ABC-ELISA诊断实验感染羊肝片吸虫病的研究

生物素-亲和素系统(Biotin-Avidin System,BAS)是七十年代后期发展起来的一种新型生物反应放大系统的酶免疫检测技术,它具有特异性强,灵敏度高和高度稳定等优点,适用于微量抗原和抗体的检测成为研究免疫反应的有力工具。 我们应用亲和素-生物素化辣根过氧化物酶复合物的酶联免疫吸附试验(ABC-ELISA)对13只实验感染肝片吸虫羊血清特异性抗体进行了检测,并和常规ELISA做了比较,其结果令人满意。     

免疫组织化学染色法检测旋毛虫病的研究——亲合素-生物素-过氧化物酶复合物染色法

本文应用国产BAS试剂,首次建立了检测实验猪旋毛虫病的亲合素—生物素—过氧化物酶复合物(ABC)染色法。本法与常规间接免疫过氧化物酶(IIP)染色法相比,敏感性强、特异性高、稳定可靠,其血清滴度比IIP法高2.24倍;与IIP法相比,可提前检出抗旋毛虫抗体;该法有助于低抗体水平旋毛虫病猪的诊断。     

ABC-Dot-ELISA检测家兔抗华支睾吸虫IgG

免疫酶斑点试验(Do t-ELISA)检测抗体,具有敏感、简便等优点,因此,近年来被用于检测多种寄生虫抗原和抗寄生虫抗体。笔者利用亲和素-生物素(Avidin-Biotin)的生物放大作用,将Avidin Biotin-HRP Complex(ABC)与Dot-ELISA结合,建立了ABC-Dot-ELISA,用于检测人工感染华支睾吸虫家兔血清中的特异性IgG,同时做ABC-RLISA进行比较。(一)材料和方法1.抗原制备:按常规方法进行,蛋白质含量为5 mg/ml。2.生物素化羊抗兔地IgG(b-SARIgG)和     

ABC-ELISA诊断耕牛日本血吸虫病

生物素—亲和素系统是前几年发展起来的一种新型生物反应放大系统,不少实验室已把它应用于寄生虫病的免疫诊断,并得到了较为满意的结果。本文对ABC-ELISA法在耕牛日本血吸虫病免疫诊断上的应用价值做了初步探讨。(一)材料与方法1.材料:     

用ABC-Dot-ELISA检测轮状病毒抗原与抗体

Hawkes等(1982)建立了斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)后,已有许多学者将其用于寄生虫、细菌、病毒的检测,认为比普通ELISA简单、特异、敏感、快速。70年代末建立的生物素亲和素酶联免疫吸附试验(ABC-ELI-SA),大大提高了ELISA的敏感性。我们结合两者之长,建立了生物素亲和素斑点酶联免疫吸附试验(ABC-Dot-ELISA),用于检测仔猪、羔羊及婴儿腹泻粪便中轮状病毒抗原及羊(山羊、绵羊)与人血清中的轮状病毒抗体,并同Dot-ELI-SA、ABC-ELISA及ELISA进行了比较。     

生物素-亲和素酶联免疫斑点法诊断猪囊虫病

生物索-亲和素酶联免疫斑点法(BA-Dot-ELISA)是将生物素-亲和素系统(BAS)引入常规酶联免疫斑点法(Dot-ELISA)形成的一种新型的免疫学诊断方法。笔者应用这种方法,进行了猪囊虫病血清学诊断的初步研究。     

生物素——亲合素系统试剂的制备及其鉴定

本文报告了用N—羟基丁二酰亚胺法制备生物素酯以及应用羧甲基纤维素离子交换法从鸡蛋清中提取纯化亲合素的全过程,并对二者的部分理化性质和生物学活性进行了鉴定。所得生物素酯在普通显微镜下为白色结晶。熔点(MP)为201℃,质谱所得分子量(MW)为340dlt。纯化亲合素所带电荷和泳动方向与溶菌酶相同,SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测得分子量为64000dlt,用N—溴琥珀酰亚胺作用于亲合素可灭活其活性,阻止了与生物素间的结合,用233nm紫外分光光度法和用羟基偶氮苯甲酸可见分光光度法测得亲合素活性值为10.3个单位。此外,还对生物素酯与抗体之间结合比以及应用改良过碘酸钠法酶标亲合素过程进行了探讨。生物素与抗体间结合比以1:7为最佳,酶标亲合素的工作浓度约5mg/ml(1:1600)。     

应用BA-ELISA法检测结核病牛血清抗体

我们从1988年开始,应用生物素亲和素系统BA-ELISA法,对295头份牛血清进行了检测,并同时与常规ELISA方法在敏感性、特异性、稳定性等进行了对比试验。均取得了满意结果。(一)材料和方法1.试剂:①结核杆菌纯蛋白衍生物(PPD)抗原,由北京中国生物药品检定所提供。本品批号:0083。②生物素化葡萄球菌A蛋白(B-SPA);③抗生物素标记辣根过氧化物酶(A-HRP);④兔抗牛IgG;⑤牛血清白蛋白;⑥小牛血清,以上由中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所提供。⑦聚合“OT”,由湖北医学院微生物学教研室提供。     

