PCR-DHPLC法检测硅藻SSU基因在溺死鉴定中的应用

目的采用PCR-DHPLC法检测硅藻SSU基因,评估其在溺死鉴定中的应用价值。方法 60只实验兔随机分为生前溺死（水中溺毙）、死后入水（空气栓塞致死后入水）、对照组（空气栓塞致死后不做处理）;溺死人体脏器组织;取各组织检材提取硅藻DNA,PCR扩增硅藻特异的核糖体小亚基（SSU）片段,用琼脂糖凝胶电泳检测、DHPLC检测分析。结果 6份硝酸消化法检测阴性的溺死人体器官组织检材经PCR及琼脂糖凝胶电泳检出5例阳性。生前溺死组肺、肝、肾硅藻检出率分别为100%、90%、85%,死后入水组仅肺检出硅藻（15%）,对照组各组织均为阴性;生前溺死组检出率明显高于死后入水组（P〈0.05）。10份溺死人体器官组织检材采用DHPLC法检出硅藻种类明显多于微波消解-扫描电镜法（P〈0.05）。脏器检出硅藻种类与溺死点水样一致。结论采用PCR-DHPLC法检测硅藻SSU基因,有助于溺死鉴定和溺死地点的推断,具有法医学应用价值。     

浮游生物PCR检测及其在溺死鉴定中的研究进展

溺死鉴定是法医学中的重点和难点之一,目前在相关法医学案件中,主要采用法医病理学尸检与传统硅藻检验等方法综合分析进行鉴定。传统硅藻检验存在灵敏性较低,易于污染等不足。采用PCR法检测尸体不同脏器组织中是否存在水中浮游生物的DNA标记,适用范围广,信息量丰富,灵敏性和特异性较高,有较好的法医学应用前景,有望成为鉴定溺死的新方法。本文对相关研究进展进行综述,为相关研究和实践参考。     

微波消解-扫描电镜联用检测脏器内硅藻

目的介绍一种微波消解-扫描电镜联用检测脏器内硅藻的新方法。方法大白兔30只,随机分为生前溺死组（n=15）和死后溺尸组（n=15）。提取兔肺、肝、肾、股骨骨髓和现场珠江水样,采用建立的微波消解-扫描电镜联用法检测脏器组织和水样中的硅藻,并与硝酸乙醇消解-扫描电镜联用的方法进行比较。结果生前溺死组的兔肺、肝、肾、股骨骨髓组织中大多数观测到与现场珠江水样一致的硅藻,微波消解-扫描电镜联用法检测脏器内硅藻的平均含量分别为：2505.2个/2g肺,18.7个/10g肝,6.5个/10g肾,6.3个/0.5g骨髓;肺与肝、肾、骨髓检出硅藻的阳性比例为86.7%,脏器硅藻检出含量和硅藻检验阳性比例均明显高于硝酸乙醇消解-扫描电镜联用法所测值。死后溺尸组的兔脏器组织均未观测到硅藻。结论微波消解-扫描电镜联用法检测脏器内硅藻,高效、安全、环保,硅藻检验灵敏度高,降低了劳动强度,提高了定性定量分析准确度,且能有效避免污染,在法医学溺死鉴定中具有良好的应用价值。     

微波消解法检验硅藻的实验研究

按常规，水中尸体的法医学检验鉴定必须要做硅藻检验，以确定生前入水溺死或抛尸入水伪装溺死，同时可根据检出硅藻种类判断溺死水域现场。目前，仍沿用传统的有机消化法（硫酸-硝酸破击法）[1-2]。我们自1999年起，应用光纤压力自控密闭微波消解系统（微波消解法）进行了5例溺死案例的硅藻检验，获得较好效果，并与传统的有机消化法进行了比较研究。目前，尚未查见应用微波消解法系统研究人体组织内硅藻检验的实验报道。1材料与方法1.1检材分组检材为2000年8月份吉林地区某较大型水库中发现的溺死尸体。实验组：新鲜的和冷冻的肺边缘组织检…     

硝酸乙醚破机法检测硅藻的研究

脏器中检出硅藻是证明生前溺死的可靠方法.长期以来,法医实验室一直沿用硝酸沙浴法检验硅藻.八三年有人报道采用硝酸酒精法破机,在许多方面优于硝酸沙浴法.本文采用硝酸乙醚法破机,取得了较好的结果.现报道如下.     

