多重置换扩增技术用于法医学微量DNA检测效果

目的探讨多重置换扩增(MDA)技术对法医学微量DNA样品STR检测分型的效果。方法用MDA技术对不同模板量DNA进行全基因组扩增(WGA),扩增产物用实时荧光定量PCR技术定量、用Profiler PlusTM试剂盒检测基因型。结果该方法可对模板DNA增加104～106倍。1ng样品DNA的MDA产物可获得9个STR基因座和Amelogenin性别基因座的准确分型结果;低于0.1ng的样品DNA经MDA扩增后,基因座检出数增加,但可见等位基因不平衡或丢失现象。结论MDA技术可有效增加DNA模板量和提高微量DNA分型效果。但样品DNA量低于0.1ng时,MDA产物的STR分型结果判读须慎重。     

多重置换扩增技术用于法医学微量DNA检测效果

目的探讨多重置换扩增（MDA）技术对法医学微量DNA样品STR检测分型的效果。方法用MDA技术对不同模板量DNA进行全基因组扩增（WGA）．扩增产物用实时荧光定量PCR技术定量、用Prrfiler Plus^TM试剂盒检测基因型。结果该方法可对模板DNA增加10^4～10^6倍。1ng样品DNA的MDA产物可获得9个STR基因座和Amelogenin性别基因座的准确分型结果；低于0．1ng的样品DNA经MDA扩增后，基因座检出数增加。但可见等位基因不平衡或丢失现象。结论MDA技术可有效增加DNA模板量和提高微量DNA分型效果。但样品DNA量低于0．1ng时，MDA产物的STR分型结果判读须慎重。     

微腔型PCR芯片用于法医DNA分析的初步研究

目的为了克服传统PCR热循环仪体积大,运行电压高,耗时长,只能在实验室中应用的缺点,研究了一种微腔型PCR芯片,以期实现现场对STR片段的复合扩增。方法采用在PCR反应缓冲液中加入不同浓度的BSA溶液对芯片进行表面优化处理的方法及不同酶量优化实现对STR片段的有效扩增。结果使用浓度为0．5mg／mL的BSA可得到清晰完整的STR分型结果;加大酶量有益于扩增效率的提高。结论该种微腔型PCR芯片经初步优化后可有效地对STR片段进行复合扩增,经进一步优化可真正实现法医DNA分析的更加微量化和快速化。     

全基因组扩增在微量检材DNA分型中的应用

目的探索全基因组扩增技术对微量检材DNA分型的有效性。方法通过显微操作制备含1~20个细胞的模拟微量检材样本,在常规PCR-STR分型前加入全基因组扩增步骤,从等位基因不平衡、等位基因丢失、基因座丢失、伪等位基因(包含stutter峰)等方面探究PEP和MDA两种全基因组扩增方法对微量检材DNA分型的有效性。结果 MDA扩增效率高于PEP,但等位基因丢失和伪等位基因严重;PEP方法的正确分型率高于MDA,但小片段DNA优势扩增现象较严重。结论 MDA方法并不适合目前以STR分型为主导的法庭科学,当微量检材样本的绝对量相当少时,可以考虑使用PEP方法来扩大样本量,以满足重复检验的要求,但可能面临大片段DNA扩增失败的风险。     

微量细胞DNA分型的法医学应用研究进展

微量细胞DNA分型已成为目前法医学研究的热点之一。如果能够从犯罪现场遗留的微量疑难生物检材中提取到细胞,并获得DNA分型,这无疑将会大大拓宽检材的范围。同时可以为刑事案件的侦查提供线索、为法庭量刑提供有力的证据。本文从微量细胞的捕获、DNA模板的制备、扩增和检测及应用前景几个方面综述了微量细胞DNA分型在法医学中的研究进展。     

全基因组扩增技术的法医学应用价值及其结果评价

微量模板DNA的分析,一直是法医学特别关注和急需解决的难题之一,近年发展起来的一系列技术为解决这一问题提供了新的可能途径,本文即对微量模板DNA分析技术的进展和目前逐步发展的全基因组扩增技术的法医学应用价值、结果评价进行浅议。     

武汉地区汉族人群线粒体DNA Region V区9bp片段缺失多态性

目的 研究武汉地区汉族群体线粒体DNA RegionV区9bp片段缺失多态性.方法 PCR扩增后采用银染技术分离片段,检测武汉地区汉族群体线粒体DNA RegionV区9bp片段缺失的频率.结果 在武汉地区汉族239个无关个体中发现标准型、缺失型两种多态类型,9bp片段缺失频率为17.15％.结论 武汉地区汉族群体在DNA RegionV区9bp片段存在缺失多态性.     

