雏鸡实验性骨短粗症发病机理的研究

本实验采用1日龄罗曼肉鸡,随机分成三组。分别喂以Zn含量不同的半合成日粮,基础日粮以淀粉和蛋清为主。含锌量Ⅰ组为9ppm(缺锌纽)、Ⅱ组为24ppm、Ⅲ组为69ppm(对照组)。用光学显微镜观察生长鸡缺锌时股骨骺软骨的组织学变化。结果表明:Ⅰ组的原始软骨细胞层(即原发层,下同)极显著地薄于Ⅱ、Ⅲ组(P<0.01)(0.23、2.56、3.97μ),而肥大区显著地厚于Ⅱ、Ⅲ组(P<0.05)(31.03、18.79和11.29μ)。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组钙化区分别为9.71、8.69和7.65μ,骨化区厚度分别为18.23、77.96和108.61μ,Ⅰ组的骨化区显著地薄于Ⅱ、Ⅲ组(P<0.01)。三个组鸡股骨骺生长区总长分别为59.80、108.00和131.56μ。其结果证实:雏鸡锌缺乏时,原发层的细胞分裂受到抑制,肥大区软骨细胞的退行性变化受阻,进而影响矿化和成骨潜能的激活。致使雏鸡形成骨短粗症。     

唾液酸和糖胺多糖在鸡慢性氟中毒早期诊断中的意义

为探讨唾液酸(SA)、糖胺多糖(GAG)在鸡慢性氟中毒早期诊断中的意义,以期筛选出诊断慢性氟中毒早期的敏感指标,选用250只1日龄罗曼蛋鸡,随机分为5组,每组50只,饲喂相同的全价日粮.Ⅰ组为正常对照组,Ⅱ～Ⅴ组在日粮中添加不同水平的氟化钠,使日粮中氟含量分别为500、1000、1500和2000mg/kg,试验期为150 d,每隔30 d采集血样1次,测定血清中氟、SA、GAG的含量,观察试验鸡的临床表现.结果,试验成功地复制出不同程度的鸡慢性氟中毒模型;饲料中所加氟量与血清中氟含量呈明显的剂量-效应关系;氟中毒组鸡血清中SA含量均低于对照组,而血清中GAG含量则均高于对照组;血清中氟含量与SA含量呈显著的负相关(r=-0.773,P＜0.01),与GAG含量则呈显著的正相关(r=0.798,P＜0.01);各中毒组SA/GAG值与正常值相比降低30%以上.由此可见,氟中毒可明显影响机体内SA、GAG的代谢,血清中SA、GAG含量的变化可灵敏地反映氟对机体的损伤情况.可将SA/GAG值降低30%或更多作为鸡慢性氟中毒的敏感、可靠的早期诊断指标.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒感染对猪肺泡巨噬细胞产生Ⅰ型干扰素mRNA转录水平的影响

为探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)体外感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs)对其产生Ⅰ型干扰素mRNA转录水平的影响,从猪繁殖与呼吸综合征阴性的健康仔猪肺中分离和培养PAMs,随机将其分为正常对照组、PRRSV感染组和poly(I:C)处理组。于感染后第12、24、36、48、60小时分别收集细胞,运用半定量RT-PCR法检测PAMs产生Ⅰ型干扰素的mRNA转录情况。结果显示,与正常对照组和poly(I:C)处理组相比,PRRSV感染组中IFN-α/βmRNA转录水平在各时间段均显著下调。其中,PRRSV感染组中IFN-αmRNA的转录在感染后第12~36小时呈先升高后降低的趋势,在第48小时有所上调,但在感染后第60小时IFN-αmRNA的转录显著下调;而IFN-βmRNA的转录在感染后第12~24小时基本没有变化,在第36小时最低,在感染后第48小时有所上调,但在感染后第60小时IFN-βmRNA的转录显著下调。结果表明,PRRSV可导致PAMs产生Ⅰ型干扰素的mRNA转录水平降低,从而使宿主细胞及机体非特异性免疫功能受到抑制。     

五根散对缺血性脑损伤大鼠海马内去甲肾上腺素含量的影响

对 42只雌性成年大鼠施行双侧颈总动脉夹闭手术 ,建立缺血性脑损伤动物模型。喂藏药五根散治疗或喂水 (对照组 ) 5 0d后 ,用高效液相色谱仪检测各组大鼠海马组织中去甲肾上腺素 (NE)含量变化 ,对比观察了喂药组、喂水组和正常对照组之间NE含量的组间差异。结果表明 ,NE含量喂水组显著低于正常组 (P <0 .0 5 ) ;而喂药组却明显高于喂水组 (P <0 .0 5 ) ,NE含量回升接近正常水平。这些结果提示 ,五根散能加强和调节脑内单胺类神经递质代谢活动 ,使紊乱的代谢恢复正常 ,对脑组织有保护作用     

