犊牛腹泻大肠杆菌O_(15)菌蜕的制备及免疫原性研究

为了制备犊牛腹泻大肠杆菌O_(15)菌株菌蜕并研究其免疫原性,克隆噬菌体phiX174裂解基因E,并构建温控溶菌表达载体。制备HBTN3菌蜕,并研究其免疫原性。结果显示:成功构建了温控溶菌表达载体pBVE,并制备了HBTN3菌蜕。最大细菌裂解率是99.87%,剩余的活菌被冷冻干燥并失活。安全性试验结果证实是安全的。用扫描电子显微镜观察到菌蜕的形态完整且内容物排出。小鼠接种菌蜕会产生良好的免疫反应和保护,保护率为80%。该研究结果为防控犊牛腹泻大肠杆菌疾病奠定了基础。     

黄犊牛腹泻症的研究(简报)

1981年起,安徽省淮河以北24个县市及河南省部分地区的黄犊牛,普遍发生了以排出白色、灰白色、黄白色水样或粥状软粪为主症的腹泻症,发病率高达77.12～87.50％。1985～1987年,对该病流行病学、临床学、病理学及病因学等进行了调查和试验研究。据研究初步结果认为,轮状病毒为主要病因,饲料缺硒是重要触发因素。对70例犊牛用牛丙种球蛋白     

大肠杆菌K_(99)遗传工程活疫苗对绵羊的安全性及免疫原性试验研究

用大肠杆菌K_(99)遗传工程活疫苗,按100亿活菌/只剂量于产前6周给149只妊娠杂交绵羊皮下接种,有28.86％的羊只出现临床反应,但所有免疫母羊均正常分娩,其所产羔羊均发育正常。对免疫母羊所产羔羊(66只)吮吸初乳后,给口服250亿强毒菌攻击,死亡率为4.55％,其发生腹泻持续期平均为1.78天,排菌持续期平均为2.94天。与未免疫对照组比较,差异极显著。本试验初步证明该疫苗对绵羊的安全性与免疫原性良好.     

预防犊牛大肠杆菌腹泻双价基因工程菌毛苗应用的研究

用大肠杆菌Ｋ_９９、Ｆ_４１基因工程菌毛苗对１５００头怀孕母牛皮下注射菌毛苗５ｍｇ／头，局部和全身均无任何不良反应，未造成母牛流产、早产及犊牛畸形，无任何毒副作用。对菌毛苗主动免疫的怀孕母牛所产犊牛吃初乳后用强毒Ｋ_９９、Ｆ_４１大肠杆菌攻击，保护率达９０％，证明该菌毛苗具有较强的Ｋ_９９和Ｆ_４１免疫原性，可使犊牛获得确实的被动免疫。在５个牛场对１４８０头犊牛进行菌毛苗免疫效果观察，未免疫对照组腹泻发病率为５７．４％～７６．２％，免疫后降至４．２％～５．６５％；未免疫对照组腹泻死亡率为４．３％～４５．２％，免疫后仅为０～１．０４％。试验结果表明，该菌毛苗能有效地预防犊牛大肠杆菌腹泻的发生。     

大肠埃希氏菌O_(128)∶K_(67)株引起幼犬腹泻的诊治

1999年 3月 ,当地某犬养殖场 3月龄幼犬先后出现以食欲不振、锐减或废绝及呕吐、粪便糊状带血为特征的疾病 ,经流行病学调查和实验室检验 ,确诊为大肠埃希氏菌Ｏ12 8∶Ｋ67感染。1　发病情况该养殖场共饲养 3月龄幼犬 14只 ,1999年 3月幼犬陆续发病 ,病初幼犬精神沉郁 ,低头垂耳 ,被毛粗乱逆立 ,食欲减退 ,呕吐 ,排灰黄色稀粪 ;发病 2— 3ｄ后病犬粪便多为粘液或呈糊状带血 ,病犬眼球下陷 ,极度沉郁。2　细菌分离与鉴定2 .1　培养2 .1.1　无菌取带血犬粪 ,直接划线分别接种于麦康凯琼脂平板、普通琼脂平板、伊红 美蓝琼脂平板和血琼脂平板 …     

