大鼠死后脑组织的傅里叶变换红外光谱变化

目的应用傅里叶变换红外（Fourier transform infrared．FTIR）光谱技术分析大鼠死后脑组织随死亡时间推移的化学变化过程,为死亡时间推断的研究提供新的途径与数据。方法大鼠断颈处死后置于（30±2）℃环境下,在不同时间点提取大鼠脑皮质．运用FTIR光谱仪检测不同化学基团的变化。结果随着死亡时间的推移,大鼠脑组织FTIR光谱的主要吸收峰峰位没有明显变化．而其峰强有明显差异：（1）与核酸有关的谱带的相对峰强呈明显下降趋势;（2）酰胺Ⅰ、Ⅱ的峰强比（I1647/I1541）呈下降趋势;（3）1456和1398cm^-1谱带的峰强各自呈下降和上升趋势;（4）2852、2871、2923和2958cm^-1谱带的峰强相对于1647cm^-1而言．呈上升趋势。结论脑组织可以作为FTIR光谱技术分析死亡时间的适用检材。     

大鼠死后管家基因mRNA稳定性及其时序性降解与PMI相关性研究

目的研究脑组织及骨骼肌内β-actin、GAPDH、RPL32、PKG1、SDHA、RPL13、HPRT、TBP、YWHAZ死后稳定性及其相对表达量与死亡时间(PMI)的相关性。方法取健康成年SD大鼠33只,依据据死亡时间不同随机分为11组(0h、1h、3h、6h、12h、24h、2d、4d、8d、16d、24d),分别在各时间点取大鼠胫骨前肌及脑组织约50mg,提取各组织总RNA,利用RT-q PCR技术检测9种管家基因的m RNA相对表达量。运用ge Norm、Norm Finder和Best Keeper软件对基因稳定性进行评价,利用spss软件对内参标准化的m RNA指标进行回归分析。结果脑组织及骨骼肌中均为HPRT稳定性最高,适合用于本研究的内参基因。脑组织中SDHA、RPL32及TBP 3种指标的相对表达量变化与PMI有一定的线性关系。骨骼肌中m RNA指标相对表达量与PMI之间没有显著的相关性。结论脑组织及骨骼肌是较适宜推断晚期死亡时间的检材。脑组织中SDHA、RPL32及TBP 3种m RNA的相对表达量变化与PMI有一定的线性关系,有望成为推断PMI的辅助指标。     

Estimation of postmortem interval from hypoxic inducible levels of vascular endothelial growth factor

Estimation of the postmortem interval (PMI) is one of the most important tasks in forensic medicine. Five autopsy organ tissues such as brain, lungs, heart, liver, and kidneys were taken at the time of forensic autopsy from 19 known PMI cases with a range of postmortem intervals ranging from 1 to 120 h (the mean was 25.81 h), and the time-course of vascular endothelial growth factor (VEGF) expression was measured. The human hepatoma-derived Hep 3B cell line was used as a control. The levels of VEGF increased linearly with the PMI up to 20 h in lung (r = 0.95 and in kidney (r = 0.89), and up to 15 h PMI in liver (r = 0.88). The VEGF levels fell after 24 h PMI, and then remained stable. In brain, the levels of VEGF started to increase after 24 h PMI and increased linearly with PMI up to 40 h in brain (r = 0.94) and then begin to fall. In heart, there was no clear correlation between the PMI and VEGF level. Some variations occurred in selected cases, such as the infant and asphyxial deaths. In conclusion, measurement of hypoxia-inducible levels of VEGF in various body organs appears to be a useful method of estimating the PMI up to 24 h in forensic medicine and pathophysiology. This method is also probably applicable in ischaemia in clinical and basic medicine.     

Corneal‐Smart Phone: A novel method to intelligently estimate postmortem interval

The changes of postmortem corneal opacity are often used to roughly estimate the postmortem interval (PMI) in forensic practice. The difficulty associated with this time estimate is the lack of objective means to rapidly quantify postmortem corneal changes in crime scenes. This study constructed a data analysis model of PMI estimation and implemented an intelligent analysis system for examining the sequential changes of postmortem corneal digital images, named Corneal‐Smart Phone, which can be used to quickly estimate PMI. The smart phone was used in combination with an attachment device that provided a darkroom environment and a steady light source to capture postmortem corneal images. By segmenting the corneal pupil region images, six color features, Red (R), Green (G), Blue (B), Hue (H), Saturation (S), Brightness (V) and four texture features Contrast (CON), Correlation (COR), Angular Second Moment (ASM), and Homogeneity (HOM), were extracted and correlated with PMI model. The results indicated that CON had the highest correlation with PMI (R² = 0.983). No intra/intersubject variation in CON values were observed (p > 0.05). With the increase in ambient temperature or the decrease in humidity, the CON values were increased. PMI prediction error was <3 h within 36 h postmortem and extended to about 6–8 h after 36 h postmortem. The correct classification rate of the blind test samples was 82%. Our study provides a method that combines postmortem corneal image acquisition and digital image analysis to enable users to quickly obtain PMI estimation.     

