应用mtDNA COI基因序列鉴别常见嗜尸性蝇类种属

目的探讨mtDNA基因序列对常见嗜尸性蝇类的种属鉴别应用价值。方法收集不同区域2科4属6个种30个蝇类样本,提取样本线粒体DNA后扩增COI基因序列,以琼脂糖电泳检测扩增产物并测序,以DNAMAN6.0分析软件分别截取498bp序列,用MEGA5.2软件分别进行序列分析,然后构建系统发育树,比较各地区不同种属样本的序列差异。结果 6个种属的嗜尸性蝇类30个样本mtDNA的COI基因具有一定的序列差异,种内进化分歧均数在0.1%~1.6%之间,种间进化分歧均数在2.2%~11.2%之间,6个种属通过系统发育树均可明确区分。结论 COI基因序列分析和系统发育树对嗜尸性蝇类的种属检验具有重要帮助作用,可用于现场样本的准确、快速种属鉴定。     

NCBI数据库在常见嗜尸性蝇类种属鉴别中的应用

目的探讨NCBI数据库比对分析对常见嗜尸性蝇类种属鉴别中的应用价值。方法收集2009年1月至2012年12月重庆市常见嗜尸性蝇类不同发育历期2科5属7种样本52份,采用Chelex100法提取mtDNA,利用2对引物扩增细胞色素C氧化酶辅酶I基因,分别截取498bp和841bp相同长度的序列,采用MEGA软件计算种内及种间进化分歧情况,并分别在NCBI数据库进行序列BLAST搜索种属同源性比对分析。结果所得序列种内进化分歧均数在0%~0.7%之间,种间进化分歧均数在7.5%~16.1%之间;7个种属的样本序列I和序列II分别有5个和6个种属完全比对正确,样本总体的正确率分别达到96.15%和98.08%,Max ident值均在97%以上。结论采用序列同源性比对分析,并借助NCBI数据库强大的检索分析功能,可准确进行常见嗜尸性蝇类的种属鉴定,为法医学死亡时间推断提供重要参考依据。     

NCBI数据库在常见嗜尸性蝇类种属鉴别中的应用

目的探讨NCBI数据库比对分析对常见嗜尸性蝇类种属鉴别中的应用价值。方法收集2009年1月至2012年12月重庆市常见嗜尸性蝇类不同发育历期2科5属7种样本52份,采用Chelexl00法提取mtDNA,利用2对引物扩增细胞色素C氧化酶辅酶I基因,分别截取498bp和841bp相同长度的序列,采用MEGA软件计算种内及种间进化分歧情况,并分别在NCBI数据库进行序列BLAST搜索种属同源性比对分析。结果所得序列种内进化分歧均数在0％～0．7％之间,种问进化分歧均数在7．5％～16．1％之间;7个种属的样本序列Ⅰ和序列Ⅱ分别有5个和6个种属完全比对正确,样本总体的正确率分别达到96．15％和98．08％,Maxident值均在97％以上。结论采用序列同源性比对分析,并借助NCBI数据库强大的检索分析功能,可准确进行常见嗜尸性蝇类的种属鉴定,为法医学死亡时间推断提供重要参考依据。     

嗜尸性蝇类种属鉴定研究进展

死亡时间(postmortem interval,PMI)推断一直是困扰法医学工作者的难题之一,尤其是荒郊野外或偏僻屋内的高度腐败尸体更是难以使用常规手段推断PMI,因此常需要借助现场中的昆虫证据来推断.不同种属的蝇类发育时间差异较大,在实际案件中,如果不进行种属鉴定而直接测量蝇蛆体长、计算积温或演替阶段,或是基于错误...     

高分辨率熔解曲线检测常见嗜尸性丽蝇

目的 建立高分辨率熔解曲线（HRM）鉴定常见嗜尸性丽蝇的检测方法,以期为嗜尸性蝇类的分子鉴定提供依据和技术支持。方法 收集洛阳地区常见嗜尸性丽蝇标本26只,经形态学鉴定后,提取腿部DNA,基于COI基因进行PCR-HRM检测,对所得HRM图谱和解链温度（Tm）数据进行分析和统计,DNA测序以验证HRM检测结果。结果 根据熔解曲线形状和解链温度可将本研究中的26只嗜尸性丽蝇归属于5属8种,与形态学鉴定、DNA测序结果完全一致。结论 基于COI片段的HRM技术是一种便捷有效的检测方法,可用于嗜尸性蝇类的快速鉴定。     

利用COI序列序列鉴定常见嗜尸性蝇种

目的 检测嗜尸性蝇类线粒体DNA(mtDNA)细胞色素氧化酶辅酶Ⅰ(COI)中278bp序列,鉴定蝇科3属5种嗜尸性蝇,解决其形态学种类鉴定的难题,为死亡时间推断提供技术支持.方法 从15省、市(地区)室外草地家兔尸体上采集蝇科3属5种共计18个蝇类成蝇样本,提取mtDNA进行PCR扩增,序列测定且上传GENBANK,...     

