急性心肌缺血早期碱性成纤维细胞生长因子的免疫组化研究

采用免疫组织化学方法，对大鼠急性心肌缺血早期不同时间心脏不同区域碱性成纤维细胞生长因子basicFibroblastGrowthFactor：bFGF）的变化进行了研究。结果发现心肌缺血30min心肌局部即可出现bFGF阳性表达，并且随着缺血时间的延长其阳性表达的强度也有所增加。图像分析处理结果表明，缺血3h其表达水平达到高峰（55.26±14．75），明显高于对照组（7．27±2．49），而与缺血边缘区域（53．08±14．26）和正常区域(53．79±15．71）相当。3h后，心肌缺血区域bFGF的表达开始出现下降趋势，而缺血边缘区域和正常区域则开始呈现上升趋势。可为心肌缺血的早期诊断提供客观的形态学依据。     

大鼠急性早期心肌梗死细胞膜PNA受体表达

探测急性心肌缺血早期细胞膜PNA受体的表达特点。应用免疫组化法(S-P法)对32只SD大鼠急性心肌缺血早期不同时间心肌细胞膜凝集素受体的表达进行研究。结果发现:心肌缺血15min时,心肌局部可出现PNA染色阳性,且随着缺血时间的延长,其阳性表达面积明显增加;缺血2h;其表达水平达到高峰,呈弥漫性染色阳性,明显高于对照组;2h后,心肌缺血区域PNA受体的表达开始出现下降趋势。实验结果稳定,敏感性强,可为心肌缺血早期诊断提供客观的依据。     

VEGF在家兔缺血心肌中的表达及其死后稳定性研究

目的观察心肌中VEGF在死后一定时间的稳定性及表达的变化规律，评价其对死后诊断机体早期心肌缺血的作用。方法用冠状动脉结扎法建立家兔急性心肌缺血模型，应用SP法染色、图像分析和统计学处理系统，检测缺血心肌细胞内VEGF阳性表达面积和强度，并对VEGF在死后不同时间的稳定性进行比较。结果VEGF在缺血心肌组织中，见灶性或成片心肌细胞强阳性表达，部分细胞呈阴性或弱阳性表达，血管内皮及平滑肌细胞表达弱阳性，间质表达阴性；在4℃放置，随时间延长，缺血心肌组织VEGF阳性表达有减弱趋势，至10d时缺血心肌组织仍可见VEGF在少许心肌细胞胞浆内呈弱阳性表达。在4℃放置10d以内，缺血心肌和正常心肌标本之间VEGF阳性表达具有极显著性差异。结论VEGF能耐受一定程度自溶及腐败的影响，其免疫组化检测对于判断死后4℃放置10d以内的尸体是否出现过心肌缺血具有一定意义。     

急性心肌缺血早期碱性纤维细胞生长因子的免疫组化研究

采用免疫组织化学方法，对大鼠急性心肌缺血早期不同时间心脏不同区域碱性成纤维细胞生长因子的变化进行了研究。结果发现心肌缺血３０ｍｉｎ心肌局部即可出现ｂＦＧＦ阳性表达，并且随着缺血时间的延长期的阳性表达的强度也有所增加。图像分析处理结果表明，缺血３ｈ其表达水平达到高峰（５５．２６±１４．７５），同于对照组（７．２７±２．４９），而与缺血边缘区域（５３．０８±１４．２６）和下沉区域（５３．７９±１５．７     

急性心肌缺血早期细胞膜糖蛋白表达的研究

目的 探测急性心肌缺血早期细胞膜糖蛋白 (凝集素受体 )表达特点。方法 应用免疫组化法（ S－ P法）对 32只 SD大鼠急性心肌缺血早期不同时间心肌细胞膜糖蛋白用 6种凝集素进行探测。结果 心肌缺血 15min时,心肌局部可出现花生凝集素（ PNA）染色阳性,并且随着缺血时间的延长其阳性表达面积明显增加。缺血 2h其表达水平达到高峰 ,呈弥漫性染色阳性,明显高于对照组, 2h后,心肌缺血区域 PNA受体的表达开始出现下降趋势。其它凝集素染色较为分散,尚待进一步研究。结论 心肌缺血,心肌细胞膜 呈现 D－半乳糖链改变。     