干扰素-γ对妊娠早期大鼠下丘脑中胰岛素样生长因子-Ⅰ表达及妊娠结局的影响

将妊娠9 d的大鼠随机分为对照组、试验1组、试验2组,采用生殖道肌肉注射的方法分别注射生理盐水、2.5×104U干扰素-γ(IFN-γ)、7.5×104U IFN-γ,采用免疫组织化学SP法研究IFN-γ对妊娠早期大鼠下丘脑中胰岛素样生长因子-Ⅰ的表达和妊娠结局的影响。结果显示,IGF-Ⅰ在下丘脑视前室周核、视上核、视前大细胞核、视前内侧核、视前外侧核均具有较多数量的阳性神经元表达;阳性细胞呈圆形、卵圆形、三角形,阳性物质大多位于细胞质和细胞核;生殖道肌肉注射IFN-γ后能下调IGF-Ⅰ在下丘脑的表达。同时,观察到试验2组妊娠大鼠子宫黏膜表面有大量紫褐色吸收斑。提示IFN-γ对妊娠早期大鼠IGF-Ⅰ在下丘脑的表达具有调节作用,且外源注射7.5×104U的IFN-γ后,会造成妊娠早期大鼠流产。     

马急性滑膜炎模型关节液中MMP-2和MMP-9质量浓度变化的研究

为探索基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在马急性滑膜炎模型中的作用,选用13匹蒙古马,将其随机分为试验组(n=8)和对照组(n=5)。在试验组马右侧腕关节内注入0.5ng/mL大肠杆菌脂多糖1mL,建立马滑膜炎模型;在对照组马右侧腕关节注射1mL磷酸盐缓冲液。注射后第0、8、24和168小时各采集关节液1次,用ELISA检测马关节液中MMP-2和MMP-9的质量浓度。结果显示,试验组马在注射后第8小时关节液中MMP-2、MMP-9质量浓度显著增加并达到最高,分别为18.05ng/mL±0.49ng/mL和19.64ng/mL±0.59ng/mL,与对照组比较差异显著。注射后第24小时MMP-2、MMP-9质量浓度下降,第168小时质量浓度恢复到对照组水平。结果表明,MMP-2和MMP-9在滑膜炎的急性期起到重要作用;MMP-2和MMP-9可以作为检测马滑膜炎的指标。     

SLT-Ⅱe对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌NO、ET-1、P-选凝素、sICAM-1及TNF-α的影响

为探索肠黏膜微血管内皮细胞在仔猪水肿病发生机制中的作用,将培养的肠黏膜微血管内皮细胞分为对照组、不同浓度SLT-Ⅱe处理组等5个组,采用ELISA法测定了培养3、6、9和12 h时细胞培养上清液中NO、ET-1、P-选凝素、sICAM-1及TNF-α浓度的变化.结果表明,1、10μg/mL SLT-Ⅱe诱导内皮细胞作用12 h时NO的分泌浓度是对照组NO分泌浓度的3倍.1 μg/mL SLT-Ⅱe作用12 h时ET-1、P-选凝素、sICAM-1及TNF-Ⅱ的浓度分别是相应对照组的4.6、2.8、2.8、1.8倍.由此可见,SLT-Ⅱe通过诱导肠黏膜微血管内皮细胞NO、ET-1、P-选凝素、sICAM-1及TNF-α的过量分泌,NO/ET-1比值下降,引起肠道微循环障碍,炎症反应,导致水肿病的发生.SLT-Ⅱe诱导大鼠肠黏膜微血管内皮细胞损伤的最佳模型剂量为1μg/mL.     