贵阳地区常见尸食性蝇类mtDNA分子标记的检测

目的应用mt DNA中COI(348bp)、COII(637bp)及16Sr DNA(513bp)基因序列鉴定贵阳地区常见尸食性蝇类的种属。方法收集贵阳地区常见尸食性蝇类标本,经形态学分类鉴定后提取胸肌DNA,扩增COI(348bp)、COII(637bp)及16Sr DNA(513bp)基因片段,测序后用DNAMAN 4.0序列分析软件进行序列拼接,NCBI中的BLAST、MEGA 5.2软件包对所得序列分析建立种内及种间进化分歧率,并构建系统发育树。结果 COI种间平均进化分歧率为12.55%,种间范围在3.0%~18.6%,种内范围在0%~0.7%;COII种间平均进化分歧率为13.73%,种间范围在5.3%~21.6%,种内范围在0%~0.6%;16Sr DNA种间平均进化分歧率为4.54%,种间范围在0.4%~7.6%,种内范围在0%~0.4%。结论 COI、COII及16Sr DNA可用于尸食性蝇类的种属鉴定,该方法可作为传统分类方法的补充手段。     

潍坊地区六种常见嗜尸性蝇类mtDNA COI区序列研究

目的解决蝇类成虫、蛹和蛆快速、准确鉴定的难题。方法随机采集潍坊地区人尸周围环境中的蝇类成虫、蛹和蛆,提取其mtDNA,经PCR扩增、产物检测与纯化、测序等,比较其序列差异。结果六种常见嗜尸性蝇类相互之间序列差异明显,同一种蝇的成虫、幼虫、蛹之间未见差异。结论mtDNACOI区序列分析可作为法医学嗜尸性蝇类种属鉴别的可靠方法。     

利用嗜尸性蝇类辅助推断死亡时间1例

<正>1案例资料1.1简要案情某年4月28日,某村民放羊时发现1具高度腐败的女尸。尸体位于一山坡上,呈右侧仰卧位,周围未见明显搏斗痕迹,其旁发现"敌敌畏"空农药瓶1个及白瓷碗1个。尸体头面部周围见大量死亡的成蝇,其衣物下见少量空蛹壳。     

提取CO Ⅰ基因片段鉴定嗜尸性蝇类

目的通过扩增蝇类COⅠ基因片段,结合形态学特征鉴定嗜尸性蝇类的种类。方法运用改良平衡酚—tris饱和酚法提取蝇类DNA,进行COⅠ序列扩增和测序,与数据库序列进行比对和分析。结果改良平衡酚—tris饱和酚提取DNA方法可获得有效的蝇类DNA,并可应用于COⅠ基因片段扩增,进而进行蝇类种类的鉴定。结论平衡酚—Tris饱和酚法提取的噬尸性蝇类虫体DNA作为模板,用于COⅠ序列扩增,测序后与数据库目的序列分析比对,可准确鉴定嗜尸性蝇类的种类;和传统的昆虫形态学特征鉴定方法比较,该体系更准确,应用范围更广。     

洛阳地区5种嗜尸性麻蝇分子鉴定研究

目的应用经典DNA条形码和28S r RNA基因鉴定洛阳地区5种常见嗜尸性麻蝇种属,评价其在常见嗜尸性麻蝇种属鉴定中应用的可行性。方法收集洛阳地区常见嗜尸性麻蝇类标本18只,经形态学分类鉴定后,Chelex-100法提取足部DNA,扩增并测序线粒体细胞色素C氧化酶亚基I(COI)和28S核糖体核糖核酸(28S r RNA)基因片段,BLAST比对后,与来自DNA条形码数据库(Barcode of Life Data,BOLD)的中国和韩国地区20条相应蝇种序列进行比对,用MEGA 7.0软件整理分析所得序列,计算碱基组成、种内及种间进化分歧率,并构建系统发育树。结果形态学鉴定18只嗜尸性麻蝇归于3属5种。每个样本获得COI和28S r RNA的扩增长度分别为646bp和721bp。在线BLAST比对结果显示样本COI序列相似度99%以上,邻近法构建发育树Bootstrap值为1 000,5种麻蝇可以较好聚类,与形态学鉴定结果一致。38个样本COI种内范围为0~0.022,棕尾别麻蝇、酱亚麻蝇和急钩(亚)麻蝇种间范围在0.057~0.090;赤尾麻蝇和红尾粪麻蝇种间范围在0~0.086。5种麻蝇的28S r RNA序列发育树显示,棕尾别麻蝇和急钩(亚)麻蝇明显各自聚类,其余3种成一类。结论对于本研究中的5种嗜尸性麻蝇,基于COI基因的DNA条形码可以有效区分棕尾别麻蝇、酱亚麻蝇和急钩(亚)麻蝇,28S r RNA基因只可以区分棕尾别麻蝇,二者可作为形态学鉴定之外的重要方法补充。     

