荧光标记复合扩增STR检测技术在法医学中的应用

本研究用荧光标记8个STR位点及性别位点,于同一试管同步进行扩增后,在PE377全自动测序仪于一个泳道内,成功地对各位点进行基因型分离检测.将此方法应用于30多起案件检验,均取得满意结果.     

STR复合扩增技术在亲子鉴定中的应用

采用12个荧光标记STR位点复合扩增,进行双亲亲子鉴定和单亲亲子鉴定,取得满意效果.     

STR基因座荧光标记复合扩增检测及其法医学应用

目的建立荧光标记复合扩增检测4个STR基因座的方法,应用于法医学亲权鉴定与个人识别。方法用6-FAM标记D3S1754引物,HEX标记D4S2366和D12S375引物,TMR标记D1S549引物,PCR复合扩增,310基因分析仪电泳自动收集电泳结果数据,GeneScanAnalysisSoftware3.7NT计算扩增产物片段相对大小,Genotyper誖3.7NT软件进行样本基因型分型。将该方法应用于法医学亲权鉴定与个人识别。结果建立了荧光标记复合扩增检测4个STR基因座基因型的方法,具有良好的稳定性和较好的灵敏度,分型结果准确。结论研究建立的方法操作简便,分型结果稳定可靠,可用于遗传多态性研究和法医学亲权鉴定与个人识别。     

荧光STR复合扩增试剂盒的评估过程探索

STR复合扩增检验技术是目前法医DNA检验技术中最重要也是最常用的技术种类之一，随着荧光检测技术和毛细管电泳技术的发展，特别是DNA数据库建设中丰要采用STR复合扩增技术进行基因分型，大大拓展了STR复合扩增检验应用范围。与此同时，STR复合扩增检验试剂成为影响检验质量的重要因素，关系到样本检验分型结果，而分型数据是为法庭提供证据的直接依据，     

STR荧光复合扩增试剂发展历史及研究应用进展

STR(short tandem repeats,短串联重复序列)是法医个体识别和亲子鉴定领域的“金标准”。本文简要介绍了法医STR荧光复合扩增试剂的发展历史、研究现状,以及STR试剂在法医学领域的应用情况、优势与局限性等内容。STR系统经过多年的发展与实践已非常成熟,但仍具有相当高的研究价值和广阔的发展空间。     

荧光标记STR复合扩增检验系统的研究

本研究以化学合成的荧光标记引物建立了STR复合扩增体系,体系I包括4个STR基因座和牙釉蛋白基因,体系Ⅱ包括4个STR基因座,体系Ⅲ包括3个STR基因座.制备了体系I各基因座的等位基因标准对照,测定了各等位基因长度.对代表性等位基因进行了序列测定,确定了等位基因重复单位的重复数目及测量长度与等位基因命名的对应关系,对各基因座等位基因进行了标准命名.建立了复合扩增检验系统等位基因自动分析命名的模板.三个复合扩增检验体系的累积随机匹配概率为8.3×10-3,为遗传学分析建立了实用的检验系统.     

八色荧光复合扩增体系构建初探

目的建立八色荧光38个基因座的复合扩增体系。方法采用八色荧光标记技术,对38个基因座Amelogenin、D5S818、D21S11、D7S820、CSF1PO、D2S1338、D3S1358、vWA、 D8S1179、D16S539、D1S1677、PentaD、TPOX、TH01、D22S1045、D18S51、FGA、D6S1043、D13S317、D12S391、PentaE、D2S441、D1S1656、D19S433、D10S1248、D11S4463、D1S1627、D3S4529、D1GATA113、D17S974、D6S1017、D4S2408、D9S2157、D6S474、D2S1776、D18S853、D20S482及D14S1434进行复合扩增,应用GA118-24B遗传分析仪进行电泳检测,应用Gene Typer V1.0软件进行数据分析。结果本文成功建立了38个基因座的八色荧光复合扩增体系,基因座间均衡性良好,阳性对照分型结果准确。结论包含38个基因座的八色荧光复合扩增体系构建成功,为后续更多八色试剂盒的开发奠定了基础。在提高我国DNA检验试剂水平、遗传分析...     

