激光显微捕获口腔上皮细胞的DNA分型

目的探索激光显微技术(lasercapturemicrodissectionsystem,LCM)捕获口腔上皮细胞,并进行STR-DNA分型检测的方法。方法用VERITAS显微切割仪红外低能激光显微捕获一定数量口腔上皮细胞,进行ProfilerPlus试剂盒STR复合扩增,检测DNA基因型。结果7～8个口腔上皮细胞能成功获得STR-DNA分型。3～4个口腔上皮细胞不能成功获得STR-DNA分型。结论激光显微捕获作为一种分离单个细胞的新技术,对于微量口腔上皮细胞的STR-DNA分型是可行的。     

激光捕获显微分离技术分离多人混合精斑

目的利用激光捕获显微分离技术(LCM)分离多供体混合精斑。方法将3名自愿者供给的精液混合后,制备成混合精斑,并涂于覆膜玻片上。用PALM激光捕获显微分离系统切割并捕获样本中的单个精子,利用低体积扩增技术(LV-PCR)扩增并进行检测,并对分型结果进行统计。结果联用LCM和低体积扩增技术捕获样本中单个精子细胞进行扩增,可获得每位自愿者的Y-STR分型,分型成功率为73.15%。结论激光捕获显微分离联用低体积扩增技术可完成多供体混合精斑的分离检验。     

激光捕获显微分离技术及其法医学研究进展

激光捕获显微分离技术(laser capture m icrod issection,LCM)是一项显微捕获分离单个细胞和多个细胞的自动化新技术,本文综述了其在法医学领域的研究新进展。经过研究和实践,它将在法医学实践中解决混合和微量物证的DNA检验难题中发挥重要作用。     

荧光原位杂交技术在法庭科学DNA检验中的应用

目的运用荧光原位杂交技术结合激光显微切割技术,分离法医物证男女混合样本中的男性细胞和女性细胞,并进行DNA分型。方法通过双色荧光原位杂交,Y染色体标记上绿色信号,X染色体标记上红色信号,在荧光显微镜下识别男性细胞和女性细胞,并通过激光显微切割技术分别获得男性细胞和女性细胞进行DNA分型。结果运用荧光原位杂交技术,能够分别标记法医物证男女混合样本中的男性细胞和女性细胞,并通过激光显微切割技术获得各自的DNA分型。结论荧光原位杂交技术结合激光显微切割技术,可应用于法医物证男女混合样本的检验,提高个体识别能力。     

激光捕获显微切割技术用于分离混合斑中精子细胞

目的 评估激光捕获显微切割(laser capture microdissection.LCM)技术在分离混合斑中少量精子细胞的应用价值.方法 配制不同比例的精液-阴道上皮细胞混合液.分别用差异裂解法和LCM法分离精子细胞,用磁珠法提取精子细胞DNA,并用IdentifilerTM试剂盒进行STR基因型检测.结果 LC...     

FISH联用激光捕获显微分离技术对混合斑进行分离检验

目的建立荧光原位杂交(FISH)联用激光捕获显微分离技术(LCM)精确分离男女混合斑中精子的检验方法。方法收集健康志愿者精子和女性阴道上皮细胞制备模拟混合斑,经过预处理后用Vysis CEPX SpectrumOrangeTMY SpectrumGreenTM试剂盒进行荧光原位杂交,并用PALM激光捕获显微分离系统分离男、女性细胞,使用Identifiler试剂盒结合低体积扩增技术分别对男女成分进行STR扩增。结果荧光原位杂交后,可清晰分辨混合斑中的男女细胞。捕获20个精子细胞可以得到完整的STR分型,检出率为80%。随着精子数目增多,检出率提高而等位基因丢失率降低。30个精子检出率最高,为95%。结论激光捕获显微分离联用FISH技术可用于混合斑中男女细胞DNA的分离检验。     

激光捕获显微切割技术在法医学中的应用

本文主要介绍了激光捕获显微切割技术及其在国内外法医学领域应用的研究进展,并对LCM技术解决法医学难题的应用前景进行探讨。     

激光捕获显微切割技术在法医学中的应用

本文主要介绍了激光捕获显微切割技术及其在国内外法医学领域应用的研究进展．并对LCM技术解决法医学难题的应用前景进行探讨。     

低拷贝模板DNA分析技术研究进展

近年来,低拷贝（LCN）模板类生物物证在法医DNA分析中占有了越来越重要的地位。用于低拷贝模板DNA的检测方法也得到飞速发展。本文通过对各种LCN-DNA分析技术如增加扩增循环数、纯化扩增产物、全基因组扩增、激光捕获显微切割等检测方法的综述,以及对LCN—DNA检测结果的分析评价,全面介绍LCN分析技术在法庭科学应用的最新进展及存在问题。最大限度地拓展低拷贝模板类生物物证在刑事司法领域的应用。     

