应用RNA干扰技术对猪蛔虫性别相关基因功能的初步研究

针对编码猪蛔虫雌虫卵巢蛋白基因的EST序列设计了1对特异引物及连接T7启动子的引物,经PCR扩增,获得5′端连有T7启动子的双链DNA,在RNA聚合酶的作用下,转录合成dsRNA。通过浸泡的方式将dsRNA导入秀丽新杆线虫中,在浸泡后的5个不同的时间点,采用RT-PCR检测虫体浸泡后靶基因被干扰的效果。试验结果表明,在浸泡后的8~29 h能检测到同源靶标的存在;而在浸泡后的43~57 h不能检测到靶标RNA。另外,试验组没有观测到虫体明显的表型变化,而对照组在浸泡28 h后,发现部分线虫体内有发育成形的虫卵。初步认为导入虫体的dsRNA发生了干扰效应。     

去掉卵丘细胞或切开卵透明带对小鼠体外受精的影响

探讨了去掉小鼠卵子的卵丘细胞和人工切开透明带对小鼠体外受精的影响.结果表明,与卵丘卵母细胞复合体相比,用透明质酸酶去掉卵子的卵丘细胞后的体外受精率显著降低(分别为56%和12%-23%);当人工切开部分透明带后,卵子的体外受精率增至56%-87%(P＜0.01);与细胞质均质的卵子相比,细胞质不均卵子即使切开透明带也仅有19%-22%的卵子受精.结果表明,用透明质酸酶去掉小鼠卵子的卵丘细胞后,选择细胞均质的卵子并人工切开透明带,可提高小鼠的体外受精率.     

卵丘细胞对小鼠卵母细胞体外成熟及其后续发育的影响

观察了卵丘细胞共培养对小鼠生发泡期部分裸露(PNO)和裸卵(NO)成熟和发育能力的影响;分别用小鼠、大鼠、猪的卵丘细胞与小鼠PNO和NO进行了共培养。检测了小鼠PNO和NO的减数分裂能力、生发泡构型、受精和胚胎发育能力。结果,PNO、NO的减数分裂能力显著(P<0.05)低于卵丘完整复合体(COCs)的减数分裂能力。COCs中SN型卵母细胞比率显著高于PNO和NO中SN型卵母细胞比率(P<0.05),大部分PNO和NO的卵母细胞核型为NSN型。与对照组相比,与小鼠或大鼠卵丘细胞共培养的小鼠PNO和NO的减数分裂能力没有显著提高,但是与猪卵丘细胞共培养却可以提高小鼠PNO和NO的减数分裂能力。结果表明,猪卵丘细胞能促进小鼠卵母细胞的体外成熟,但并不影响小鼠卵母细胞的受精和胚胎发育。     

冬虫夏草菌丝水提液对SP2/0细胞凋亡的影响

在冬虫夏草菌丝水提液诱导下,采用Hoechst33342荧光染色、MTT、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪等方法,观察和分析了SP2/0细胞的凋亡情况。结果显示,冬虫夏草菌丝水提液可抑制SP2/0细胞增殖,在荧光显微镜下,凋亡细胞呈亮绿色,DNA琼脂糖电泳可见典型的“阶梯状”条带,Annexin-V-FITC和碘化丙啶(PI)双染后流式细胞仪分析显示,细胞凋亡数量明显增多。表明,冬虫夏草菌丝水提液对SP2/0细胞增殖的抑制作用可能与诱导其凋亡有关。     