急性心肌缺血再灌注HSP70及c-Fos的免疫组织化学研究

运用免疫组织化学方法 ,观察心肌缺血后不同时间再灌注HSP70及Fos蛋白在心肌组织不同区域表达的规律 ,为心肌缺血 /再灌注损伤所致心性猝死的法医学诊断提供形态学依据。结扎大鼠左冠状动脉前降支建立急性心肌缺血 /再灌注模型 ,取缺血区域 (左冠脉前降支供血区 )及非缺血区 (右心室 )心肌组织。结果显示 :对照组正常心肌组织无Fos蛋白及HSP70表达。Fos蛋白在心肌缺血 15min再灌注 0 5h后即在缺血区域表达 ,随着再灌注时间延长其表达增强 ;非缺血区域 1h始有表达 ,缺血区域表达明显强于非缺血区域。HSP70在心肌缺血区域再灌注 1h后始有表达 ,随着再灌注时间延长其表达增强 ;非缺血区域心肌 2h始有表达 ,且明显弱于缺血区域。同时发现再灌注早期HSP70及Fos均先于心肌内层表达 ,随着时间延长其表达向心肌外层扩展。Fos在再灌注 0 5h时主要在心肌内层表达 ,1h时已扩展到心肌全层 ,4h时其心肌外层表达明显强于心肌内层。HSP70在再灌注 1、 2h时主要在心肌内层表达 ,4、 6h时表达扩展至全层心肌。心肌缺血 /再灌注早期不同时间HSP70及Fos表达有不同的区域性及强度 ,此可为心肌缺血 /再灌注的早期诊断提供一项新的辅助诊断依据     

急性心肌缺血再灌注时Bax的免疫组织化学研究

目的 为心肌缺血／再灌注损伤所致心性猝死的法医学诊断提供形态学依据，方法 运用免疫组织化学方法，研究Bax蛋白在心肌组织中不同区域的表达。结果 对照组正常心肌组织无Bax蛋白表达。Bax蛋白再灌注0．5h后即可在缺血区域表达，且表达主要在心肌内层。再灌注1h后可观察到Bax蛋白不仅表达于心肌内层且已经扩展至心肌的全层。再灌注2h发现心肌外层表达明显强于心肌内层，随着再灌注时间的延长可以发现Bax蛋白的表达逐渐减弱。结论 在急性心肌缺血再灌注中，Bax基因对心肌细胞凋亡的发生有着重要的作用，且可以作为心肌缺血再灌注的早期诊断提供一项辅助诊断依据。     

大鼠心肌急性缺血再灌注NF-кB P65和caspase-3的表达

目的观察大鼠急性心肌缺血再灌注后NF-кBP65和caspase-3在心肌中表达的规律,为心肌急性缺血早期死亡的法医学鉴定提供科学证据。方法运用免疫组化和图像分析技术观察66只SD大鼠心肌缺血再灌注后NF-кBP65和caspase-3蛋白在不同实验组中的表达规律。结果心肌缺血组缺血区域心肌组织缺血5min就可见NF-кBP65和caspase-3蛋白表达,并随缺血时间延长表达逐渐增强;而非缺血区域心肌组织仅见低水平表达或不表达;但两种蛋白(两者)并非在缺血区域心肌同一部位表达,也不是在心肌细胞内的同一部位表达;caspase-3主要在心肌细胞浆表达,而кBP65既在心肌细胞浆表达,也在心肌细胞核中表达。心肌缺血再灌注组(在)心肌缺血5min~1h内,再灌注与否并不影响这两种蛋白的表达。正常对照组未见这两种蛋白表达。结论心肌缺血再灌注时,心肌组织中有NF-кBP65和caspase-3蛋白的表达,这两种蛋白在心肌中的表达可视作诊断早期心肌缺血的参考指标。     