亲合素—生物素系统在检测弓形虫抗体上的应用

应用亲合素-生物素系统(ABS)的试剂进行ABC-ELISA,并与常规ELISA和IHA予以比较,结果表明:在从90只山羊血清中检测弓形虫抗体阳性上,ABC-ELISA为56例(62.22％),常规ELISA为40例(44.44％),IHA为21例(23.33％);在检出弓形虫阳性抗体的滴度上,ABC-ELISA比常规ELISA敏感1.59倍,比IHA敏感3.07倍。ABC-ELISA与常规ELISA和IHA均呈线性正相关。因此,ABC-ELISA为弓形虫病的免疫学诊断和单克隆抗体的检测提供了比常规ELISA和IHA更敏感的新手段。     

不孕症乳牛透明带抗体的检测及治疗

高等动物的透明带是被覆于卵细胞的糖蛋白，含有多种抗原性物质。透明带抗体可以使动物发生长期不育。据报道，人的透明带抗体与不孕症相关，但有关乳牛透明带抗体与不孕症关系的研究报道较少。为此，我们用生物素亲合素酶联免疫吸附法（ＢＡＥＬＩＳＡ）检测了乳牛透...     

用生物素标记核酸探针检测牛传染性鼻气管炎病毒的研究

将纯化的牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)全基因组用缺口翻译方法把生物素—尿苷三磷酸(Biotin-dUTP)掺入双链IBRV—DNA上作为探针,与点在硝酸纤维膜上的样品进行打点杂交,然后在链霉亲合素—碱性磷酸酶中孵育,用氮蓝四唑和5—溴—4—氯—3—吲哚磷酸作用,阳性反应呈现紫色斑点。通过检测样品中IBRV—DNA同源序列,以确定是否存在IBRV。结果表明,应用生物素核酸探针可检出10pg的IBRV—DNA,具有灵敏、快速、无放射性污染、探针保存时间长等优点,为IBRV临床检测提供了一个有力的手段。     

猪瘟RT-PCR ELISA诊断方法的建立及其初步应用

建立了检测CSFV的快速、敏感、特异的RT PCRELISA方法。在RT PCR过程中以地高辛标记的dUTP(DIG dUTP)标记PCR产物 ,用生物素标记的捕获探针在链亲和素包被微量板孔中杂交捕获PCR产物。该方法的敏感性较常规RT PCR方法高 10 0倍 ,可检测出 35 0 μL1∶10 0 (相当于 3.5mg)的兔脾组织悬液中的C株CSFV ,特异性强 ,避免了PCR过程中因污染导致的假阳性结果。通过对RT PCR和微量杂交系统的条件优化 ,该方法用于检测C株兔脾组织毒、细胞适应毒和野毒感染的猪组织毒样品 ,效果良好     

绵羊人工感染旋毛虫试验

在动物旋毛虫病流行病学中,由于绵羊的食物特性和饲养方式与猪不同,故不像猪那样感染,传播旋毛虫病原而对公共卫生造成严重威胁,但一些地区曾有因食用涮羊肉而爆发人旋毛虫病的报道。因此,有关学者曾在这方面进行了有益的探讨。为了解西北地区放牧绵羊感染旋毛虫的状况,我们用猪源旋毛虫肌幼虫对绵羊进行了人工感染试验,并在此基础上,用ELISA检测了内蒙、青海、宁夏和甘肃4省区部分地区放牧羊血清旋毛虫抗体。     

生物素—亲和素免疫酶标法检测绵羊布氏杆菌抗体的研究

本试验使用生物素——亲和素免疫酶标法(BA-ELISA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)对221份绵羊布氏菌病血清抗体进行了检测,同时与常规血清学检测法进行了比较。结果表明BA-ELISA和ELISA的检出率明显高于其它方法。在其中63份菌检阳性和免疫血清中,BA-ELISA和ELISA分别检出60/63份(95.3％)和52/63份(82.5％),而试管凝集试验为20/41份(48.8％),补体结合试验为17/41份(41.5％),虎红平板试验为16/41份(39.0％),此外,还就BA-ELISA法特异性,敏感性等方面进行试验,显示出BA-ELISA具有很强的特异性,其敏感性比ELISA高4～8倍,比常规补体结合反应高256倍。这些都表明BA-ELISA是绵羊布氏菌病血清学诊断上具有发展前途的新方法。     

