 ,猪瘟病毒 (CSFV )广西流行株的基因型较复杂 ,分布 2个基因群的 4个亚群 ,其亲缘关系与 2个传统毒株石门株 (Shimen)和兔化弱毒株 (HCLV)相距甚远 ,最高可达 2 0 .0 %,说明广西CSFV流行株存在着遗传多样性。     

A群猪轮状病毒胶体金免疫层析试纸条的研制

为建立一种快速、简便的猪轮状病毒检测方法,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的抗猪轮状病毒VP6蛋白单克隆抗体,在硝酸纤维素膜上喷加纯化的抗猪轮状病毒VP6蛋白多克隆抗体和羊抗鼠IgG,制成检测猪轮状病毒抗原的胶体金免疫层析试纸条。结果表明,所制备的试纸条用于检测猪轮状病毒感染的MA104细胞培养物,在检测线处出现红色反应带,未感染病毒的细胞培养物在检测线处未出现反应条带,上述培养物在质控线处均出现红色反应条带;进一步试验表明,试纸条检出病毒培养液(TCID50是10-6.25/0.1 mL)的最低限为1∶32稀释;用不同批次的试纸条重复检测,结果无差异;该试纸条不与相关的腹泻病毒猪传染性胃肠炎病毒、流行性腹泻病毒发生反应,所制备的试纸条具有一定的敏感性和特异性,重复性良好。