钙磷对体外培养SD大鼠破骨细胞生成和活化的影响

通过成骨细胞与脾细胞共培养,在体外诱导脾细胞转化为破骨细胞,转化过程中分别加入3、5mmol/L的钙或磷及不同比例的钙、磷,设不添加钙、磷因子对照。经形态学观察、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色计数、扫描电镜观察象牙片吸收陷窝研究钙、磷因子对大鼠破骨细胞生成和活化的影响。结果表明,培养液中钙、磷浓度分别为35、mmol/L时对破骨细胞的生成及活化均有显著抑制作用(P<0.05),5mmol/L Ca对破骨细胞生成活化的抑制与对照组差异极显著(P<0.01)。CCa∶CP=2∶1组对破骨细胞生成和活化的抑制作用最强。证实钙、磷通过抑制破骨细胞的生成和活化抑制破骨细胞的骨吸收活性。     

隆朋对大鼠不同脑区GABA及Gly含量的影响

为研究隆朋麻醉下大鼠不同脑区抑制性氨基酸类神经递质含量的变化,探讨隆朋中枢麻醉作用机制,将48只Wistar大鼠随机分成6组,分别为对照组、诱导组、麻醉组、恢复Ⅰ组、恢复Ⅱ组和恢复Ⅲ组。采用反向高效液相色谱法测定各脑区GABA和Gly的含量。结果显示,腹腔注射40mg/kg隆朋后,诱导组大鼠脑干、丘脑、大脑皮质内GABA和Gly的含量与对照组差异显著(P<0.05);麻醉组大鼠脑干、丘脑、大脑皮质内GABA的含量显著升高(P<0.01),脑干、丘脑内Gly的含量显著升高(P<0.01),而大脑皮质内Gly的含量显著降低(P<0.01);恢复Ⅱ组大鼠脑干、丘脑、大脑皮质内GABA和Gly的含量与对照组差异显著(P<0.05);恢复Ⅲ组上述各脑区GABA和Gly的含量均恢复显著(P<0.05);麻醉全程海马、小脑内GABA和Gly含量均无显著变化(P>0.05)。结果表明,隆朋对脑干、丘脑、大脑皮质GABA和Gly含量的影响,可能是其产生全麻作用的重要机制之一;隆朋的中枢麻醉作用,可能与升高大鼠脑干、丘脑、大脑皮质内GABA的含量和脑干、丘脑内Gly的含量,降低大脑皮质内Gly的含量有关。     

iNOS基因和VEGF基因在氟致甲状腺肿大鼠甲状腺组织中的表达

为探讨氟致甲状腺肿大的分子机理,选用4周龄SD大鼠饮用不同浓度的NaF水溶液,复制了氟中毒致大鼠甲状腺肿模型,光镜下观察了甲状腺的形态结构变化,并用RT-PCR技术检测了甲状腺组织中iNOS mRNA和VEGF mRNA的表达情况.结果,氟中毒大鼠甲状腺微血管明显扩张、增生,表现为明显的结节性甲状腺肿;与正常对照组大鼠相比,氟中毒组大鼠甲状腺组织中iNOS mRNA和VEGF mRNA的表达水平显著升高(P＜0.05).结果表明,长期摄入过量氟导致甲状腺发生结节性肿大的机理之一是,氟可刺激甲状腺中iNOS基因和VEGF基因的过量表达,进而造成甲状腺组织内微血管增生.     

牛磺酸对酒精性脂肪肝大鼠脂肪代谢的影响

采用白酒灌胃及饲喂高脂饲料的方法建立大鼠酒精性脂肪肝病模型,探讨牛磺酸对酒精脂肪肝病大鼠脂肪代谢的影响。将40只Wister大鼠随机分为对照组(10只)、模型组(10只)、预防组(10只)和治疗组(10只),试验周期共为16周。检测牛磺酸干预后大鼠血清中的总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三酯(TG)、甲状腺激素(T3、T4)的含量,制作大鼠肝组织切片,观察病理学变化,从而研究牛磺酸的药理学效应。结果表明,牛磺酸可以有效降低大鼠血清中TC、LDL-C、TG、T4含量,提高大鼠血清中HDL-C、T3含量;牛磺酸能够减轻肝的病理损伤程度,表现为牛磺酸干预后大鼠肝细胞脂肪变性数量明显减少,脂肪空泡变性程度明显减轻。     