疣状毛癣菌免疫原性的研究

本研究以疣状毛癣菌LTV菌株制成活菌湿苗、活菌冻干苗、灭活冻干苗及其代谢产物冻干菌,给犊牛进行肌肉注射免疫接种。活菌湿苗免疫4头牛,结果4/4保护,而湿苗对照组2/17保护;活菌冻干苗免疫7头牛,结果5/7保护;灭活冻干苗免疫7头牛,6/7保护;代谢产物冻干苗免疫5头,0/5保护;冻干苗对照组0/7保护。其结果证明,疣状毛癣茵(Trichophytonverrucosum)菌体对牛具有良好的免疫原性。     

致病性大肠杆菌O_(157):H_7基因分型的研究进展

就目前的大肠杆菌O157:H7基因分型方法进行了综述,将其归纳为3类:基于DNA的限制性酶切技术、基于特异靶标的PCR扩增技术、基于基因组特定位点的DNA多态性分析技术,阐述和分析了这些技术所涉及的方法和技术特点。认为,大肠杆菌O157:H7具有重要的公共卫生学意义,开展流行病学调查和病原溯源追踪是防控大肠杆菌病的重要手段,而基因分型是大肠杆菌O157:H7鉴定和示踪的重要技术。     

抗鸡致病性大肠埃希氏菌O_(88)单克隆抗体的研究

用纯化的鸡致病性大肠埃希氏菌O88 菌株( MG38e) 热灭活抗原免疫BALB/c 雌性小鼠,再用该菌株粗提的脂多糖尾静脉注射加强免疫后,取其脾细胞与SP2/0 细胞融合,经有限稀释法克隆,用间接ELISA 及凝集试验(IHT) 筛选,获得4 株能稳定分泌该菌株单克隆抗体的杂交瘤细胞。杂交瘤细胞培养液ELISA 和IHT 效价分别为1∶100 ～1∶1000 和3 log2 ～4 log2 ;腹水效价分别为1∶100 ～1∶4000 和4 log2 ～10 log2 。这4 种单克隆抗体( E1 、E2 、E3 、E4) 均能与鉴定的7 株O88菌株发生凝集反应,E4 株还能与O78菌株发生凝集反应。用单克隆抗体对分离的45 株鸡致病性大肠埃希氏菌进行血清型鉴定,结果5 株为O88 ,与用单因子血清鉴定的结果一致。     

预防仔猪大肠杆菌性腹泻K_(88)LTB遗传工程苗田间试验

从1985～1990年,笔者试用5批仔猪大肠杆菌K_(88)工程菌活苗在河南、陕西等地的12个猪场进行预防仔猪大肠杆菌性腹泻的免疫效力观察,并对其经济效益进行了测算,效果令人满意。     

预防仔猪大肠杆菌性腹泻K_(88)遗传工程菌苗免疫途径和剂量的研究

将61头怀孕母猪分成5个组,给第Ⅰ组皮下注射K_(88)遗传工程菌苗500亿死菌,第Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组分别口服1000亿、500亿和250亿活菌;第Ⅴ组不接种菌苗作为对照。结果各免疫组母猪所生仔猪的发病率明显下降,其中第Ⅲ组的免疫效果最佳。     

仔猪腹泻工程菌苗MM_4的安全性及免疫原性试验

MM_4是由军事医学科学院基础医学研究所用遗传工程技术研制成功的一种肠毒素性大肠杆菌(ETEC)菌苗,该苗通过我区两个种猪场的16窝152头仔猪的攻毒保护试验表明,预防新生仔猪腹泻(包括黄痢和白痢),减少仔猪死亡,效果好,无毒安全,使用方便。获得明显的经济效益。 (一)材料     