丝胶对地中海水牛精液冷冻保存效果的影响研究

精液冷冻保存过程中精子易受氧化应激影响而导致解冻后精液品质下降。丝胶具有良好的抗氧化能力,在精液稀释液中添加丝胶可有效抑制活性氧积累导致的脂质过氧化,减缓精子氧化应激。为了解添加丝胶对地中海水牛精液冷冻保存效果的影响,本研究在冷冻稀释液中添加不同浓度（0、0.25%、0.5%、1%）的丝胶,进行精液冷冻保存。检测冻后精子活力、质膜完整性、顶体完整性及精浆中谷胱甘肽过氧化酶（GSH-Px）、总抗氧化能力（T-AOC）和丙二醛（MDA）水平。结果表明,与未处理组相比,添加0.5%丝胶可提高地中海水牛冻后精子活力、质膜完整性、顶体完整性、GSH-Px酶活性、T-AOC水平（P<0.05）,MDA含量显著降低（P<0.05）。0.25%和1%丝胶添加组精子冻后活力、质量参数和抗氧化能力无显著性影响（P>0.05）。稀释液中添加0.5%丝胶时,冻后精子抗冻标志物HSP70蛋白表达水平极显著高于未添加组（P<0.01）。结果表明,在精液稀释液中加入0.5%丝胶可提高精液的抗氧化能力,使精子免受氧化应激损伤,有效改善地中海水牛精液冷冻后的品质。     

不同培养液对牛孤雌生殖胚胎和体细胞核移植胚胎体外发育的影响

采用体外成熟的牛卵母细胞 ,经 5 μmol/LIonomycin 5min和 2mmol/L 6 DMAP 5 μg/mLCCB 4h激活 ,分别在TALP M 199(TM ,1∶2 )、BMOC M 199(BM ,1∶2 )和CR1aa培养液内培养 ,2 4h和 3 6h各组卵母细胞的卵裂率分别为5 6.4%、5 5 .6%、5 3 .6%和 72 .0 %、75 .9%、79.0 % ,无显著差异 (P >0 .0 5 ) ;培养 8d后囊胚发育率分别为 18.2 %、2 1.4%和 2 9.3 % ,CR1aa内培养孤雌生殖胚的囊胚发育率显著高于TM (P <0 .0 1)。皮肤成纤维细胞构建的重组胚经同法激活后 ,分别在TM、BM和CR1aa内培养 ,2 4h和 3 6hBM和CR1aa内重组胚的卵裂率显著高于TM (4 9.7%、49.8%比 2 0 .5 % ;74.1%、73 .2 %比 5 0 .0 % ) (P <0 .0 1) ;虽然培养 8d后各组胚胎的囊胚发育率无显著差异 ,但CR1aa内重组胚的囊胚发育率稍高 (12 .3 %比 9.8%、11.5 % )。结果表明 ,CR1aa更适合孤雌生殖和体细胞核移植胚胎的体外培养。     

不同抗蠕虫措施对高山细毛羊羊毛生长速度和净毛率的影响

选３０只甘肃高山细毛羊，随机分为３组，分别作丙硫苯咪唑常规驱虫、投放丙硫苯咪唑控制释放胶囊和对照，用以观察不同抗蠕虫措施对羊毛生长速度和净毛率的影响。试验结果，常规驱虫组在夏季和秋初羊毛生长速度较对照组快。控制释放胶囊组除秋末和冬初外，其他季节羊毛生长速度均快于常规驱虫组和对照组；在六段时间中，毛的平均生长速度最高，分别比常规驱虫组和对照组每日多产毛０．６３ｇ和０．５０ｇ；净毛率达５４．２５％，分别比常规驱虫组和对照纽提高６．５３％和４．６７％     