四种常见尸食性蝇类活动与产卵习性

目的　明确常见尸食性昆虫成虫的活动习性和产卵习性 ,为法医实践中死后间隔时间的判断提供借鉴 ;　方法　在自然温度、室内恒温及包括夜晚、雨天等 2 6种不同环境条件对丝光绿蝇、大头金蝇、巨尾阿利蝇、棕尾别麻蝇成虫活动与产卵 (产仔 )习性进行了观察 ;　结果　昆虫成虫的活动与产卵习性在不同环境条件下往往不同 ,不同种类之间也存在差异 ,在利用昆虫发生规律为法医实践提供死亡时间等信息时 ,应具体问题具体分析。     

利用嗜尸性蝇类生活史推测死亡时间

目的积累一些嗜尸性蝇类生活史的资料及群落组成的季节性变动规律。方法采用动物尸体作诱饵,分别对自然飞到诱饵上繁殖生长的8种嗜尸性蝇类的生活史及群落组成的季节性变动规律进行观察研究。结果夏季高温时段蝇类群落组成物种较为丰富,冬季低温时段蝇类种群较为单一。常见8种嗜尸性蝇类虫态经历时间在气温高时较短,气温低时较长。结论嗜尸性蝇类生活史及群落组成的季节性变动规律可为推测死亡时间提供依据。     

四季尸食性蝇类参与尸体软组织分解过程初探

目的观察了解四季尸食性蝇类参与尸体软组织分解过程的规律。方法在室外自然环境中设置尸体,分别在春、夏、秋、冬季节,用肉眼观察尸体每一时段的变化及尸食性蝇类参与尸体分解的现象。结果在4个不同的季节中,尸体软组织分解过程中尸食性蝇类参与种类及虫态各不相同。通过观察获得尸体变化各阶段的大体历期,尸体变化各阶段常见的尸食性蝇种及虫态资料。结论观察所得资料可为推测晚期尸体的死亡时间提供参考。     

青岛地区常见嗜尸性蝇种及其季节性分布研究

目的观察青岛地区嗜尸性蝇种季节性演替规律,为死亡时间推断提供参考。方法在室外设立田间观察场所,2012年4月1日开始至2013年4月1日,每月第1天6时放置猪尸,20min后开始观察,至18时,期间每小时观察1次;第3天以后,分别于7时、12时、18时各观察1次。观察时记录尸体上出现的昆虫种类、虫态、数量并采集相应标本,进行分类鉴定。结果可以观察到有嗜尸性蝇类侵袭尸体的月份为4月至11月,共发现3科23种蝇类,其中丝光绿蝇、大头金蝇和亮绿蝇数量位列前三,分别占全部观察数量的40.71%、31.95%和7.12%。丝光绿蝇、大头金蝇中午时段出现的数量显著多于早上和傍晚。一年中各种蝇类在中午出现的数量均多于早上及晚上。4月上旬,蝇类早、晚与中午出现的数量相差显著;而在7、8月份差别较小。大部分嗜尸性蝇种集中在新鲜期和肿胀期。结论本文观察数据可为利用嗜尸性蝇类演替规律进行法医学死亡时间推断,以及建立地区嗜尸性蝇种类数据提供参考。     

利用16S rDNA序列鉴定常见嗜尸性蝇类种属

目的通过分析16S rDNA 551bp基因序列,鉴定常见嗜尸性蝇类种属。方法随机采集17个地区放置于室外草地的家兔尸体上7个种24只嗜尸性苍蝇样本,经形态学鉴定种类后,提取胸肌DNA,对16S rDNA 551bp基因片段进行PCR扩增,产物纯化、测序后上传GenBank;利用MEGA 4.0软件构建序列间的系统发育树,分析建立种内及种间进化分歧表。结果 24只样本16S rDNA序列分析显示7种蝇类可以较好聚类;其中棕尾别麻蝇种内进化分歧整体均数为2.8%,家蝇为1.5%,丽蝇科的5个种均在0.7%以内。上述7个蝇种的种间进化分歧均数在1.6%～7.1%之间。其中,棕尾别麻蝇、家蝇与其它蝇类的种间分歧均数在4.0%～7.1%之间。结论本文分析结果显示,蝇种间同源性相差明显,采用mtDNA 16S rDNA中551bp基因序列分析,可进行蝇种鉴定。