检测浮游生物叶绿素相关基因诊断溺死的实验研究

目的评估浮游生物叶绿素相关基因检测用于溺死诊断的价值。方法将18只大白兔随机分为溺死组（n=10）、死后抛尸组（n=6）和对照组（n=2）,各组分别取心血及肺、肝、肾、脑组织,分离浮游生物并提取其DNA,用PCR技术检测叶绿素相关基因EG（EG1和EG2）及SK（SK1和SK2）。同时用硝酸消化法检验肺和肝组织中的硅藻。结果溺死组心血及肺、肝、肾、脑组织中EG1分别检出9、10、9、7和8例阳性,EG2分别检出8、10、7、5和7例阳性;死后抛尸组仅在心血和肺组织中各检出1例EG1阳性;对照组各组织均未检出EG1和EG2。SK1、SK2除在溺死组心血、肺和肾有少数检出外（≤2例）,在其他组未检出扩增产物。硝酸消化法从溺死组肺、肝组织中分别有9例及3例检出硅藻,死后抛尸组仅在1例肺组织中检出。结论浮游生物叶绿素相关基因EG用于溺死诊断的阳性检出率要高于硝酸消化法,在溺死诊断中具有较高的应用价值。     

肺组织硅藻定量分析在实验动物溺死诊断中的应用

目的探讨肺组织硅藻检验在法医学溺死诊断中的应用价值。方法将实验动物随机分为溺死组、死后入水组和陆地死亡组,采用微波消解-真空抽滤-扫描电镜联用的硅藻检验方法对肺组织和溺液硅藻进行定量分析,记录肺组织与溺液硅藻含量的比值(ratio of content of diatoms in lung tissue and drowning fluid,C_L/C_D)。结果溺死组实验兔的C_L/C_D值(5.82±3.50)高于死后入水组(0.47±0.35);溺死组实验猪肺叶不同部位的C_L/C_D值均高于死后入水组;在海水、咸淡水交界、河道淡水及湖泊淡水中,溺死组实验猪的C_L/C_D值均高于死后入水组(P0.05)。动物实验中,C_L/C_D值1.6的案例均来自溺死组。结论 C_L/C_D值是溺死诊断中有较好应用前景的指标。     

强酸消化法和胰蛋白酶消化法检验腐败脏器硅藻的比较研究

目的探讨强酸消化法和胰蛋白酶消化法检验腐败脏器硅藻的优缺点，为法医工作者选择硅藻检验方案提供理论依据。方法用24只健康清洁级家兔，雌雄不限，制作溺死动物模型。室温放置72h后，分别取其肝、肾、肺3种组织各5g，用强酸消化法和胰蛋白酶消化法进行消化，分别比较两种消化方法的消化时间、消化能力和硅藻检出率。结果强酸消化法的消化时间显著短于胰蛋白酶消化法（P〈0．05），强酸消化的消化能力强于胰蛋白酶消化法（P〈0．05），而强酸消化法的硅藻检出率低于胰蛋白酶消化法（P〈0．05）。结论为加快办案效率，可以选择强酸消化法；对于水样硅藻含量低，则选择硅藻检出率相对较高的胰蛋白酶消化法。     

