利用苯酚从卵黄中提纯卵黄抗体的研究

用苯酚处理超免疫卵黄稀释液，离心去除其中的脂类物质，获得了比较单纯的卵黄蛋白。经抗体活性检验和γ球蛋白定量分析表明，用苯酚处理的卵黄稀释液对卵黄蛋白成分及含量的影响较聚乙二醇小（Ｐ＜０．０５）。所建立的方法可用于卵黄抗体水平的检测或从超免疫卵黄液中提取免疫球蛋白。     

蛋鸡血清与卵黄中禽流感病毒抗体的相关性

用禽流感 (AI)H9N2油乳剂灭活疫苗免疫非免疫蛋鸡 ,并于免疫后第 0、3、5、7、9、11、13、15、17、19、2 1、30d分别测定血清及卵黄中的AI血凝抑制试验 (HI)及琼脂扩散凝集试验(AGP)抗体。结果显示 ,免疫后第 7d卵黄中即可检出HI及AGP抗体 ,以后逐渐上升 ,在免疫后第 19～ 2 1d达高峰值 ,与血清的HI抗体水平接近 ,差异不显著 (P >0 .0 5 )。表明通过对鸡蛋卵黄AIV抗体检测 ,可以进行AI的疫情监测 ,但卵黄抗体检测具有一定的滞后性     

鸡传染性腔上囊病卵黄抗体制备工艺中最佳沉降脱脂条件的确定

采用沉降脱脂分离技术 ,从鸡超免疫卵黄中提取传染性腔上囊病卵黄抗体免疫球蛋白 (IgY)。通过正交试验 ,确定乙酸乙酸钠缓冲液为最佳沉降脱脂缓冲液。用 pH值为 5 .2 ,浓度为 0 .12mol L的乙酸 乙酸钠缓冲液 9倍稀释卵黄液 ,在约 30 0r min下搅拌 10min后 ,置于 4℃下沉降 34h ,沉降上清液中IgY含量占卵黄中蛋白总量的 2 5 %左右 ,脱脂率>98%,活性损失可忽略不计。     

猪瘟荧光抗体的制备及应用

用硫酸铵盐析法从抗猪瘟血清中提取免疫球蛋白 ,应用搅拌法标记荧光素 ,硫酸铵盐析、SephadexG 2 5层析和肝粉吸收三法结合去除标记物之游离荧光素 ,制备猪瘟荧光抗体。经测定 ,标记的荧光抗体工作稀释度为 1∶16～ 1∶32。用标记的荧光抗体诊断猪瘟 ,从 39份可疑病料中检出阳性病例 12份。     

猪鼻支原体抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

为了检测猪血清中猪鼻支原体(Mhr)的抗体水平,采用脱氧胆酸钠提取Mhr膜蛋白作为包被抗原,建立了间接ELISA,并采用该方法检测了60份SPF阴性猪血清和45份Mhr阳性猪血清样品。结果显示,该方法的特异性为90.5%,敏感性为98.0%。除猪肺炎支原体(Mhp)外,该方法与几种猪病毒阳性血清及副猪嗜血杆菌Ⅳ型阳性参考血清均无交叉反应。对Mhr DL菌株感染的巴马猪血清抗体的检测结果显示,Mhr感染后第3天血清抗体阳转,第35天抗体水平达到高峰,抗体效价为1∶6 400。用该方法与IDEXX猪肺炎支原体抗体检测试剂盒平行检测138份现地血清样品,Mhr和Mhp的阳性检出率分别为71.0%和44.9%。用该方法对黑龙江、吉林、山东等地临床送检的457份血清的检测结果显示,Mhr阳性率为70.3%,表明我国猪群Mhr感染十分普遍。上述结果表明,本研究建立的间接ELISA具有良好的特异性和敏感性,为Mhr抗体检测提供了技术手段。     

小鹅瘟病毒荧光抗体的制备与应用

将小鹅瘟病毒 (GPV )分离毒xw株接种健康兔获得兔抗GPV超免疫血清 ,由此制备兔抗GPV荧光抗体。采用直接荧光抗体试验对人工感染雏鹅、鹅胚及自然病例进行了检测。结果表明 ,该方法可检出患病组织中的病毒抗原 ,且肠和肝的含毒量高于尿囊细胞。     

