冷应激对雏鸡下丘脑NO代谢的影响

为探明冷应激对雏鸡下丘脑NO代谢的影响,以公雏鸡为实验动物,进行急性(1 h、6h及12 h)与慢性(5 d1、0 d及20 d)冷应激处理(12℃±1℃),检测了下丘脑NO含量i、NOS与T-NOS活性以及iNOS基因mRNA的表达水平。结果,急性应激时,NO含量i、NOS与T-NOS活性以及iNOS基因mRNA的表达水平均随应激时间的延长逐渐降低;慢性应激时,NO含量i、NOS与T-NOS活性以及iNOS基因mRNA的表达水平均随应激时间的延长逐渐升高。结果表明,冷应激可导致下丘脑NO的代谢发生改变,不同程度的冷应激对NO代谢产生的影响也不同。     

冷应激对雏鸡下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴的影响

为探明冷应激对雏鸡下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴的影响,对15日龄公雏鸡进行了急性(15 min、1h、3 h、6 h、12 h和24 h)与慢性(5 d1、0 d和20 d)冷应激处理(12℃±1℃),检测了雏鸡下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)mRNA的表达水平及血清促肾上腺皮质激素(ACTH)、醛固酮(ALD)及皮质醇(CORT)的含量。结果显示,急性应激时,随着应激时间的延长,下丘脑CRH mRNA的表达水平先略升高,随后下降,ACTH、COTR及ALD含量均呈现上升趋势,在3 h时开始下降,并处于稳定状态。慢性应激时,下丘脑CRH mRNA的表达水平呈上升趋势,ACTH含量呈缓慢下降趋势,COTR与ALD含量均呈上升趋势。结果表明,冷应激可以使下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴的激素分泌发生改变,而且不同程度的冷应激对同一激素也会产生不同的影响。     

实验性免疫应激对雏鸡促肾上腺皮质激素的影响

根据鸡新城疫Ⅰ系疫苗(ND Ⅰ)免疫剂量将2周龄健康雏鸡200只随机分成4组,检测血液中促肾上腺皮质激素(ACTH)的动态变化.结果免疫接种后ACTH从第1 d开始上升,第5 d达到高峰,此时与对照组相比差异极显著(P＜0.01),第7 d开始下降,第21 d仍极显著高于对照组(P＜0.01).     

低硒对雏鸡红细胞免疫功能和红细胞总数及血红蛋白含量的影响

选用1日龄艾维茵肉鸡120只,随机分成2组,硒缺乏组日粮由购自西昌冕宁的玉米、黄豆和小麦配制而成,硒含量为0.034 2mg/kg,以亚硒酸钠为硒源使日粮硒水平达0.2mg/kg作为对照日粮,试验期6周,观察低硒对红细胞免疫功能、红细胞总数和血红蛋白含量影响的动态变化。结果显示,低硒日粮导致雏鸡红细胞C3b受体花环率、红细胞数量和血红蛋白含量降低,IC花环率与对照组差异不显著。表明雏鸡长期饲喂低硒日粮可导致原发性红细胞免疫功能损伤。     

PCV2感染对猪MCP-1和IL-8 mRNA表达的影响

将猪圆环病毒2型(PCV2)BF株经口、鼻接种40日龄健康普通仔猪,于接种后不同时间宰杀,收集肺泡巨噬细胞(PAM),同时设立对照。用竞争PCR技术测定趋化性细胞因子IL-8和 MCP-1 mRNA水平,分析PCV2感染对其mRNA表达的影响。结果显示,与对照组相比,在 PCV2感染后第7 d,IL-8 mRNA水平下降至最低,随后迅速上升,至第14 d时达到高峰,而后快速下降,但仍维持较高水平;MCP-1 mRNA水平在攻毒后第3 d下降至最低,之后逐渐上升,至第14 d时达到高峰,而后下降,第21 d以后恢复正常。结果表明,PCV2感染初期可导致PAM趋化性细胞因子IL-8和MCP-1基因的转录明显下调。     

驱赶应激对药物保定兰角马和白斑脸羚的影响

随机选取健康兰角马10例、白斑脸羚28例,采用保定药物保定2号制动,按受驱赶和安静处置2种方法分组,从诱导、保定、苏醒、血液学及血液生化学等方面进行了比较.结果驱赶组动物体温均显著升高(P＜0.05),驱赶组兰角马的呼吸频率显著加快(P＜0.05);白斑脸羚苏醒后的复睡反应剧烈(P＜0.05);兰角马中性白细胞显著增多,淋巴细胞显著减少(P＜0.05);驱赶组兰角马和白斑脸羚被击倒时间比安静组均有所缩短,血液生化指标虽有变化,但两者均无差异(P＞0.05).     