快速个体识别STR分型技术

DNA-STR分型技术[1]一般包括DNA提取、PCR扩增、电泳分析三个部分,DNA提取需要1 h以上,PCR扩增需要3~4 h,电泳分析需要1 h以上,完整的DNA-STR分型需要6~8 h[2]。进一步缩短DNA-STR分型时间,实现快速DNA分析成为科研攻关的一个新的重点[3-5]。目前,快速DNA分析的研究主要集中在快速DNA提取和快速电泳分型两个部分。在快速     

9色荧光STR复合扩增体系的构建及验证

构建一套包含39个常染色体基因座及Amelogenin性别基因的9色荧光STR复合扩增体系,并验证其在微量与降解检材中的应用效果。根据中国人群核心基因座推荐标准及实际办案需要,筛选出合适的候选基因座,设计引物并以9种荧光染料对其进行标记,构建复合扩增体系并优化;对该体系进行灵敏度、种属特异性、稳定性等确证实验,并通过检验案件样本做进一步评估。结果表明：一套包含39个常染色体STR基因座及Amelogenin性别基因座（其中28个基因座<300 bp）的9色荧光复合扩增体系构建成功。各基因座均衡性良好,灵敏度达0.125 ng,对常见PCR抑制剂具备一定的耐受能力。两性混合样本最低检测比例为1∶4;适用于不同类型案件样本检测,且与市场上其他同类试剂盒比对分型结果一致,种属特异性较好。所构建体系首次采用9色荧光标记技术制成复合扩增试剂,一次性检出基因座数量多,系统效能高;该体系构成以miniSTR为主,对于微量降解检材具有较高的实际应用价值。     

23个STR基因座荧光复合扩增体系的法医学应用评估

目的评估新建立的23个STR复合扩增体系EX23的法医学应用价值。方法使用磁珠法提取样本DNA,应用23个STR复合扩增体系进行扩增,ABI3130XL遗传分析仪对扩增产物进行电泳,GeneMapperID 3.2软件进行基因分型,对法医学应用参数、灵敏度、种属、脱落细胞检材及降级检材分型效果进行观察,并与Sinofiler试剂盒比较。结果 DNA模板量在0.05~1.00ng时,各基因座分型结果清晰准确,均衡性好、特异性强。应用该复合扩增体系检验混合样本、降解检材及脱落细胞检材,均能获得正确的分型结果。统计结果显示该23个STR基因座累计个人识别（TDP）率达0.999999999,三联体累计非父排除率（CPE）达0.999999997。结论新建立的23个STR复合扩增体系分型效果良好,在广东地区汉族人群中具有高度多态性,可满足日常法医鉴定的需要。     

肿瘤组织9个STR基因座及Amelogenin基因座突变

目的 探讨CODIS系统中的9个STR基因座及Amel基因座在肿瘤组织中的变异。方法 收集20个个体的肿瘤组织及其血样,Chelex100法提取DNA,用Profiler plus系统复合扩增,310型遗传分析仪检测。结果 检验的10个基因座均有基因发生突变;20个个体肿瘤组织有6个个体的基因发生突变,变异率超过30％;同一个体的肿瘤组织发生基因突变的基因座最多为6个。结论 慎用肿瘤组织作为医疗纠纷、失踪人员的检材及对照样本。     

Amelogenin locus typing using toehold-assisted fluorescent DNA melting analysis

The amelogenin gene is the locus of choice for gender identification in forensic science. Here we report on the use of fluorescent DNA melting curve analysis to genotype the amelogenin locus by means of a toehold-assisted DNA strand displacement reaction. The shape of the curves, or “polarity” of the melting peaks, allowed for visual discrimination between male and female DNA samples.     

联合应用多个DNA位点进行尸源鉴定

目的　研究联合应用多个DNA位点在尸源鉴定方面的应用价值。方法　应用聚合酶链反应(PCR)、聚丙烯酰胺凝胶电泳分离及银染显带的方法通过对无名尸体的有关检材与可疑双亲或子女进行亲权鉴定。结果　在 80例刑事案件尸源鉴定中 ,38例无名尸体采用较新鲜肌肉 ,通过扩增VNTR、STR多个位点得以判明尸源 ;2 9例采用腐败肌肉、 6例采用骨骼和 2例采用牙齿 ,通过扩增多个STR位点判明了尸源。仅有 1例采用腐败肌肉、 2例采用骨骼未能确定尸源。结论　运用多个位点进行亲权方法可以准确地判明尸源鉴定 ,特别对高度腐败尸体、尸块不全等情况下的尸源鉴定具有很高的实用价值     

连接酶链反应在人Amelogenin基因座检验中的初步研究

目的建立连接酶链反应（LigaseChainReaction，LCR）应用于法医学领域的初步方法探索。方法选择人Amelogenin基因座进行连接酶链反应。针对人染色体Amelogenin基因座Xp22．1一．3、Ypll．2上M55418、M55419的序列，自行设计特异引物，建立LCR最佳体系，对男性和女性Amelogenin基因座进行分型。结果巢式LCR能够对男性和女性Amelogenin基因座正确分型。结论LCR技术能够应用于人Amelogenin基因座分型，但尚需进一步简化和改进。     