单细胞检验技术用于混合上皮细胞的分离和检验

目的建立单细胞显微捕获联合低体积扩增技术,用于混合上皮细胞检材分离检验。方法取5名男性口腔上皮细胞拭子浸泡液30μL,分别滴加到5份含同一女性皮肤表皮细胞拭子上,制成5份混合上皮细胞样本为实验组,同时制备同样的5份样本为对照组。实验组样本采用显微捕获单个口腔上皮细胞,并使用低体积扩增技术进行扩增;对照组用M48纯化试剂盒提取DNA,Identifiler试剂盒复合扩增,扩增体系为10μL。所有产物均用ABI 3130遗传分析仪进行STR分型。结果 5份实验组样本均得到男性STR分型结果,5份对照组样本则均仅得到混合分型结果。将该方法应用于1例强奸杀人案例检验,取得了满意效果。结论单细胞显微捕获联合低体积扩增技术可用于混合上皮细胞样本的分离检验。     

激光捕获显微分离技术在DNA检验中的应用研究

目的建立一套显微细胞捕获技术用于法医学生物检材DNA检验方法。方法使用VeritasTM LCM激光捕获仪,采用紫外加红外的捕获方式,对框架覆膜玻片上经苏木素染色口腔上皮细胞进行捕获,采用改良硅珠法提取细胞DNA,使用Identifiler TM试剂盒在5μL体系中进行PCR扩增。结果成功获得20个口腔上皮细胞的13个以上完整STR基因座分型谱带。结论本研究建立的方法适合法医学生物检材制成的染色涂片上细胞的DNA检验。     

龙胆紫染色法在显微捕获单细胞分离技术中的应用

目的建立用于显微捕获单细胞技术的龙胆紫染色法并评价其应用效果。方法制作20枚口腔拭子脱落细包悬液,配制0．05g／mL龙胆紫染液。取100μL口腔细胞悬液加入0．15、0．25、0．5、1．0、2．0μL染色液,考察最佳染色浓度;争别染色5、10、30、60min,考察最佳染色时间;用最佳条件染色后抓捕3个细胞,采用联合LV-PCR技术扩增并进行DNA分驯佥测,进行重复试验20次,并对同一检材未经染色的抓捕细胞进行检测,用于比对STR分型成功率。将龙胆紫染色法用于案例检材的口腔上皮细胞分离检验。结果1001μL细胞悬液加入0．5止0．05g／mL龙胆紫染液,染色5min,胞核呈紫工色,与胞浆对比明显;染色时间延长不影响染色效果及细胞分离检验结果。优化后的龙胆紫染色法对低体积扩增无归显抑制（P〉0．05）。应用此染色法于案例检材,胞核标识清晰,STR分型结果达同一认定标准。结论龙胆紫染色法刚于细胞核的发现,有助于提高显微捕获单细胞技术的检测效能。     

单个细胞DNA样本的制备及其在灵敏度分析中的应用研究

目的建立一种用于高精确灵敏度分析的微量DNA样本制备方法。方法用显微捕获技术制备以细胞为单位的DNA样本,并用于ProfilerPlus试剂盒及ABI310遗传分析仪的灵敏度测试。结果建立了单细胞捕获操作方案,成功制备了依次含1～11个细胞的一组DNA分析样本,并可准确用于ProfilerPlus誖试剂盒及ABI310遗传分析仪的灵敏度研究。结论基于显微操作技术的高精确微量DNA分析样本制备方法可准确用于分析技术方法的灵敏度研究     

不同保存时间和不同精子数量精斑样本DNA分型比较

目的比较不同保存时间和不同精子数量精斑样本DNA分型的效果。方法制备精斑样本,保存10d的样本采用激光显微捕获30、20、15、10、5、1个精子,用于不同数量精子分型比较;保存10d、214d、375d的样本分别捕获30、20、10个精子,用于不同保存时间分型比较。比较各组检出率、等位基因丢失率和非特异性扩增率,采用χ2检验进行差异比较。结果①不同精子数量分型：捕获10个精子即可得到完整的DNA分型,且随着精子数增多,检出率逐渐提高而等位基因丢失率逐渐降低,30个精子等位基因丢失率为0%,1个精子则可达58.89%;②不同保存时间分型：总趋势是保存时间越短,捕获精子越多检出率越高,10个精子与20、30个精子组比较,均有显著性差异（P〈0.05）;等位基因丢失率及非特异性扩增率则随保存时间的延长而增加,相同保存时间的不同精子数量组之间和相同的精子数量的不同保存时间组之间比较,差异均具有统计学意义（P〈0.05）。结论激光显微捕获精子数目和检材保存时间对DNA分型结果有直接影响。     