五株基因缺失的肠炎沙门菌免疫原性的研究

为了探讨ompR、spiA、rpoS、ompR-spiA、ompR-rpoS基因缺失株成为肠炎沙门菌减毒候选活疫苗的可能性,构建了3株rpoS、ompR-spiA、ompR-rpoS基因缺失株,通过口服方式把5株ompR、spiA、rpoS、ompR-spiA、ompR-rpoS基因缺失株接种BALB/c小鼠进行毒力测定和免疫保护性测定。结晶紫染色定量法显示,这5株基因缺失株生物被膜的形成能力显著降低;毒力测定显示,它们的半数致死量比野生株的高10 000倍,双基因缺失株的毒力更弱。血清抗体水平测定表明,各基因缺失株可诱导机体产生较高的IgG抗体,并于注射后第3周达到高峰;攻毒后ompR、spiA、rpoS、ompR-spiA和ompR-rpoS基因缺失株的免疫保护率分别为62.5%、50.0%、50.0%、50.0%和37.5%。结果表明,ompR基因缺失株可作为肠炎沙门菌减毒活疫苗的候选株。     

表达大肠杆菌耐热性肠毒素Ⅰ融合蛋白基因工程菌株的免疫原性研究

已构建的能表达大肠杆茵耐热性肠毒素１（ＳＴ＿１）－β－半乳糖苷酶融合蛋白基因工程菌株Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５ａ（ｐＸＳＴ＿１）经轧鼠灌胃试验证实没有毒性反应。采用超声波粉碎法裂解菌体，再辅以氢氧化铝胶制冬抗原，免疫接种ＢＡＬＢ／ｃ鼠，获得抗融合蛋白抗体，乳鼠灌胃中和试验结果表明，该抗体能中和天然ＳＴ＿１肠毒素活性，具有较好的免疫保护作用。以该菌株免疫的雌性ＥＡＬＢ／ｃ鼠产下的乳鼠吮吸初乳后，能够抵抗１个鼠活性单位ＳＴ＿１肠毒素的攻击。Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５ａ（ｐＸＳＴ＿１）工程菌株可作为预防大肠杆菌性腹泻基因工程菌苗的侯选菌株。     

大肠杆菌K_(88)抗原分子遗传学研究近况

1961年Φrskov等发现在一次猪腹泻流行中所分离的大肠杆菌含有一种新的K抗原,称K_(88)抗原。K_(88)抗原是一种粘附因子,它使K_(88)阳性菌株附着于肠壁上而不被机体清除。已知K_(88)是一种蛋白质,其基因位于质粒上。以往预防大肠杆菌性腹泻大多采用死菌苗,但效果不够满意,随着分子遗传学及DNA重组技术的迅速发展,可望应用基因工程技术来构建高效、稳定和安全的大肠杆菌苗。     

产肠毒素大肠杆菌K_(99)抗原纯化的研究

产肠毒素大肠杆菌K_99阳性菌株,在改良M培养基中于37℃振荡培养18～20小时,离心收集细菌,于4℃搅拌1小时使K_99纤毛(粘附抗原)从菌体上脱落,然后以差速离心去除菌体和大的细胞碎片。再以适当饱和度的硫酸铵沉淀纤毛抗原。最后经A—50离子交换柱层析纯化K-99纤毛蛋白质。纯化的K_99抗原在SDS聚丙酰胺凝胶电泳上呈现出一条蛋白带。以标准蛋白作标准曲线。测出其蛋白质亚单位分子量为18800,这与国外学者报导的18500的结果相符。纯化的K_99抗原在电镜下可见大量均质的柔软丝状的纤毛。K_99抗原是一个等电点为pH9.7的阳离子蛋白质,在我们做的pH8.6的琼脂糖电泳中其缓慢向阴极迁移。     

牛病毒性腹泻——粘膜病Oregon C_(24)V冻干弱毒疫苗对犊牛的安全性及免疫性试验

(一)材料 1.动物:黑白花和拉脱维亚犊公牛25头。最小的106日龄,最大的223日龄。购自河北省围场县种畜场和御道口牧场。试验前经一个月的临床观察和 3～30天的体温检测,体温正常,除80号牛外,其它24头牛鼻腔和眼睛曾反复出现过浆性或脓性分泌物。试验前三天,每天采血进行白血球计数,平均为8100～8900个/mm~3。其它未见异常。用病毒-血清中和试验方法,检测牛血清中的牛病毒性腹泻-粘膜病中和抗体,全部阴性。     