早期心肌缺血心肌细胞凋亡的实验研究

探讨早期心肌缺血心肌细胞凋亡的意义。采用DNA缺口末端标记法 (TUNEL)对大鼠实验性心肌缺血早期 (6h内 )不同时间缺血损伤区心肌细胞凋亡的情况进行观察。结果 :缺血 1h在缺血区域发现少数散在的凋亡阳性细胞 ,3h达高峰 ,随后下降。正常区域未发现凋亡细胞。缺血边缘区域也在缺血 1h局部开始出现心肌细胞凋亡 ,并随缺血时间延长心肌细胞凋亡指数增加 ,缺血 5h达高峰。表明凋亡是早期缺血性心肌细胞损伤的主要方式 ,心肌凋亡检测可望为早期心肌梗死的死后诊断提供一个灵敏客观的新方法。     

VEGF在早期心肌梗死死后诊断中的应用

运用免疫组化方法和图像分析与统计学处理系统 ,对人体心脏标本VEGF的表达进行定量研究。结果显示 :心肌梗死组 2 4例心脏标本心肌细胞膜及血管内皮细胞膜均可见棕黄色VEGF强阳性染色 ,有些胞浆也呈阳性 ,尤以心肌梗死灶周围区域心肌细胞为甚 ;在可疑梗死组 2 1例中 ,19例心肌细胞膜及血管内皮细胞膜VEGF强阳性 ,2例为弱阳性 ,未见阴性 ;在正常心脏对照组 16例中 ,仅 1例见心肌细胞膜及血管内皮细胞膜散在棕黄色VEGF弱阳性 ,其余均为阴性。图像分析与统计学处理结果表明 ,对照组VEGF阳性指数 ( 0 3 0± 0 10 )明显低于心肌梗死组 ( 12 46± 3 2 6,P<0 0 1)和可疑梗死组 ( 11 70± 3 5 6,P <0 0 1) ,后两组之间阳性指数无明显差异 (P >0 0 5 )。提示运用免疫组化染色方法结合图像分析处理技术定量检测心肌局部VEGF的表达可望作为因早期心肌缺血导致心脏性猝死死后诊断较为客观的病理形态学指标之一。     

Primary study of vascular endothelial growth factor immunohistochemical staining in the diagnosis of early acute myocardial ischemia

The expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) in the model of rat early acute myocardial ischemia was studied by Strept-Avidin-Biotin-Peroxidase Complex (SABC) immunohistochemical staining. After ligating the anterior descending branch of the left coronary artery, an initial rapid (30min) positive expression of VEGF in myocardial ischemic areas was observed, the intensity of positive expression of VEGF increased with the continuation of myocardial ischemia. After 5h infarction, the strongly positive myocytes of SABC-VEGF staining were predominantly limited to perimyocardial infarction areas. No positive expression of VEGF was found in the control group. These findings suggested that SABC-VEGF method could give a sensitive, specific, simple and objective morphologic evidence to the diagnosis of sudden cardiac death caused by acute early myocardial ischemia.     

An immunohistochemical study of basic fibroblast growth factor in early acute myocardial ischemia

With the use of immunohistochemistry, the expression of basic fibroblast growth factor (bFGF) in early acute myocardial ischemia of rats was studied. It was observed that there was an initial (30 min) rise in bFGF expression in limited ischemic myocardium areas and perimyocardial ischemia areas. The grade of expression of bFGF increased with the continuation of ischemia. The results of image analysis and statistical process suggested that the expression of bFGF reach a high level in ischemic myocardial areas after three hour's of ischemia, significantly higher than in control group and in group B1, but no significant difference in pericardial ischemia areas and normal areas of the same group. In summary, early acute myocardial ischemia is accompanied by rapid and prolonged increase in expression of bFGF with characteristic spatial and temporal kinetic. This finding suggests that the immunohistochemical staining of bFGF provide objective morphologic evidence for the diagnosis of early myocardial ischemia.     