淫羊藿-蜂胶佐剂对雏鸡和小白鼠腹腔巨噬细胞活性的影响

用淫羊藿蜂胶佐剂０．２ｍＬ和０．４ｍＬ分别对３日龄雏鸡皮下注射,并于２４日龄时以相同剂量重复注射１次,以注射后不同时间检测鸡腹腔巨噬细胞的吞噬活性;对２８日龄小白鼠隔日皮下注射淫羊藿蜂胶佐剂０．２ｍＬ,并以环磷酰胺为对照。试验结果表明,淫羊藿蜂胶佐剂能显著提高雏鸡腹腔巨噬细胞的吞噬活性,其中０．４ｍＬ剂量组明显优于０．２ｍＬ剂量组;对小白鼠腹腔巨噬细胞的细胞毒效应能明显增强,并能拮抗环磷酰胺的免疫抑制作用。     

香菇β-葡聚糖对雏鸡脾和胸腺淋巴细胞以及腹腔巨噬细胞一氧化氮产生的影响

为探讨香菇β-葡聚糖(lentinan,LTN)对雏鸡免疫增强作用的机理,从体内和体外2种途径研究了LTN对雏鸡脾和胸腺淋巴细胞以及腹腔巨噬细胞NO产生的影响。体内试验的4组21日龄雏鸡分别腹腔注射1 g/L的LTN、10 g/L的LTN、20 g/L的硫乙醇酸钠和生理盐水各2 mL,3 d后测脾和胸腺淋巴细胞以及腹腔巨噬细胞产生NO的量;分别以50、100、200、400 mg/L的LTN刺激经硫乙醇酸钠活化的巨噬细胞,测定其NO的生成量。结果显示,1 g/L和10 g/L的LTN均能刺激体内脾和胸腺淋巴细胞以及腹腔巨噬细胞产生NO;不同浓度的LTN均能使体外巨噬细胞NO的生成量增加。证实,适度促进免疫细胞NO的生成可能是LTN的主要免疫作用机理之一。     

旋毛虫ES抗原对小鼠巨噬细胞TLR2/4mRNA表达的影响

为探讨旋毛虫ES抗原对RAW264.7细胞TLR2/4mRNA表达的影响,分别取经0、2、5、15、30、45μg/mL ES抗原作用24h的RAW264.7细胞和用15μg/mL ES抗原作用0、3、6、12、18、24h后的RAW264.7细胞,采用半定量PCR方法检测TLR2和TLR4mRNA的表达水平变化。结果显示,随着ES抗原浓度的升高,TLR2/4mRNA的表达量逐渐上升,15μg/mL ES抗原组与空白对照组相比差异显著(P<0.05)。在15μg/mL ES抗原作用24h内,随着作用时间的延长,TLR2/4mRNA的表达量逐渐上升,作用18h后的表达水平升高,且与空白对照组差异显著(P<0.05)。证实,ES抗原可刺激RAW264.7细胞表面受体TLR2/4表达升高,且存在一定的剂量和时间效应。     

热应激对猪睾丸Spo11表达与定位及其诱导DNA双链断裂的影响

为探究热应激对猪睾丸Spo11、DNA双链断裂分子标记γH2AX和DNA重组修复分子标记Rad51表达和定位的影响,笔者构建了环境热应激（37℃环境温度,每日加热3 h,连续7 d）和睾丸局部热应激（42℃,局部阴囊加热1 h）的猪动物模型,未处理组猪睾丸作为对照。通过免疫组织化学染色、Western-blot和qRT-PCR等方法检测Spo11、Rad51和γH2AX在猪睾丸中的表达和定位。免疫组化结果显示,对照组生精小管内可见各级生精细胞,Spo11和Rad51主要定位于初级精母细胞的细胞核,γH2AX免疫阳性染色见于初级精母细胞的细胞核。与对照组相比,环境热应激组初级精母细胞的细胞核Spo11和γH2AX免疫阳性着色无明显差异,Rad51免疫阳性着色较弱;局部热应激组初级精母细胞的细胞核Spo11、Rad51和γH2AX免疫阳性着色较强,细胞定位未发生变化。Western-blot和qRT-PCR结果显示,与对照组相比,环境热应激组Spo11蛋白、m RNA和γH2AX蛋白水平均无显著差异,Rad51蛋白和m RNA表达水平均显著降低（P<0.01）;局部热应激组Spo11...     