溺死尸体组织与溺液中硅藻种类的一致性研究

目的探讨溺死尸体组织器官与溺液中硅藻的种类的一致性。方法采用微波消解-扫描电镜联用法检测34具已知溺死地点尸体的肝、肾、肺以及溺液中的硅藻,并对各样本检出的硅藻种类进行一致性分析。结果肝组织、肾组织、肺组织和溺液中含量最多的硅藻依次为:舟形藻、菱形藻、针杆藻、直链藻、桥弯藻、小环藻;远端组织器官与肺组织,组织器官与溺液之间的硅藻种类一致率在0.44～0.68;远端组织器官(肝、肾)与肺组织中的硅藻种类一致率无统计学差异(P0.05);组织器官(肝、肾和肺)与溺液中的硅藻种类一致率无统计学差异(P0.05);溺死地点明确案例中有19例(19/34)肺组织和溺液可以被聚为一类。结论组织器官硅藻种类与溺液一致并非溺死诊断的必要条件。     

溺死尸体器官硅藻检出率季节性差异

目的 研究溺水死亡者肺、肝、肾、骨髓等器官淡水硅藻检出率可能存在的季节性差异,为法医学解决水中尸体死因鉴定提供技术帮助与科学证据.方法 收集2009～2011年1、4、7、10月沈阳市浑河中溺死尸体每月(组)各5例;45只家兔分相应月份生前、死后入水组及对照组,分别于当月发现水中尸体后第2天入水,取人及兔肺、肝、肾、股骨骨髓及现场水样备检,应用酶消化法检测各组器官中硅藻数量、种属并与现场水样比对.结果 各组溺死尸体肺中均检出多量硅藻且种属与现场水样一致,春、秋及冬季溺死尸体肝、肾中仅可检出少量体积较小的小环藻等中心纲硅藻,夏季肝、肾及骨髓中均未检出硅藻;各组溺死家兔肺中均检出少量小环藻等中心纲硅藻,肝、肾及骨髓中未检出硅藻.结论 硅藻种群的季节性变化及不同种群硅藻体积的差异可能造成肝、肾等大循环器官中硅藻检出率的季节性差异;仅肺中检出硅藻,肝、肾中硅藻检验结果阴性并不能排除溺死可能.     

宁波甬江水域夏冬季节溺死兔内脏硅藻16SrDNA的鉴定

目的采用PCR法检测夏季7月和冬季12月宁波甬江水域溺死家兔内脏组织中硅藻16SrDNA,评估其在夏季7月和冬季12月溺死鉴定中的应用价值。方法于夏季7月和冬季12月分别选取30只大白兔,总计60只大白兔,随机分为溺死组(n=10)、死后入水组(n=10)、空气栓塞组(n=10)。各组分别提取心、肝、肺、肾组织,应用PCR技术检测上述兔内脏硅藻16SrDNA。结果与死后入水组比较,夏季7月兔溺死组心、肝、肺、肾组织中硅藻16SrDNA检出率明显增高(P<0.05);而冬季12月溺死组仅心、肺组织中检见硅藻16SrDNA,与死后入水组比较无明显差异(P>0.05);夏季7月溺死兔组心、肝、肺、肾组织中硅藻16SrDNA检出率明显高于冬季季12月溺死兔组(P<0.05);夏季7月和冬季12月空气栓塞组心、肝、肺、肾组织中硅藻16SrDNA均未检出。结论宁波甬江水域夏季溺死兔中硅藻16SrDNA检出率高,PCR技术可用于溺死诊断;而冬季硅藻16SrDNA检出率低,运用该技术诊断溺死应慎重。     

基于扫描电子显微镜硅藻人工智能搜索系统检验效能评估

目的 探讨硅藻人工智能（artificial intelligence,AI）搜索系统在溺死诊断中的应用价值。方法 取12例溺死尸体的肝、肾组织进行硅藻检验,应用扫描电子显微镜获得视场图片,分别在硅藻AI搜索系统的0.5、0.7和0.9阈值下进行硅藻检测及人工识别,用硅藻召回率、查准率和图片排除比例检测并比较搜索系统的效能。结果 硅藻AI搜索系统标注的目标中实际检出硅藻数与人工识别硅藻数之间差异无统计学意义（P>0.05）;不同阈值下硅藻AI搜索系统检测硅藻的召回率差异具有统计学意义（P<0.05）;不同阈值下硅藻AI搜索系统检测硅藻的查准率差异具有统计学意义（P<0.05）,高可达53.15%;不同阈值下硅藻AI搜索系统的图片排除比例差异具有统计学意义（P<0.05）,高可达99.72%。对于同一样品,硅藻AI搜索系统识别硅藻所用时间仅为人工识别的1/7。结论 硅藻AI搜索系统在溺死案例诊断中具有良好的应用前景,其搜索硅藻能力与经验丰富的法医相当,同时可以极大地减少人工观察图片的工作量。     