虎杖苷对热应激大鼠空肠消化吸收、抗氧化和屏障功能的影响

为研究虎杖苷(PD)对热应激大鼠模型空肠消化吸收、抗氧化和肠屏障功能的影响,采用2×2设计,将24只雄性SD大鼠随机分为4组(n=6):室温处理+灌胃羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液组、室温处理+灌胃PD溶液组、热应激处理+灌胃CMC-Na溶液组、热应激处理+灌胃PD溶液组。热应激组每天40℃处理1.5 h,连续3 d。结果显示,在热处理后大鼠空肠绒毛高度、绒毛高度隐窝深度比值、蔗糖酶和麦芽糖酶活性下调。热处理还降低了空肠GSH含量和T-AOC活力;PD处理提高了GSH含量和SOD基因表达量,降低了GSH-PX活力。热处理降低了CLDN2基因表达量;PD处理增加了CLDN2、CLDN3、ZO-1基因表达量。热处理提高了空肠组织TLR4、NF-κB、TNF-α和SIRT1基因表达量及细胞因子IL-6、IL-10、TNF-α含量;PD处理提高了SIRT1基因表达量,降低了IL-10含量。结果表明,虎杖苷具有改善热应激大鼠肠道氧化应激和屏障损伤的积极作用。     

诱导型腹水综合征肉鸡心肌的病理变化与增殖

为探索诱导型腹水综合征肉鸡心脏的病理变化与心肌细胞增殖之间的关系,将20日龄白羽肉鸡分成对照组(静脉注射肝素钠生理盐水,n=30)和试验组(静脉注射含纤维素微粒的肝素钠生理盐水,n=90)。自注射纤维素微粒后,记录腹水综合征(AS)发病率,并于肉鸡42日龄时取样,测定右心室重量与全心室重量之比(mrv/mtv)、红细胞压积(PCV)以及血清中谷草转氨酶(AST)活性浓度和肌酸激酶(CK)活性浓度;右心室组织常规苏木精—伊红染色,并运用实时荧光定量PCR测定右心室组织PCNA和Ki-67的表达量。结果,与对照组相比,试验组肉鸡AS发病率、mrv/mtv值、PCV及血清中AST活性浓度和CK活性浓度显著增高(P0.01);试验组肉鸡的右心室明显扩张,心肌细胞出现水肿现象,但PCNA和Ki-67的m RNA表达量无明显变化。上述结果表明,诱导型腹水综合征肉鸡心脏产生了严重的病理变化,但心肌所产生的这种病变与细胞的增殖无关。     

大黄酸对SLT-Ⅱe诱导大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌细胞因子的影响

通过检测大黄酸对SLT-Ⅱe诱导的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、前列环素(PGI2)、血栓素A2(TXA2)、P-选凝素及可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)的浓度变化,以探索中药复方主要成分大黄酸对仔猪水肿病的疗效机制。将培养的肠黏膜微血管内皮细胞分为对照组、SLT-Ⅱe组、不同浓度大黄酸处理组等5个组,采用ELISA法测定了培养3、6、9和12h时细胞培养上清液中NO、ET-1、PGI2、TXA2、P-选凝素及sICAM-1浓度的变化。结果显示,5μg/mL大黄酸可显著下调SLT-Ⅱe诱导的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞NO、P-选凝素及sICAM-1的分泌,12h内使NO、P-选凝素及sICAM-1的分泌浓度接近正常水平,对ET-1的分泌也有一定的抑制作用;1、5、10μg/mL大黄酸不能下调SLT-Ⅱe诱导的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞PGI2和TXA2的分泌。表明,大黄酸通过抑制SLT-Ⅱe诱导肠黏膜微血管内皮细胞NO、ET-1、P-选凝素及sICAM-1的过量分泌,缓解肠道微循环障碍,减轻炎症反应,达到治疗水肿病的目的。     

猪凋亡细胞因子Fas、FasL、TNFRl和TNF-αSYBR Green Ⅰ real-time PCR检测方法的建立

分别针对猪凋亡细胞因子Fas、FasL、TNFR1、TNF-α基因以及看家基因β-actin的序列设计了1对特异性引物,构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测Fas、FasL、TNFR1、TNF-α及β-actin的SYBR Green Ⅰ real-time PCR方法.该方法线性关系好(r2≥0.995),敏感性高,初始模板的检出下限除TNFR1为1×102 copies/μL外,其他均为1×101 copies/μL;特异性强,扩增产物形成单一的特异性熔解峰;重复性好,组内与组间的变异系数均小于3%.应用所建立的方法对猪生殖与呼吸综合征病毒感染仔猪外周血单个核细胞中Fas、FasL、TNFRl和TNF-α mRNA的表达水平进行了检测.结果表明,建立的real-time PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好.     