家兔死后心肌酰胺A带的傅里叶变换红外光谱图像分析

目的 应用傅里叶变换红外光谱成像系统研究家兔心肌酰胺A带变化与死亡时间的关系.方法 将32只家兔处死后取出心脏,20℃保存,于48h内不同时间点取样并制作切片.用傅里叶变换红外光谱成像系统绘制酰胺A带图像,分析研究死后酰胺A带阳性与阴性面积比的变化规律. 结果 48h内随死亡时间(x)的延长,酰胺A带的阳性与阴性面积比...     

大鼠死后皮肤傅里叶变换红外光谱变化与死亡时间的关系

目的运用傅里叶变换红外(Fourier transform infrared,FTIR)光谱技术分析大鼠死后15d内背部皮肤的光谱变化,以此推断死亡时间。方法大鼠麻醉后颈椎脱臼处死,置于温度为25℃、湿度为50%的环境中,分别于不同时间点提取其背部皮肤,收集红外光谱数据,并利用机器学习技术对数据进行分析。结果大鼠死后背部皮肤组织光谱吸收峰的峰位未发生明显改变,其强度随死亡时间延长而发生变化;偏最小二乘(partial least squares,PLS)回归构建的死亡时间推断模型决定系数(R2)为0.92,预测均方根误差为1.30 d。根据模型中的变量投影重要性(variable importance for projection,VIP)指标确定推断死亡时间的贡献波段为1760~1700cm-1、1660~1640cm-1、1580~1540cm-1和1460~1420cm-1。结论应用FTIR技术检测大鼠死后皮肤组织的光谱学改变,为死亡时间推断提供了一种新的思路。     

磁共振波谱技术推测不同温度下的死亡时间

目的利用单体素质子磁共振波谱技术推断不同温度下的死亡时间(postmortem interval,PMI),探讨不受外界环境温度影响下推断PMI的可行性。方法选取24只白兔,分为A组(10℃)、B组(30℃),利用磁共振单体素波谱测定死后0.5、1、2、4、6、8、12、16和24h脑内N-乙酰天冬氨酸(N-acetyl-aspartate,Naa)、胆碱复合物(Choline,Cho)、磷酸肌酸和肌酸(phosphocreatine and creatine,Cr)峰下面积(相对含量)及各代谢物之间相对含量的比值。结果在死后24h内Naa和Cr峰下面积随PMI的延长而减少,Naa/Cr、Cho/Cr随PMI的延长而降低。回归分析:自变量为Naa/Cr的二次多项式方程为:y=0.0019x2-0.803x 1.4498(R2=0.962);自变量为Cho/Cr的二次多项式方程为:y=-0.0024x2 0.926x 1.1777(R2=0.986)。用Naa/Cr的方程推测PMI,当PMI<24h时,平均偏离时间为2.10～37.90min,用Cho/Cr的方程推测PMI,当PMI<24h时,平均偏离时间为1.69～40.87min。结论Naa/Cr、Cho/Cr的死后变化与时间呈强相关性且受环境温度影响不大,可用于不同温度下PMI推断。     

大鼠死后视网膜细胞mRNA降解与死亡时间的关系研究

目的检测死后大鼠视网膜细胞mRNA的降解和死亡时间(PM I)的关系,为死亡时间推断提供新方法。方法应用复合荧光RT-PCR技术,检测死后不同时间(2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28h)大鼠视网膜细胞β-actin、Pgk1和Rp l 4 mRNA水平,以立即处死大鼠作为对照。方差检验比较组间差异,并对所得数据进行回归分析。结果死后28h内,大鼠视网膜细胞β-actin、Pgk1、Rp l 4 mRNA水平均随死亡时间的延长而下降。3个管家基因mRNA的降解与死亡时间的线性拟合回归方程分别为:Yβ-actin=-4436.205Xβ-actin+127581.7(r2=0.976),YPgk1=-1993.884XPgk1+57651.54(r2=0.973),YRp l 4=-1189.791XRp l 4+34533.46(r2=0.955)。结论大鼠死后视网膜细胞mRNA的含量随着死亡时间的延长而逐渐降解,与死亡时间具有相关性。     

小鼠死后脑RNA降解与死亡时间的相关性

目的 探讨小鼠死后不同时间和温度下脑组织β-actin mRNA、18S rRNA的降解规律与死亡时间的关系.方法 将24只健康成年C57BL/6小鼠随机分为2组,每组12只,断颈法处死后分别置于不同的环境温度中(4℃、37℃),恒定环境湿度为80%.分别于死后即刻和0.5、2、6、24、48h取小鼠脑组织进行总RNA...     