微量细胞DNA分型的法医学应用研究进展

微量细胞DNA分型已成为目前法医学研究的热点之一。如果能够从犯罪现场遗留的微量疑难生物检材中提取到细胞，并获得DNA分型，这无疑将会大大拓宽检材的范围。同时可以为刑事案件的侦查提供线索、为法庭量刑提供有力的证据。本文从微量细胞的捕获、DNA模板的制备、扩增和检测及应用前景几个方面综述了微量细胞DNA分型在法医学中的研究进展。     

微量DNA:容易忽略的生物物证

PCR技术的出现,大大提高了法医DNA分析技术的灵敏度,尤其是STR复合扩增技术的应用,不仅如同DNA指纹技术一样能够进行同一认定,而且使其灵敏度达到了纳克级以下的水平,大大提高了其解决微量、降解DNA的分析能力.Findlay等[1]成功地分析了低至单个细胞水平的模板DNA;Van Hoofstat等[2]利用DNA技术分析现场遗留指纹进行检验;Barbaro等[3]利用DNA技术对毛干进行检验;Schmerer等[4]和Burger等[5]分别用60和50个循环分析古代骨骼DNA;Van Oorschot和Jones[6]利用PCR检验,从电话话筒、钢笔、手提箱把手等提取的检材样品中得到DNA分型;Wickenheiser[7]从被盗汽车的方向盘上提取DNA进行STR分型,从而认定罪犯.以上研究报道的结果表明,现有的DNA技术能够对微量DNA进行检验.     

基于切口酶的等温全基因组扩增体系的建立与应用

目的 建立依赖切口酶Nt.BstNBI的等温全基因组扩增体系，并对该体系的微量生物物证STR分型效能进行验证。方法 选用切口酶Nt.BstNBI（识别序列为GAGTC）和等温扩增的聚合酶Bst，建立切口酶依赖的扩增体系（NDA）。对DNA样本进行NDA并纯化NDA产物，对NDA前后的样本进行复合扩增和毛细管电泳，检测该方法的有效性、灵敏性。结果 007标准品12个常染色体基因座的扩增效率提高2倍以上，灵敏度约为3 pg/μL;19个Y染色体个基因座的扩增效率提高2倍以上，灵敏度约为6 pg/μL。8个人血样本扩增效率提高2倍以上的常染色体基因座与007标准品一致。结论 本文建立的NDA体系准确性好，能够对包含特定侧翼序列的STR基因座进行有效的线性扩增，对法医微量生物物证的高效扩增检测具有重要意义。     

法庭DNA技术的发展及展望

1 法庭DNA技术的现状 DNA技术自1985年应用于法庭鉴定以来,发展极为迅速,得到了广泛应用。已经由最初的以长度(RFLP)为基础的DNA指纹分型技术(DNA Fingerprinting)发展到如今的扩增片段长度多态性检测(PCR-VNTR,PCR-STR)及DNA序列变异测定等。其中应用比较普遍的几项法庭DNA鉴定技术分别为DNA指纹图技术、PCR扩增技术、DNA测序技术。     

脱落毛发线粒体DNA HV1区序列测定的研究

目的　对脱落毛发线粒体DNAHV1区序列测定方法进行研究。方法　嵌合扩增结合末端荧光标记DNA测序。结果　对 2 0例脱落毛发进行分析获得了明确的测序结果 ,与来自同一个体的血液所测得的DNA序列进行比较 ,完全相同。结论　嵌合扩增在对脱落毛发进行线粒体DNA多变区序列分析中是一种有效的方法 ,在法医DNA检验中具有实用价值。     