BA-ELISA诊断棘球蚴病的研究

应用生物素-亲和素系统(BAS)的BA法分别在两种载体上与常规ELISA法对比,进行了诊断人、绵羊棘球蚴病实验研究。结果以聚苯乙烯板为载体的BA-ElISA法诊断人棘球坳病:敏感性92～100％,特异性95～100％,常规ELISA法敏感性67～83％,特异性92～100％,检测绵羊棘球蚴病,敏感性61～90％,特异性67～90％、常规ELISA法敏感性为49～72％,特异性80～93％。用硝酸纤维素膜为载体的BA-Dot-ELISA法检测人血清:敏感性100％,特异性91.7～100％,Dot-ELISA检测绵羊血清:敏感性73.3～75.6％,特异性78.9～89.5％。试验证明BA法较常规ELISA有着更高的敏感性和特异性,斑点法可以取得与聚苯乙烯板完全等同的效果。     

间接荧光抗体试验检测猪旋毛虫病的研究

本文报道了间接荧光抗体试验(IFA)检测猪旋毛虫病的诊断价值。对人工感染旋毛虫的猪血清,IFA的阳性符合率达98.70％。与已知阴性血清无假阳性反应。与弓形虫、囊虫感染猪血清无交叉反应。感染肌组织常规石蜡切片及脱囊肌幼虫均可用作抗原。我们的研究初步表明,IFA可作为诊断猪旋毛虫病的一种配套血清学方法并可用于血清流行学调查。     

生物素—抗生物素系统在免疫检测技术中的应用与展望

自七十年代末,生物素与抗生物素系统(Avidin—Biotin System)已开始在免疫化学领域中广泛应用。尤其是因生物素和抗生物素之间亲合力大,特异性强,可分别结合各种类型大小生物分子,为免疫标记技术的发展提供了一种极为方便的工具。目前该系统已成为免疫学领域中最受欢迎的新方法。     

ABC—ELISA检测实验猪弓形虫特异性IgG抗体的研究

用ABC—ELISA对弓形虫实验感染不同时期的猪血清特异性IgG进行了检测,并和常规ELISA予以比较。结果,实验感染后第1周的15份血清、第2周的13份血清和第3周的10份血清,用ABC—ELISA检出IgG的阳性率分别为46.67％、61.53％和100％,而常规ELISA检出IgG的阳性率分别为20％、61.53％和100％;ABC—ELISA检测IgG的平均滴度为1:3666,常规ELISA检测IgG的平均滴度为1:1333;前者比后者灵敏2.75倍。另外,还和猪瘟、猪丹毒、猪肺疫、猪喘气病、猪布氏杆菌病和猪旋毛虫病的阳性血清进行了对照检测,结果均无交叉反应。证明:ABC—ELISA是检测弓形虫抗体的特异而又灵敏的方法。从而为弓形虫单克隆抗体的检测提供了良好手段。     

猪附红细胞体PCR-ELISA检测方法的建立

根据猪附红细胞体OxaA膜蛋白基因设计了1对分别标记生物素和地高辛的引物,将PCR扩增产物固定至链霉亲和素包被的酶标板中进行酶联显色检测,并优化PCR扩增及ELISA检测步骤,建立了猪附红细胞体PCR-ELISA。结果显示,该方法较传统的PCR-ELISA节约近2h,最低能检出0.36pg的猪附红细胞体DNA,敏感性比常规PCR高10倍,且与猪链球菌、猪肺炎霉形体、大肠杆菌等无交叉反应。用该方法对64份猪血液中提取的DNA样品进行检测,结果阳性检出率为35.9%,明显高于常规PCR的28.1%。结果表明,建立的猪附红细胞体PCR-ELISA具有敏感、特异、安全和快速的特点。     

用免疫组织学方法检测猫皮下伪肿瘤中的皮肤真菌

应用小鼠抗犬小孢子菌（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍｃａｎｉｓ）特异性多克隆抗体，以生物素－亲和素酶标免疫组织学方法检测猫皮下伪肿瘤病理切片中对应的犬小孢子菌抗原，并与其它病原真菌进行了对比。试验结果显示，将真菌体外培养物经轻度匀浆的混悬液给小鼠皮下接种，可获得高滴度的特异性抗体。１５００～１１０００稀释的血清和１１００的二抗，以氨基乙烯苄唑（ＡＥＣ）作底物进行免疫组织学检验，可将组织切片中对应的抗原染成红色。犬小孢子菌抗体与所检酵母型真菌的抗原不发生交叉反应，与褐色丝状真菌瘤中的常见病原如烟曲霉菌（Ａｓｐｅｒｇｉｌｕｓｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、短颈扫帚霉菌（Ｓｃｏｐ－ｕｌａｒｉｏｐｓｉｓｂｒｅｖｉｃａｕｌｉｓ）、脱毛分枝孢子菌（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍｔｒｉｃｈｏｒｃｈｅｓ）、疣状瓶霉菌（Ｐｈｉａｌｏｐｈｏｒａｒｅｒｒｕｃｏｓｅ）也无交叉反应，与链格孢菌（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａａｌｔｅｒｎａｔａ）有部分交叉。从而可区别皮肤真菌与其他常见病原真菌，为研究皮肤真菌感染非典型病理提供了一种可靠的手段