死亡大鼠看家基因mRNA时序性降解的组织差异性研究

目的研究死亡大鼠看家基因mRNA时序性降解的组织差异性,评价其用于死亡时间推断的价值。方法SD大鼠20只分为死后0、1、3、5、7d共5组,脊椎脱臼法处死大鼠,提取大鼠心、肝、脾、肺、肾、脑组织,在相应时间段提取RNA,应用一步法RT-PCR技术检测各组织中看家基因GAPDHmRNA和β-actinmRNA的水平,Vilber凝胶图像分析系统测定扩增产物IOD值,SPSS10．0统计软件对数据进行方差分析。结果GAPDHmRNA、β—actinmRNA扩增产物相对灰度与积分光密度值随死后经过时间的延长而逐渐减小,且与死亡时间显著相关,大鼠脾脏和脑组织GAPDHmRNA和β-actinmRNA在死后5d内可检出,心脏和肾脏在死后3d内可检出,而肝脏和肺脏GAPDHmRNA和β-actin mRNA降解较快,仅在死后1d内可检出。结论脑组织和脾脏中mRNA稳定性较好,适用于PMI特别是晚期PMI的推断。除环境温度外,环境湿度也是死亡时间推断中的重要影响因素。     

大鼠死后脑、心肌和肾组织β-actin mRNA的降解与早期死亡时间的关系

目的 研究SD大鼠脑、心肌和肾组织细胞内β-actin mRNA的降解与早期死亡时间的关系,为早期死亡时间的推断寻找新的指标.方法 大鼠处死后置于20℃的环境中,分别于死后不同时间点提取脑、心肌、肾的总RNA,采用实时荧光定量RT-PCR方法检测总RNA中β-actin mRNA的水平(Ct值),分析死后经过时间与Ct...     

不同环境条件下大鼠死后皮肤大体和组织学改变

目的研究观察大鼠在不同环境条件下死后不同时间其皮肤大体、组织学的改变,为推测较长的死后间隔时间建立实验动物依据。方法观察雌性SD大鼠在不同环境条件下的死后变化,并间隔一定死后时间取皮、染色和镜下观察。结果死后发生骨、软组织分离,A组约需35d,B组需13d。皮肤有形细胞成分和附属器完全分解破坏,A组约20d,B组7d。胶原纤维在A组死后40d（B组12d）仍有部分保留完整。结论环境温度差异是造成A、B两组发生死后改变时程不同的主要因素,利用皮肤大体、组织学改变可望较系统和准确的推测晚期死亡时间。     

脑组织与法医学死亡时间推断

目前，通过脑组织推断死亡时间已经成为法医学领域研究的新热点，大量研究资料表明：死亡时间与脑组织细胞DNA、RNA、ATP含量及脑温度、脑组织血管内皮生长因子等变化有高度相关性。脑CT、MRI、磁共振波谱等检查手段对死亡时间的推断也有帮助。本文对国内外相关文献进行综述，以期为相关研究提供参考。     

不同温度下大鼠脑组织RNA降解与早期PMI的相关性

目的探讨大鼠脑组织8种RNA指标,在不同温度下的表达水平与早期死亡时间(PMI)的相关性。方法将222只SD大鼠随机分为对照组(死后0 h)和4个实验组,实验组断颈处死后分别置于5℃、15℃、25℃和35℃的环境中,于死后1~24 h内9个时间点提取脑组织RNA,利用实时荧光定量PCR技术检测8种RNA指标(β-actin、GAPDH、RPS29、18S rRNA、5S rRNA、U6 snRNA、miRNA-9及mi RNA-125b)的表达水平,ge Norm软件选取合适内参,SPSS软件对内参标准化RNA指标进行回归分析,R软件构建推断PMI的数学模型,另选6只已知PMI的SD大鼠予以验证。结果 5S rRNA、miR-9和mi R-125b表达稳定,可作为内参指标。β-actin和GAPDH具有良好的时序性降解规律,在24 h内随PMI延长不断降解。R软件拟合得ΔCt值随PMI和温度变化的数学模型可用以推断PMI。运用β-actin和GAPDH验证模型的平均误差率分别为14.1%和22.2%。结论β-actin和GAPDH表达水平与PMI和环境温度相关性良好。本研究建立的数学模型可为温度变化条件下的早期PMI推断提供参考。     