阿维菌素对体外培养王鸽神经细胞内游离钙离子浓度及CaM mRNA表达的影响

提取美国王鸽8～9日龄鸽胚脑神经细胞进行体外培养,按照阿维菌素(AVM)染毒的剂量分成4组,分别为0ìg/L(Ⅰ组)、2.5 ìg/L(Ⅱ组)、5 ìg/L(Ⅲ组)和10 ìg/L(Ⅳ组),染毒24 h后,用MTT法进行细胞活性检测,应用荧光探针法检测细胞内游离Ca2+浓度,应用半定量RT-PCR法检测细胞内CaM mRNA的表达水平.结果显示,AVM能够引起王鸽神经细胞内游离Ca2+浓度升高,CaM mRNA表达水平下降.表明AVM能影响王鸽体外培养神经细胞内的钙稳态.     

唾液酸和糖胺多糖在鸡慢性氟中毒早期诊断中的意义

为探讨唾液酸(SA)、糖胺多糖(GAG)在鸡慢性氟中毒早期诊断中的意义,以期筛选出诊断慢性氟中毒早期的敏感指标,选用250只1日龄罗曼蛋鸡,随机分为5组,每组50只,饲喂相同的全价日粮.Ⅰ组为正常对照组,Ⅱ～Ⅴ组在日粮中添加不同水平的氟化钠,使日粮中氟含量分别为500、1000、1500和2000mg/kg,试验期为150 d,每隔30 d采集血样1次,测定血清中氟、SA、GAG的含量,观察试验鸡的临床表现.结果,试验成功地复制出不同程度的鸡慢性氟中毒模型;饲料中所加氟量与血清中氟含量呈明显的剂量-效应关系;氟中毒组鸡血清中SA含量均低于对照组,而血清中GAG含量则均高于对照组;血清中氟含量与SA含量呈显著的负相关(r=-0.773,P＜0.01),与GAG含量则呈显著的正相关(r=0.798,P＜0.01);各中毒组SA/GAG值与正常值相比降低30%以上.由此可见,氟中毒可明显影响机体内SA、GAG的代谢,血清中SA、GAG含量的变化可灵敏地反映氟对机体的损伤情况.可将SA/GAG值降低30%或更多作为鸡慢性氟中毒的敏感、可靠的早期诊断指标.     

雌激素对大鼠小脑中Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

采用免疫组织化学超敏SP法检测摘除卵巢及用外源性17β-雌二醇治疗后SD大鼠小脑中Bcl-2和Bax蛋白表达的变化。结果显示,摘除双侧卵巢后,SD大鼠小脑皮质及深层核团中Bcl-2的表达有不同程度的降低,而Bax的表达出现不同程度的上升;给予外源性17β-雌二醇治疗后,2种蛋白的比例基本恢复正常。表明,雌激素能够下调小脑皮层及小脑深层核团中Bax蛋白的表达,上调Bcl-2蛋白的表达,对小脑神经元具有保护作用。     

醋酸镉对大鼠原代肝细胞氧化应激的影响

为研究镉对肝细胞的毒性,用两步灌流法获得大鼠肝细胞,并将其暴露于浓度为2.5、5.0、10.0μmol/L的醋酸镉中12 h,测定了细胞存活率,肝细胞乳酸脱氢酶(LDH)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)的释放,及细胞内谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽-S转移酶(GST)、谷胱甘肽还原酶(GR)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性以及还原型谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量的变化.结果表明.细胞存活率显著下降(P<0.01);LDH、ALT和AST的释放量均增加,部分镉剂量组与对照组差异极显著(P<0.01);细胞内GSH含量下降,5.0和10.0 μmol/L剂量组与对照组差异均极显著(P<0.01),GSH-Px、SOD和CAT活性升高,部分剂量组与对照组差异极显著(P<0.01);MDA含量升高,10.0μmol/L剂量组与对照组差异显著(P<0.05);其余指标与对照组差异不显著(P>0.05).证实,醋酸镉可致肝细胞损伤,并且氧化应激起了重要作用.     