Study on expression of the glycoprotein in myocardial cell membrane of the rat's early myocardial ischemic

OBJECTIVE: To explore expression of the glycoprotein in early myocardial ischemic. METHODS: The glycoprotein changes occurred at the early acute cardiac ischemic area induced experimentally by ligation of left coronary artery of 32 SD rats. 6 lectins were measured by means of immunohistochemical methods. RESULTS: Positive staining of PNA could be observed in ischemic area at 5 min after ischemia, and the positive area increased with the prolongation of ischemic period. It became the strongest for 2 h and then decreased. CONCLUSION: This experiment proved that myocardial cell membrane in ischemia expressed D-galactose. This may be of some value in forensic medicine practice.     

心肌缺血再灌流损伤HSP70 mRNA原位杂交研究

目的观察家兔早期缺血再灌流损伤心肌组织热休克蛋白70 mRNA的表达变化,为心性猝死的法医病理学诊断寻找新的方法.方法建立家兔心肌缺血再灌流损伤模型,通过原位杂交技术观察研究.结果心肌缺血15min再灌流30min后,缺血区HSP70 mRNA阳性反应增强,阳性颗粒均匀散布于心肌全层,随着缺血时间的延长,阳性反应细胞数目逐渐增多,染色加深.结论HSP70 mRNA原位杂交检测可望为早期心肌缺血再灌流损伤的死后诊断提供新方法.     

Cathepsin-L在缺血心肌中的表达

目的检测cathepsin-L(CTSL)在大鼠早期缺血心肌中的表达变化,并探讨其法医学意义。方法建立大鼠早期心肌缺血模型,设置早期缺血组(early ischemic myocardium,EIM)、非缺血组(non-ischemic myocardium,NIM)、假手术组以及空白对照组,采用real-time PCR方法检测大鼠缺血后15min,30min,1h和2h CTSL mRNA的表达量,并进行组内和组间比较。收集心源性猝死者缺血心肌和机械性损伤致死者正常心肌样本,采用免疫组化染色方法观察心肌组织中CTSL蛋白表达。结果 EIM组CTSL mRNA表达量与NIM组、假手术组及空白组相比,在15min时无统计学意义(P>0.05),在30min、1h和2h时分别升高1.4、3.1和4.5倍(P<0.05);其余3组间差异无统计学意义(P>0.05)。观察10例冠脉狭窄程度Ⅲ～Ⅳ级的心源性猝死(SCD)者缺血心肌,CTSL表达增强。结论大鼠心肌缺血后早期即可检测到CTSL mRNA的升高,并在SCD冠脉狭窄死者缺血心肌中高表达,提示CTSL可作为心肌缺血与SCD的参考指标。     

大鼠急性心肌缺血后心肌NF-kB的检测及其法医学意义

目的检测大鼠急性心肌缺血后核因子-kB(NF-kB)在心肌组织内的变化,探讨其在心肌早期缺血死后诊断中的法医学意义。方法30只大鼠随机分为正常对照,缺血0.5h,1h,2h,4h,8h共6组,每组5只建立大鼠急性心肌缺血模型,用免疫组化染色技术(S-P法),观察不同时间缺血心肌中NF-kB阳性着色,并应用图像分析系统进行定量分析。结果大鼠心肌缺血30m in,心肌细胞核出现散在NF-kB阳性染色;缺血60m in,心肌阳性染色细胞核增多;4h达高峰;8h组开始下降;免疫组化染色定量检则的阳性单位:缺血2h、4h、8h分别为20.042±1.084、22.028±3.452和20.524±1.595;正常对照组未见核阳性反应。结论大鼠心肌缺血8h内,心肌细胞核NF-kB阳性染色呈现一定规律性变化,对早期急性心肌缺血的死后诊断具有法医学意义。