早期断奶应激对仔猪影响的研究——对生长体重行为和发病率的影响

早期断奶应激（ＥＷＳ）对仔猪的生长、体重、行为和发病率均产生较大影响，给养猪业生产造成重大损失。试验分为２组进行观察，Ⅰ组为２８日龄断奶仔猪９８头，Ⅱ组为３５日龄断奶仔猪９６头。断奶后第１ｄ，平均每头日增重分别为１０和３０ｇ；第１０ｄ分别为１１３和１２８ｇ；第２０ｄ分别为４２２和４７７ｇ。早期断奶应激使仔猪昼夜行为发生改变，兴奋、追逐和争斗时间显著增加，休息时间减少。断奶前１ｄ，平均休息时间占７０．８４％，活动时间占２０．８３％，采食时间占８．３３％；断奶后第１ｄ分别为２５．００％，６２．５８％和１２．５０％；断奶后第５ｄ分别为５０．００％，３９．５８％和１０．４２％；断奶后第１０ｄ逐渐趋于正常。早期断奶后使仔猪应激性疾病的发病率增加，平均总发病率为７３．１９％，死亡率为８．２５％。其中腹泻发病率为４９．４８％，死亡率为５．１２％；水肿的发病率为２．５８％，死亡率为２．５８％；咬尾咬耳综合征和僵猪综合征发病率分别为１７．５３％和３．６０％，死亡率为０～０．５％。     

干奶期不同能量摄入对围产期乳牛血液葡萄糖胰高血糖素和胰岛素浓度的影响

将围产期健康乳牛30头随机分为3组,分别于产前第28 d开始饲喂标准日粮(能量摄入100％组)、标准日粮增加20％的日粮(能量摄入120％组)和标准日粮减少20％的日粮(能量摄入80％组),产后各组乳牛均饲喂标准泌乳日粮,至产后第56 d结束,观察干奶期不同能量摄入水平对围产期健康乳牛血液葡萄糖、胰高血糖素和胰岛素浓度的影响。结果表明,产前低能饲喂可以增加围产期乳牛血浆葡萄糖浓度,干奶期不同能量摄入水平对围产期健康乳牛血液葡萄糖、胰高血糖素和胰岛素浓度起重要调节作用。     

不同硒添加剂对仔猪生长肝脱碘酶Ⅰ活性和血清甲状腺激素水平的影响

将 2 34头杜×长×大断奶仔猪分为 13组 ,分别以纳米硒和亚硒酸钠 2种硒源 ,0 .1、0 .2、0 .3、0 .4、0 .5、1.0mg/kg 6个硒水平添加到基础日粮中 ,研究了纳米硒和亚硒酸钠对仔猪生长、肝脱碘酶Ⅰ活性和血清甲状腺激素的影响。结果显示 :亚硒酸钠硒水平 0 .1mg/kg组仔猪的生长性能趋于平台 ,0 .3～ 1.0mg/kg组仔猪的生长性能随着硒添加浓度的增加而下降 ,1.0mg/kg组仔猪的生长性能显著低于 0 .2～ 0 .4mg/kg组仔猪。纳米硒水平 1.0mg/kg组仔猪的生长性能保持在高峰平台。硒添加浓度为 0 .1～ 0 .3mg/kg时 ,亚硒酸钠和纳米硒对仔猪生长性能的影响无显著差异 (P >0 .0 5 ) ;硒添加浓度为 0 .4～ 1.0mg/kg时 ,纳米硒组仔猪生长性能显著高于亚硒酸钠组 (P <0 .0 5 )。硒添加浓度为 0 .1～ 0 .2mg/kg时 ,两种硒源对脱碘酶Ⅰ活性、血清T3、T4 的影响无显著差异 (P >0 .0 5 ) ;硒添加浓度为 0 .3～ 1.0mg/kg时 ,纳米硒组脱碘酶Ⅰ活性和血清T3水平显著高于亚硒酸钠组 (P <0 .0 5 ) ,血清T4 水平显著低于亚硒酸钠组 (P <0 .0 5 )。纳米硒的Weinberg剂量 效应的最适剂量范围宽于亚硒酸钠。     

产毒素多杀巴氏杆菌在猪萎缩性鼻炎病因中的作用研究——支气管败血波氏杆菌和产毒素多杀巴氏杆菌混合感染方式对猪萎缩性鼻炎发生的影响

本试验结果证明,仔猪实验感染支气管败血波氏杆菌(Bb)后再接触感染产毒素多杀巴氏杆菌(Pm);或自然感染Bb后再实验感染产毒素Pm;或实验感染产毒素Pm后再接触感染Bb,均可产生严重的鼻甲骨萎缩和临床症状。