家兔玻璃体液间隔多次微量取样方法研究

目的探讨间隔多次微量取样玻璃体液是否可用于死亡时间推断。方法99只家兔分为2大组(I)大组45只,再分为A、B、C、D、E五个小组(每组9只),右眼(实验眼)于死后间隔12h多次取样直至24h(A组)、48h(B组)、72h(C组)、96h(D组)和120h(E组);各小组左眼(对照眼)仅分别于死后24h、48h、72h、96h和120h取样一次。检测Ca2+、Cl-、K+、Na+和P含量,同一取样时间的双眼做配对t检验。(II)大组54只,再分为2小组F组9只,每隔12h双眼交替多次取样直至120h;G组45只,每隔12h一次取样10眼(动物左右眼均编号后随机抽取每次10眼),直至120h;检测Ca2+、K+和Na+,两组差值做t检验及PMI回归方程比较。结果E组K+有差异(P<0.05),其余A~E组双眼物质含量配对t检验均无差异(P>0.05)。F与G组物质含量差值t检验无差异(P>0.05);K+、Na+的PMI线性回归方程的斜率、截距无差异(P>0.05),Ca2+与PMI无相关性。结论控制间隔时间和取样次数,多次微量取样对死后玻璃体液元素含量的规律性变化无显著影响,可以替代传统方法进行死亡时间研究。     

大鼠死后不同时间坐骨神经雪旺氏细胞核DNA的变化

目的探讨大鼠死后不同时间坐骨神经雪旺氏细胞核DNA的变化及其与死亡时间的关系。方法应用Feulgen染色法及计算机图像分析技术,观测大鼠死后即刻至9d坐骨神经雪旺氏细胞核DNA染色变化及其图像分析参数,所得数据进行统计学分析。结果雪旺氏细胞核在死后6-18h细胞核呈紫红色、长椭圆形,轮廓清晰,其长轴方向与坐骨神经走向一致,死后24h着色变淡、着色面积变小,最终完全消失;在6h-9d内目标面积和积分光密度随死亡时间的延长而逐渐减小,且其均值均与死亡时间明显相关,并得出对应的回归方程。结论大鼠死后9d内,其坐骨神经雪旺氏细胞核DNA变化与死亡时间有一定的相关性。     

大鼠死后心肌细胞DNA含量与死亡时间关系的进一步研究

目的研究机体的细胞核内DNA含量与死亡时间的关系。方法本实验通过计算机图像系统,选择核面积、积分光密度等7种参数,研究了15只大鼠心肌细胞在死后25～49h细胞核DNA含量的变化规律。结果心肌细胞DNA含量测定适合相对较长死亡时间的推断。结论应用计算机图像分析技术测量机体死后心肌细胞DNA含量将有可能成为推断死亡时间精确、客观的新方法。     

大鼠死后肌肉总腺苷酸及腺苷酸能荷的时序性变化

目的 测定大鼠死后不同时间双后肢肌肉嘌呤腺苷酸[三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)、二磷酸腺苷(adenosine diphosphate,ADP)、一磷酸腺苷(adenosine monophosphate,AMP)]含量,计算总腺苷酸(total adenine nucleotide...     

家兔急性有机磷中毒死后玻璃体液化学成分的变化趋势

目的 探讨家兔急性有机磷中毒死后不同时间眼玻璃体液化学成分的变化。方法用5％敌百虫制作家兔急性有机磷中毒动物模型,在死后0～72h内不同时间点,采用留置微量重复取样法吸取眼玻璃体液,以全自动生化分析仪测量眼玻璃体液中钾、镁、磷、钙、钠、氯浓度的变化,统计数据进行二项式回归方程拟合分析。结果家兔急性有机磷中毒死后72h眼玻璃体液中钾、镁、磷随PMI延长而逐渐升高,舻分别为0．9818、0．9700、0．9458,与PMI相关性好,其中30h内镁的相关性更好;钙、钠随PMI延长呈降低趋势,砰分别为0．7124、0．7355,相关性较差;氯表现不稳定掣仅为0．0869。结论家兔急性有机磷中毒死后玻璃体液中钾、镁、磷、钙、钠等离子浓度随PMI延长而改变,72h内总体衡量,钾与PMI最具有相关关系。     

家兔死后红细胞内钾钠离子含量与死亡时间的关系

研究了40只家兔死后不同时间心血红细胞内钾钠离子含量变化及红细胞膜Na+－K+－ATP酶活性。发现红细胞内钾离子含量随死亡时间增加呈线性下降（r=-0．829,P＜0．025）。在死后0－48小时,红细胞内钾离子含量与死亡时间显著相关。红细胞膜Na+－K+－ATP酶活性在死后48小时无显著变化。