胸腺九肽对鸡脾淋巴细胞增殖转化及IL-2基因表达与分泌的影响

采用MTT比色法、相对半定量RT-PCR法和放射免疫测定(RIA)法研究了不同浓度的胸腺九肽对离体培养的鸡脾淋巴细胞增殖转化I、L-2基因表达与分泌的影响。结果表明,用10 ng/mL和1 ng/mL胸腺九肽处理鸡脾淋巴细胞8 h后,能显著增加由ConA诱导的淋巴细胞增殖转化反应,显著提高IL-2基因的表达水平以及细胞培养上清液中的IL-2含量(P<0.05);100 ng/mL的胸腺九肽虽有增强脾淋巴细胞增殖转化反应以及提高IL-2基因表达和分泌能力的趋势,但与对照组无显著差异(P>0.05)。提示,胸腺九肽能增强鸡脾淋巴细胞的增殖转化反应,并主要在基因转录水平上促进IL-2的合成与分泌,其作用与剂量大小有关。     

代谢产物对体外培养新生犊牛肝细胞胰高血糖素受体mRNA丰度的影响

为阐明代谢产物非酯化脂肪酸(NEFA)、β-羟丁酸(BHBA)和葡萄糖(GLU)在乳牛肝糖代谢、脂代谢中的调控作用,应用实时荧光定量PCR法观察了NEFA、BHBA和GLU对体外培养新生犊牛肝细胞胰高血糖素受体(GLNR)mRNA丰度的影响。结果,随着培养液中NEFA、BHBA和GLU浓度的升高,GLNR mRNA的表达量逐渐增加(P<0.01)。表明,代谢产物NEFA、BHBA和GLU直接调控乳牛肝胰高血糖素受体mRNA的表达。     

生糖底物和神经内分泌因子对新生犊牛肝细胞PEPCK-C mRNA表达水平的影响

在原代单层培养的新生犊牛肝细胞培养液中分别加入不同浓度丙酸钠、丙酮酸钠、胰岛素、胰高血糖素和瘦蛋白,培养12 h后,应用半定量RT-PCR方法检测体外培养的肝细胞PEPCK-C mRNA的丰度。结果显示,随着丙酸钠、丙酮酸钠浓度的升高,肝细胞PEPCK-C mRNA的丰度均先升高后下降(P<0.01);随胰岛素、胰高血糖素和瘦蛋白浓度的升高,肝细胞PEPCK-C mRNA的丰度分别剂量依赖性地降低、升高(P<0.01)和无显著变化。表明,丙酸钠、丙酮酸钠能通过上调体外培养的新生犊牛肝细胞PEPCK-C mRNA的表达而促进肝糖异生代谢,但上调作用是有限的;胰岛素能通过下调体外培养的新生犊牛肝细胞PEPCK-C mRNA的表达而抑制肝糖异生代谢,且下调作用呈剂量依赖性;胰高血糖素与胰岛素作用刚好相反;瘦蛋白未起直接的调节作用。     

猪瘟流行毒株E2基因的克隆及其杆状病毒表达载体的构建

用RT PCR方法扩增了陕西省近期猪瘟流行野毒株E2基因 ,并将其克隆到 pMD 18 T载体 ;经转化、筛选、鉴定后 ,测定了核苷酸序列 ,根据C株、Brescia株和Alfort株确定起始氨基酸三联体的正确位置后进行 gp5 5氨基酸序列推导 ,并进行同源性比较。结果表明 ,该猪瘟流行毒株的E2核苷酸序列与C株、Brescia株和Alfort株的E2核苷酸序列同源性分别为 81.9%、83.4 %和83.5 % ;相应地 ,gp5 5氨基酸同源性分别为 94 .8%、95 .6 %和 95 .3%。将此E2基因亚克隆到杆状病毒转移载体 pFastBacHTb后获得了重组质粒 pFBHT E2 ,进而转化入含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中 ,发生转座作用 ;经抗性及蓝白斑筛选得到了含E2基因的重组DNA ,将其命名为rBacmid E2。此研究为进一步在昆虫细胞中表达E2基因、开发研制猪瘟基因工程疫苗奠定了基础。