抗鹅细小病毒卵黄IgG的制备及其间接ELISA检测方法的建立

采用水稀释-辛酸-硫酸铵法粗提与DEAE50纤维素层析相结合的方法从免疫鹅细小病毒(GPV)的鹅卵内提取鹅卵黄IgG,通过核酸蛋白检测仪和SDS-PAGE测定IgG的浓度和纯度后,制备兔抗鹅IgG酶标抗体;建立了针对GPV的间接ELISA抗体检测方法,确定其最佳工作条件,并对该ELISA的特异性及重复性进行检测;应用该间接ELISA检测了GPV VP3基因疫苗的免疫效果。结果显示,获得的纯化鹅卵黄IgG浓度为10mg/mL,抗体纯度达到94.5%,兔抗鹅IgG的血清琼脂扩散效价约为1∶32;经筛选确定该ELISA的最佳工作条件为:最适抗原包被浓度为20μg/mL,最适血清稀释度为1∶100,酶标抗体的最佳工作浓度为1∶3 000。用建立的间接ELISA检测禽流感病毒、新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、传染性法氏囊炎病毒、鸭肝炎病毒、鸭瘟病毒的阳性血清均为阴性,表明该方法特异性强、重复性好。经临床初步应用,能检出GPV VP3基因疫苗产生的抗体,在肌肉注射100μg与200μg基因疫苗的鹅血清中,IgG均从第14天开始上升,并分别在第35、21天达到最大值。表明本试验制备的兔抗鹅IgG酶标抗体具有较好的应用价值。     

白翅浮鸥三种亚型禽流感病毒卵黄抗体的调查分析

为了解大庆龙凤湿地优势物种白翅浮鸥对禽流感病毒的天然被动免疫状况,于2010年春季采集白翅浮鸥巢卵144枚,采用血凝抑制试验检测了H1、H5、H9三种亚型禽流感病毒的卵黄抗体。结果表明,龙凤湿地白翅浮鸥种群H1、H5、H9三种亚型禽流感病毒卵黄抗体的阳性率分别为100%、38.89%和52.78%,平均卵黄抗体效价分别为6.19、3.76和3.81(lb)。表明白翅浮鸥繁殖个体对H1、H5、H9三种亚型禽流感病毒的感染或接触比较频繁,提示有必要进一步对其种群的病毒携带情况进行调查研究。     

猪血清中牛病毒性腹泻病毒抗体ELISA检测方法的建立与应用

为建立检测猪源牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗体的ELISA方法,经ELISA反应条件优化、特异性试验、重复性试验及与中和法、IDEXX ELISA对比试验建立了特异性ELISA。用此方法对福州市周边20个猪场的222份猪血样进行了BVDV抗体检测。结果显示,本ELISA反应条件为:BVDV Oregon C24V与NADL株联合包被(质量浓度均为31.25μg/L,每孔加50μL)的条件为37℃1h加4℃8h,家兔抗猪瘟病毒(CSFV)超免疫血清(每孔血清效价可中和400RID CSFV)阻断时间为2.0h,封闭剂和血清稀释液中NaCl的浓度和Tween-20的体积分数分别为0.7mol/L和3.00mL/L,100mL/L马血清封闭剂、1∶50稀释的待检血清、0.625 mg/L HRP-家兔抗猪IgG酶标二抗(100μL/孔)及底物的反应时间分别为2.0、0.5、0.5h及15min;检测CSFV、伪犬病病毒、猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒阳性血清均为阴性;4份血样进行5次板内、板间重复试验结果均一致;参照中和试验,本ELISA方法的符合率(97.9%)高于IDEXX BVDV ELISA抗体检测试剂盒(93.8%);福州市周边猪群BVDV抗体阳性率为34.7%,猪场阳性率为80.0%,其中母猪群阳性率(44.6%)高于商品猪群(26.4%)。结果表明,本ELISA方法特异性强、符合率高、重复性好,适合用于猪源BVDV的血清学监测。     

PRRSV-IPMA抗体检测试剂盒的研制及其应用

建立了一种检测猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)血清抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验法(IPMA),并组装成PRRSV-IPMA抗体检测试剂盒。对该试剂盒的敏感性、特异性、重复性及保存期等进行了试验,并与国外IDEXX ELISA试剂盒进行了比较。结果显示,用该试剂盒检测PRRSV人工接种猪血清样品,第1周抗体阳性检出率为50%,从第2周起抗体阳性检出率均为100%,而对照组猪血清抗体检测均为阴性。该试剂盒重复性好,-20℃保存18个月稳定,与其他病毒参考血清无交叉反应,与国外IDEXX ELISA试剂盒的符合率为83.3%。用该试剂盒对采自黑龙江、吉林、辽宁、河北、上海等地13个猪场的520份正常猪血清样品进行了抗体检测,结果,4个猪场阳性率高达90%以上,仅有2个猪场为阴性,其余猪场阳性率为10%~57%。     