妇科肿瘤和乳腺癌组织常染色体和X染色体STR的突变分析

目的探讨妇科肿瘤组织和乳腺癌组织的法医学常用STR基因座突变类型和规律,以及显微切割技术在肿瘤组织法医学鉴定中的应用。方法应用Power Plex 21 System和Argus X-12试剂盒对62例乳腺癌患者,62例妇科恶性肿瘤患者,10例良性妇科肿瘤患者外周血、肿瘤组织和癌旁组织DNA样本进行复合扩增,获得STR分型,并选取存在突变的部分肿瘤组织进行显微切割。结果妇科恶性肿瘤患者外周血的STR分型与癌旁组织一致;46.77%的妇科恶性肿瘤组织中观察到4种STR突变类型,显著高于良性肿瘤的STR突变率(P0.01)和乳腺癌的STR突变率(P=0.009)。显微切割获得的间质细胞的STR分型与癌旁组织一致。结论本研究所检测的STR基因座在妇科恶性肿瘤组织中的稳定性较差,不适用于该系统肿瘤组织的法医学鉴定;显微切割技术可准确分离间质细胞,能够代表肿瘤来源个体的正常DNA分型,是解决此类案件法医学鉴定的一种有效方法。     

显微红外光谱仪与显微拉曼光谱仪对纺用无色单根纤维的检测

目的研究常见纺用单根无色纤维的有效鉴别方法。方法使用显微红外光谱仪、显微激光拉曼光谱仪研究7大类纺用单根无色纤维的分子光谱。结果显微红外光谱仪、显微激光拉曼光谱仪能有效区分包括棉、粘胶、羊毛、丝、聚酰胺、聚丙烯腈和聚酯在内的7种纤维,是检测单根纤维的有效手段。785nm激发光源是显微激光拉曼光谱仪研究这7类纤维的最佳波长。但由于纺用纤维生产过程的标准化,仅依据红外或者拉曼的峰位置区分同种类、不同产地纤维的效果一般。结论显微红外光谱仪、显微激光拉曼光谱仪是鉴别常见纺用单根无色纤维的有效方法。     

显微红外光谱仪与显微拉曼光谱仪对纺用无色单根纤维的检测

目的研究常见纺用单根无色纤维的有效鉴别方法。方法使用显微红外光谱仪、显微激光拉曼光谱仪研究7大类纺用单根无色纤维的分子光谱。结果显微红外光谱仪、显微激光拉曼光谱仪能有效区分包括棉、粘胶、羊毛、丝、聚酰胺、聚丙烯腈和聚酯在内的7种纤维,是检测单根纤维的有效手段。785nm激发光源是显微激光拉曼光谱仪研究这7类纤维的最佳波长。但由于纺用纤维生产过程的标准化,仅依据红外或者拉曼的峰位置区分同种类、不同产地纤维的效果一般。结论显微红外光谱仪、显微激光拉曼光谱仪是鉴别常见纺用单根无色纤维的有效方法。     

显微激光拉曼光谱鉴别直接染料及其染色纤维

目的 研究显微激光拉曼光谱对直接染料及其染色纤维的鉴别.方法 使用显微激光拉曼光谱仪分别检验了9种直接蓝染料、6种直接黑染料和6种直接红染料及其染色的棉、苎麻和粘胶纤维.结果 当使用显微激光拉曼光谱仪检测直接染料时,514nm激光器的区分能力较强,且光谱基本不受荧光干扰;633nm和785nm激光器的区分能力相似,但较514nm激光器略弱,且光谱更易受到荧光干扰.当使用显微激光拉曼光谱仪检测染色纤维时,若染料本身拉曼光谱信号较强时,其染色纤维的拉曼光谱与染料基本一致;当染料本身拉曼光谱信号较弱且受荧光干扰时,其染色纤维的拉曼光谱受到更大荧光干扰;相同染料染色的不同纤维的拉曼光谱一致.结论 显微激光拉曼光谱是无损检验染料及其染色纤维的有效手段,染色纤维的拉曼光谱基本反映的是染料的拉曼信号.     

激光显微捕获技术在强奸案件DNA检验中的应用1例

目前,激光显微捕获(LCM)技术已广泛应用于分子病理学、肿瘤学、发育生物学、植物学、神经生物学等学科研究中,它可以从复杂组织中快速准确地分离均一性样品组分。该技术在法医学领域的应用,国内外均有一些研究。本文应用该技术对1例强奸案件进行STR-DNA检验,并就其优点和注意事项等进行讨论。1简要案情黄某,女,21岁。2006年7月,在下班回家途中被人拖入果林强奸,由于羞于启齿,1个月后才报案。黄某诉案发时其牛仔裙被垫在其身下,可能沾有嫌疑人精液,遂取该牛仔裙进行DNA检验。2检验首次检验深兰色牛仔裙上有明显泥土印痕,肉眼分辨可疑精…     

激光显微切割技术与低体系扩增方法的法医学应用探索

目的建立减少DNA低体积扩增过程中产生气泡的方法。方法采用激光显微切割技术、PALM系统收集目标细胞,并在1μL～1.5μL低体积扩增样本,加入扩增液0.7μL～0.8μL。结果低体积扩增反应中的失败位点比例为2.3%,比常规反应位点时常会产生气泡导致该位点样本扩增失败且达30%以上的比例显著降低。结论低体积扩增方法可以减少或克服扩增过程中气泡的产生,提高扩增成功率。