啤酒酵母提取物对大鼠长期毒性试验

取啤酒酵母提取物按高剂量组(4.50 g/kg体重)、低剂量组(2.25 g/kg体重)对大鼠灌胃给药(分别为临床人用剂量的50和25倍),给药60 d后测试大鼠体重、血常规、生化及病理组织学观察.结果大鼠体重、血常规、血液生化、脏体比指标及病理组织变化均属正常,其中高、低剂量组红细胞、血红蛋白、总蛋白高于对照组且差异显著(P＜0.01,P＜0.05),停药15 d后其各项指标即恢复正常.提示该提取物具有治疗贫血和免疫功能低下作用;长期服用无毒副作用,安全范围广.     

黑果枸杞花青素通过调节Ca2+稳态对低氧诱导的H9c2大鼠心肌细胞的保护作用

本课题组前期研究发现,低氧下H9c2大鼠心肌细胞呈现凋亡和坏死的形态,黑果枸杞花青素(Lycium ruthenicum Murray anthocyanins,AC)能够有效保护低氧下H9c2大鼠心肌细胞的形态,缓解低氧诱导H9c2大鼠心肌细胞的凋亡。本研究通过构建H9c2心肌细胞体外低氧模型,检测H9c2心肌细胞肌浆网钙ATP酶(SERCA)活性、Ca²⁺浓度和Ca²⁺信号通路相关因子钙敏感受体(CASR)、质膜Ca²⁺ATP酶(PMCA)、钙调蛋白(CaM)和SERCA的mRNA和蛋白表达,探究黑果枸杞花青素通过调节Ca²⁺稳态对H9c2心肌细胞低氧损伤的影响。结果显示,与常氧组相比,低氧可极显著下调SERCA活性(P<0.05),极显著上调Ca²⁺浓度(P<0.01);低氧环境下,用黑果枸杞花青素处理后能够极显著上调SERCA活性(P<0.01),显著下调细胞内Ca²⁺浓度(P<0.05)。与常氧组相比,低氧可显著上调CaM...     

氟对鸡甲状腺过氧化物酶活性的影响

选用1日龄蛋用鸡250只,随机分为5组,每组50只,饲喂相同的全价日粮.第1组为正常对照组,第2、3、4和5组在日粮中添加不同剂量的氟化钠,使日粮中氟的含量分别为500、1 000、1 500和2 000 mg/kg,试验期为150 d.每隔30 d采集血样,测定血清中氟含量及甲状腺匀浆中甲状腺过氧化物酶(TPO)活性.结果表明,本试验成功地复制出了不同程度的鸡慢性氟中毒模型,氟中毒各组鸡甲状腺匀浆中TPO活性均有不同程度的降低,而且TPO活性与血清氟含量呈显著的负相关(r=-0.778,P＜0.01).说明氟能抑制TPO的活性,破坏甲状腺中TPO的代谢.     

鸡马立克氏病肾肿瘤p15基因的甲基化特异性PCR检测

选取300只1日龄公鸡,人工复制鸡马立克氏病(MD)模型,随机分为对照组和MD组,分别于35日龄、40日龄、45日龄采取鸡肾,观察病理组织学变化,通过甲基化特异性PCR方法,检测了MD病鸡肾肿瘤发生和发展过程中p15基因甲基化的变化,以探讨p15基因甲基化与肾肿瘤发生、发展的关系。结果显示,MD组鸡的临床表现以及肾组织的病理变化符合MD的特征,说明人工复制MD模型成功。在正常鸡肾组织中没有发生p15甲基化,在MD病鸡肾组织中p15甲基化的发生率高达61.7%,与正常对照组差异极显著(P0.01),并呈时间效应。证实,p15基因甲基化与MD的发生、发展密切相关。     

黄芪甲苷对SLT-Ⅱe诱导RIMEC分泌NO、ET-1、PGI2、TXA2、P-选凝素及sICAM-1的影响

将培养的肠黏膜微血管内皮细胞分为对照组、SLT-Ⅱ e组、不同浓度黄芪甲苷处理组等5个组,采用ELISA法测定了培养3、6、9和12 h时细胞培养上清液中NO、ET-1、PGl2、TXA2、P_选凝素及sICAM-1浓度的变化.结果显示,5μg/mL黄芪甲苷可下调SLT-Ⅱe诱导的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞NO及sICAM-1的分泌,12 h内使NO及sICAM-1分泌浓度接近正常水平;1、5、10μg/mL黄芪甲苷不能下调SLT-Ⅱe诱导的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞ET-1、PG12、TXA2和P-选凝素的分泌.说明,黄芪甲苷通过抑制SLT-Ⅱe诱导肠黏膜微血管内皮细胞NO及sICAM-1的分泌,缓解局部炎症反应,达到治疗水肿病的目的.