金黄色葡萄球菌336型多糖偶联抗原的制备及免疫原性

采用溶葡萄球菌酶消化菌体释放金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)336型多糖(Type 336polysaccharides,336PS),梯度乙醇浓度浸提和用不同酶消化进行粗提,通过凝胶过滤层析纯化得到了336PS多糖,并对其纯度进行检测。将336PS通过ADH间桥法与BSA连接制备偶联抗原,采用凝胶过滤层析纯化,200~400nm波长扫描鉴定,从层析波峰和检定波长判定偶联成功。加佐剂制备成疫苗免疫小鼠,进行抗体检测和小鼠免疫保护试验。结果表明,纯化的336PS纯度为685.1g/kg;偶联抗原波峰较BSA前移,其原最高吸收波峰为212nm,从206nm向280nm偏移。偶联抗原336PS-BSA可以刺激小鼠产生抗336PS的免疫应答反应,并能够对免疫小鼠提供免疫保护作用。     

宁夏羔羊腹泻的产肠毒性大肠杆菌的研究

1985～1988年,本试验从腹泻羔羊分离到大肠杆菌共95株,并对其中54株菌株做血清型鉴定,明确了分离菌株,其血清分属O_8,O_(101),O_(78),O_9四类O类型,其中O_8为主要O类型。采用MRHA反应和K_(99)单抗及F_(41)抗血清的直接凝集反应,鉴定出分离菌株表面携带有K_(99)或K_(99):F_(41)粘着素抗原。由此选出H_(8720)、H_(8724)、H_(8729)菌株,用乳鼠胃内投服试验和平板免疫溶血试验,测定出该3株菌具有产生热稳定性肠毒素的特性;且H_(8720)、H_(8724)、H_(8729)对实验动物和初生羔羊有致病作用。其它分离菌株皆能与6株菌株H_(8720)(O_8∶K_(99)∶F_(41))、H_(8724)(O_8∶K_(99)∶F_(41))、H_(8729)(O_9∶K_(99)∶F_(41))、BH_(871)(O_(101)∶K_(99)∶F_(41))、BH_(872)(O_(78)∶K_(99)∶F_(41))、Bj_(877)(O_(101)∶K_(99)∶F_(41))的抗血清发生强烈的凝集性和交叉性反应。上述结果均表明:自腹泻羔羊分离到的菌株是携带有共同抗原成份,即K_(99)或K_(99)∶F_(41)粘着素抗原的产肠毒素性大肠杆菌。     

羔羊大肠杆菌腹泻双价基因工程菌毛苗应用的研究

对２９１只怀孕母羊皮下注射菌毛苗０．５ｍｇ／只，其局部和全身均无任何不良反应，不会造成母羊流产、早产及羔羊畸形，进一步证明该菌毛苗安全性好。应用菌毛苗主动免疫的怀羔母羊所产羔羊通过吃初孔获得被动免疫，攻毒结果，保护率均在８０％以上，证明该苗具有较强的Ｋ＿（９９）和Ｆ＿（４１）免疫原性，可使羔羊获得确实的被动免疫，对羔羊的生长发育产生良好的影响。     

弓形虫病免疫的研究——自然弱毒株(QHO)免疫原性的观察

本文描述了弓形虫自然弱毒株(QHO)速殖子不经任何理化处理,以敏感模式动物小白鼠进行的适宜免疫剂量、有效免疫力产生的时间、适宜攻击剂量和免疫持续期等项试验。结果用QHO株10~1～10~5免疫剂量存活率分别为100％、70％、100％、90％、80％;免疫后第14天即可产生免疫力,免疫后的小鼠可经受10~1～10~4以上强毒攻击,保护率达90％以上,免疫后小鼠经120天以上持续期观察和抗体消长规律测定都可经受10~5大剂量强毒攻击,保护率达90％,抗体滴度一直维持在高滴度水平(滤纸IHA法1:32)。证实QHO株是一种典型的弱毒株,并具有较好的免疫原性和激发机体产生明显的免疫保护效应,是许多弓形虫(RH、GJS、M-7741、GT-1等株)所不能相媲的一种特异弱毒虫株。为进一步研究弓形虫的生物学特性和弱毒株虫苗提供了依据。