Profiler Plus试剂盒扩增Amelogenin基因座变异1例

目的探讨日常检案及DNA数据库建设中常用的ProfilerPlus系统扩增法医生物检材可能出现的变异情况。方法分别采用ProfilerPlus试剂盒扩增、毛细管电泳分析及Amelogenin单基因座扩增、银染技术分型两种方法分别检测两份血痕的基因型。结果应用ProfilerPlus试剂盒扩增、毛细管电泳分析发现X-Y同源Amelogenin基因座的X片段丢失,而运用Amelogenin单基因座扩增、银染技术分型则X片段正常出现。结论应用ProfilerPlus系统分析法医生物检材,有可能出现等位基因丢失现象,此现象需要引起我们在日常检案及DNA数据库建设中的足够重视。     

利用荧光AFLP技术检测罂粟DNA多态性

目的 利用荧光AFLP检测技术检测罂粟植物DNA多态性。方法 用Axygen公司的AxyPrep DNA试剂盒提取了12株产于缅甸和中国云南省昆明市宜良县罂粟植株的DNA，用Eco RI和Mse I对总DNA进行酶切。连接人工接头，预扩增和选择性扩增，其产物在CEQ8000遗传分析系统上检测。结果 64对选择性扩增引物中8对引物能得到20条以上的扩增片断，具有高度多态性。结论 荧光AFLP技术可用于罂粟DNA多态性的检测。     

复合扩增mtDNA-HVI和Cyt b片段鉴定混合血痕种属

目的探讨mtDNA-HVI和Cyt b片段复合扩增法鉴定人与动物混合血痕种属的应用价值。方法用chelex-100法从人、牛、猪、狗、兔、鱼、鸡和鼠血痕中提取DNA,复合扩增mtDNA-HVI片段和Cyt b片段,琼脂糖凝胶电泳检测。结果人类在mtDNA-HVI区和Cyt b区分别出现279bp和358bp各一条带,且279bp条带亮于358bp;动物均只有358bp一条带。人与7种动物血痕的检测灵敏度均为3.13ng。检测人与动物混合DNA,灵敏度仍为3.13ng,但358bp条带亮于279bp条带。结论当358bp带明显强于279bp带时,提示检材为人与动物的混合。     

衣帽上脱落细胞微量DNA检测方案初探

由于个案中微量DNA检材的成功提取及STR检测技术的不断提高,强化了现场勘察人员提取衣帽上脱落细胞微量DNA检材的意识。针对本实验室受理的此类检材逐渐增多及衣帽上微量DNA检材的特点,本文作者在检案中摸索出通过多重提取、纯化并选择最佳扩增体系的检测方案,明显提高了检测成     

联合应用chelex100和磁珠法检测霉变皮上衣微量DNA1例

微量疑难检材DNA的提取是目前检案的难点之一.笔者在办案中,遇到1份微量、陈旧、霉变的检材;经联合应用chelex100法和磁珠法(DNA IQIM)成功从检材中提取并获得了足量、高纯度的模板DNA,采用PCR扩增和荧光检测获得理想的STR分型结果,为破案提供可靠有力的科学依据.现报道如下.     

全基因组扩增法应用于低拷贝数DNA检测

目的建立基于多重置换扩增(MDA)技术的全基因组扩增(WGA)方法,实现对低拷贝数(LCN)DNA样品进行分析。方法采用REPLI-g试剂盒对样本进行等温全基因组扩增,扩增产物采用ProfilerPlus试剂盒确定样本的十个STR基因座的等位基因型。结果10pgDNA模板经全基因组扩增后,能够进行DNA分型。结论全基因组扩增可以用于LCN的DNA分析,帮助提高微量物证的检出成功率。     

体外DNA扩增技术鉴定血痕性别三例报告

本文报道用体外DNA扩增技术对3例刑事案中的人血痕标本进行性别鉴定。其方法是从血痕标本中微量抽提DNA,用蛋白酶K进行消化。然后用两组引物Y1.1与Y1.2和Alu9.1与Alu9.2及国产FD耐热DNA聚合酶进行聚合酶链反(PCR)扩增DNA,电泳分析Y及Alu重复序列,从而判断血痕的性别。     

甲醛固定组织中DNA提取与扩增技术的初步研究

目的：探索从甲醛固定组织中提取并扩增DNA的方法。方法：采用高pH缓冲液,结合有机溶剂法抽提DNA,选择扩增片段较短的DQa位点作为检测位点。结果：甲醛固定组织中的DNA降解程度随浸泡时间的延长而加重,但浸泡1、5、10个月的3份心脏组织均获得了240bp的扩增产物。