联合应用多个DNA位点进行尸源鉴定

目的 研究联合应用多个ＤＮＡ位点在尸源鉴定方面的应用价值。方法 应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）、聚丙烯酰胺凝胶电泳分离及银染显带的方法通过对无名尸休的有关检材与可疑双亲或子女进行亲权鉴定。结果 在８０例刑事案件尸源鉴定中,３８例无名尸体采用较新鲜肌肉,通过扩增ＶＮＴＲ、ＳＴＲ多个位点得以判明尸源;２９例采用腐败肌肉、６例采用骨骼和２例采用牙齿,通过扩增多个ＳＴＲ位点判明了尸源。仅有１例采用腐败肌肉、２     

重庆地区汉族群体Amelogenin及9个STR基因座的群体遗传学调查

对重庆地区汉族群体200例无关个体进行Amelogenin及9个STR基因座群体遗传学调查,并对人血液（痕）、精斑、组织、染色的细胞涂片、毛发、牙齿及骨骼组织进行基因型测定,并用于法科学检查。采用Chelex或酚-氯仿提取DNA荧光标记复合扩增法对Amelogenin及9个STR基因座,即D3S1358、VWA、FGA、TH01．TPOX、CSF1PO、DSS818、D135317、D75820进行复合扩增,扩增产物由毛细管电泳进行分离和荧光检测。9个STR基因座分别发现6、7、17、7、5、8、7、7、7个等位基因,其最高的基因频率分别是0．3900、0．2480、0．1650、0．5380、0．5280、0．4500、0．3140、0．3150、0．4000。发现的基因型数分别是16、25、71、20、12、22、26、22、26个。基因型频率均符合Hardy－Weinberg平衡,未发现基因连锁。9个STR基因座的DP值分别是0．8610、0．9220、0．9750、0．8020、0．7730、0．8780、0．9210、0．9140、0．8990,累计DP值是0．9999;非父排除率分别是0．5990、0．5450、0．7650、0．2950、0．3620、0．4520、0．6840、0．6660、0．5180,累积非父排除率是0．9995;杂合度分别是0．8000、0．7700、0．8850、0．6030、0．6550、0．7150、0．8440、0．8350、0．7550,累积杂合度是0．9999。证明这些基因座均适用于重庆     

山东地区人群9个STR基因座遗传多态性及频率调查

应用AmpFISTRProfilerPlus试剂盒及377型测序仪对山东地区200例无关个体血样进行了9个STR基因座多态性及频率调查,经X2检验,9个基因座基因频率均符合Hardg-Weinberg平衡定律,家系分析均符合孟德尔遗传规律,并应用于案件检验取得良好效果。     

中国武汉汉族群体STR D13S325基因座的多态性研究

应用PCR ,聚丙稀酰胺凝胶垂直电泳及银染技术对 2 16例中国汉族人群STRD13S32 5基因座进行了多态性研究 ,首次获得了中国武汉汉族人群基因频率分布资料。检出 11个等位基因 ,30个基因型 ,基因频率分布符合Hardy Weinberg平衡。DP值为 0 92 92 ,三联体PE值 0 6 137,二联体PE值为 0 4370 ,PIC值为 0 775 5。观察 2 0 0次减数分裂未发现突变基因。研究证实D13S32 5是一个高多态性STR基因座标记系统。     

中国成都地区汉族群体四核苷酸重复序列FIBRA基因座的多态性

建立FIBRA基因座Amp-FLP分型方法,分析136个无关中国成都地区汉族人群中STRFIBRA基因座的多态性,并将其应用于法医学实践。用Amp－FLP技术,丙烯酰胺凝胶电泳,银染,对FIBRA基因座进行分型。观察到16个等位基因,44种不同的基因型。观察杂合度（H）为0．9044,个体识别力（DP）为0．9588,多态性信息量（PIC）为0．8595,非父排除率（CE）为67．4％,观察的基因型分布符合Hardy－Weinberg平衡;10个家系调查结果表明,该基因座符合孟德尔遗传规律。FIBRA基因座多态性好,所建立的Amp-FLP方法适用于法科学的亲子鉴定和个人识别。     

6+1STR试剂盒和电泳凝胶EX-Q20用于DNA快速检验

目的 建立快速个体识别STR分型方法.方法 取采集于FTA上的血样200份,经打孔仪取等量血痕分别使用6+1 STR试剂盒结合新型毛细管电泳凝胶EX-Q20进行快速电泳分析和使用SinofilerTM试剂盒结合POP4胶进行电泳分析,比较两者所耗费时间和结果的差异. 结果 6+1 STR试剂盒结合新型毛细管电泳凝胶能够...