微波消解-扫描电镜联用法在溺死诊断中的应用

目的探讨微波消解-扫描电镜联用法在溺死诊断中的应用价值。方法收集已知死因的尸体标本105例,其中水中尸体85例(生前溺死70例,死后抛尸入水15例),陆地自然死亡尸体20例。水中死亡案例同时收集落水处水样。分别用微波消解-扫描电镜联用法(方法 A)和硝酸破机-光镜联用法(方法 B)对上述尸体的离体肺、肝、肾、骨髓组织及水样进行硅藻定性、定量检测。结果①溺死尸体的肺、肝、肾、骨髓中及落水处水样硅藻检出率:A法分别为100%、94.3%、92.9%、82.9%、100%,硅藻检验阳性率为100%;B法分别为90%、62.9%、51.4%、28.6%、92.9%,硅藻检验阳性率为65.7%。②两种方法检出的硅藻种类与落水处水样中硅藻的种类均一致。③两种方法在死后入水尸体离体的肺中也检出少量硅藻(<3个/2g肺组织),但在死后入水尸体的其它脏器及陆地自然死亡尸体脏器中均未检出硅藻。结论微波消解-扫描电镜联用法较硝酸破机-光镜联用法对尸体离体组织脏器中的硅藻检出率高,方法灵敏,定性准确。     

溺死法医学鉴定的研究新进展

综述了近年来在硅藻检验、水中浮游生物叶绿素（A）检测、血液化学和组织化学检验等方面的最新文献报道,并对各种溺死检验方法的优缺点进行了评价：在硅藻检验中,硝酸乙醇法、破机罐法及微波消解法,可缩短检验时间,提高办案效率;酶消化法及PCR法硅藻检出率高,适用于可疑水样中硅藻密度低等情况。早期器官组织中浮游生物叶绿素（A）、血液和组织中其他生化指标,可作为鉴定溺死的重要参考。微量元素锶检测可用于鉴定海水中溺死。另外,硅藻及其他浮游生物遗传多态性片断PCR,可望成为新的、灵敏的溺死检测方法。     

MD-VF-Auto SEM法与浮游生物基因复合扩增体系在溺死诊断中的应用比较

目的 比较微波消解-真空抽滤-自动扫描电子显微镜（microwave digestion-vacuum filtrationautomated scanning electron microscopy,MD-VF-Auto SEM）法与浮游生物基因复合扩增体系在溺死诊断50例溺死案例的肺、肝、肾组织进行检测分析,比较两种方法在各组织中的阳性检出率。结果 溺死案例使用MD-VF-Auto SEM法检验的硅藻阳性率为100%,在6例非溺死案例的肝、肾组织中检出少量硅藻。浮游生物基因复合扩增体系的阳性率为84%,非溺死案例的肺、肝、肾组织结果均为阴性。两种方法检测结果相比,肝、肾组织的阳性率和总阳性率差异均具有统计学意义（P<0.05）,而肺组织阳性率差异无统计学意义检出硅藻外的其他浮游生物。两种方法相结合,可为溺死诊断提供更可靠的依据。     

硅藻定量分析在溺死诊断中的应用

目的 对水中尸体硅藻检验案例进行回顾性分析,探讨硅藻定量分析在溺死诊断中的应用价值。方法 收集水中尸体共490例,根据死因分为溺死组和死后入水组,采用微波消解-真空抽滤-自动扫描电子显微镜法对肺、肝、肾组织及水样进行硅藻定量分析,并计算肺组织与水样硅藻含量的比值（CL/CD值）。结果溺死组肺、肝和肾组织同时检出的有400例（85.5%）,肺、肝、肾组织和水样中硅藻含量分别为（113 235.9±317 868.1）、（26.7±75.6）、（23.3±52.2）和（12 113.3±21 760.0）个/10 g,硅藻种类数分别为（7.5±2.8）、（2.6±1.9）、（2.9±2.1）、（8.9±3.0）种。溺死组和死后入水组CL/CD值分别为（100.6±830.7）、（0.3±0.4）。结论 硅藻定量分析可为溺死诊断提供支持性证据,引入CL/CD值这一参数进行分析,能更准确地作出溺死的诊断。     

溺死法医学检验鉴定方法评估与展望

综述近年来在硅藻检验、水中浮游生物叶绿素（A）检测、血液化学和组织化学检验等方面的最新文献报道,并对各种溺死检验方法的优缺点进行了评价：在硅藻检验中,硝酸乙醇法、破机罐法及微波消解法,可缩短检验时间,提高办案效率;酶消化法及PCR法硅藻检出率高,适用于可疑水样中硅藻密度低样品的检测。早期器官组织中浮游生物叶绿素（A）、血液和组织中其他生化指标,可作为鉴定溺死的重要参考;微量元素锶检测可用于鉴定海水中溺死;另外,硅藻及其他浮游生物遗传多态性片断PCR,可望成为新的、灵敏的溺死检测方法。     

水中尸体PMCT最新研究进展

溺水是公安法医日常检案中最常见的死因之一,水中发现的尸体是否为生前入水,是公安法医日常鉴定的要点也是难点,而一旦溺亡的案件中掺杂了其他复杂的案情,其鉴定意见失真也极易引起不良的社会影响。法医鉴定过程中,溺死一般依据尸体征象、组织病理学检验和硅藻检验等综合考虑。PMCT为法医诊断溺死提供了新的思路并被许多国家和地区常规使用于诊断溺死。本文综述了国内外近年来使用PMCT对溺死尸体呼吸系统、消化系统和循环系统等方面的研究成果,讨论了PMCT诊断溺死的应用价值与潜力,并对国内PMCT发展的必要性和前景进行了展望。     

碎浆法联合硝酸破机法检验硅藻

硅藻检验是法医病理学用于鉴定溺死的传统方法,尤其对高度腐败和白骨化尸体具有重要意义。目前,硅藻检验的破机法主要有：强酸法、物理（机械、焚烧）法、生物酶消化法等。本文尝试采用控温高速组织捣碎机（江苏江阴科研仪器制作厂）制成组织匀浆,以硝酸破机法进行硅藻检验,取得较好结果。     

肺血液坠积现象判断溺死的辅助作用

目的 研究溺死和非溺死尸体中肺血液坠积现象,评估该现象在辅助溺死法医病理学死因判断中的价值。方法 收集广州市2011年1月—2021年6月以来经系统尸体检验明确死因的案件235例,按照尸体发现位置分为水中尸体组（97例）和非水中尸体组（138例）,水中尸体组又分为水中溺死组（90例）和水中非溺死组（7例）,非水中尸体组分为非水中溺死组（1例）、非水中非溺死组（137例）,经3名资深法医病理学家独立对案件尸体解剖照片进行阅片,判断肺组织是否出现血液坠积,统计肺血液坠积现象的检出率。结果 水中溺死组（90例）肺血液坠积现象检出率为0,阴性率为100%;水中非溺死组（7例）肺血液坠积现象检出率为100%,阴性率为0,两组检出率差异有统计学意义（P<0.05）;水中尸体组肺血液坠积现象检出率为7.22%,非水中尸体组（剔除2例后剩余136例）肺血液坠积现象检出率为87.50%,差异有统计学意义（P<0.05）。结论肺血液坠积现象阴性是溺死的特征性尸体征象,可辅助溺死的法医病理学诊断。