Asylum applications in the European Union: patterns and trends and the effects of policy measures

"Statistics on asylum applications have been used in a highly selective way in the debates on refugees and asylum policies in Western Europe, to justify restrictive measures. This paper provides a more systematic analysis of these statistics. It focuses on the pattern of origins and destinations for asylum seekers in the European Union in the period 1985-1994.... When the patterns of origin and destinations are compared for separate years, it becomes clear that the destinations of asylum movements have been constantly changing. Though some of the more remarkable shifts were clearly related to policy measures in the relevant countries, many measures produced only limited effects or failed to have any effect at all."     

猪瘟病毒免疫的细胞学研究进展

猪瘟 (Ｈｏｇｃｈｏｌｅｒａ ,ＨＣ或Ｃｌａｓｓｉｃａｌｓｗｉｎｅｆｅｖｅｒ ,ＣＳＦ)是造成养猪业巨大经济损失的主要传染病之一。尽管在最近几年 ,由于分子生物学技术的发展和应用 ,对猪瘟病毒 (ＨＣＶ )的研究有了很大进步 ,但还存在着许多亟待解决的问题 ,如ＨＣＶ病毒粒子的结构、感染的分子基础、非结构蛋白的功能、病毒在细胞中增殖及其与宿主细胞的关系、免疫应答机制等。尤其在 2 0世纪70年代后期 ,出现猪瘟免疫失败的现象 ,使人们研究的重点开始转向对ＨＣＶ感染和免疫机制的研究。为此 ,本文将从ＨＣＶ在细胞中的增殖、病毒与…     

后基因组时代的分子生物学技术

20 0 0年 6月 2 6日 ,人类基因组计划 (ｈｕｍａｎｇｅｎｏｍｅｐｒｏｊｅｃｔ,ＨＧＰ)与Ｃｅｌｅｒａ公司的负责人共同宣布了人类基因组工作框架图的完成 ,2 0 0 1年 2月分别将自己测定的框架图发表在“Ｎａｔｕｒｅ”和“Ｓｃｉ ｅｎｃｅ”向大众公布。同时 ,模式生物基因组计划(ｍｏｄｅｌｏｒｇａｎｉｓｍ ｇｅｎｏｍｅｐｒｏｊｅｃｔ ,ＭＯＧＰ)已完成了大肠埃希氏菌 (Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ)、流感嗜血杆菌(Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ)、酿酒酵母 (Ｓａｃｃｈａ ｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ)、秀丽…     

寄生虫microRNA的研究方法

对目前寄生虫microRNA(miRNA)的研究方法,包括经典遗传学方法、分子生物学方法、高通量测序与生物信息学方法进行了综述,分析了各种研究方法的优缺点和未来的研究趋势,旨在为进一步研究寄生虫miRNA提供参考.     

生长抑制激素的研究进展

生长抑制激素是一种广泛存在于机体不同组织器官且具有多种生物功能的物质。Ｋｒｕｌｉｃｈ等最先在羊的下丘脑发现一种因子 ,能抑制生长激素的分泌 ,命名为生长激素抑制素 (ｇｒｏｗｔｈｈｏｒ ｍｏｎｅｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｈｏｒｍｏｎｅ)。后来 ,Ｂｒａｚｅａｕ等分离出这种因子 ,称之为生长抑制激素 (ｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｎ ,ＳＳ)。二十多年来 ,对ＳＳ生物功能及临床应用进行了广泛的研究 ,本文就ＳＳ的分子结构、生理功能和应用予以扼要介绍。1　ＳＳ的产生　　目前已证实 ,ＳＳ广泛分布于中枢神经系统、胃肠道和胰腺中 ,尤以下丘…     

Evaluating recent trends in peacebuilding research

Peacebuilding is a complex and multidimensional exercise thatencompasses tasks ranging from the disarming of warring factionsto the rebuilding of political, economic, judicial and civilsociety institutions. It utilizes a variety of actors, ideally,in the construction of a culture of peace to replace a structureof violence. Ever since Johan Galtung coined the term ‘peacebuilding’back in the 1970s, there have been very few attempts to fleshout the essence of this concept. It is only recently, beginningwith Boutros Boutros-Ghali's use of the term in his An Agendafor Peace and continuing with the efforts by the UN and regionalbodies to develop sustainable approaches to reconstructing war-tornsocieties that greater attention has been given to this idea.This article critically analyzes broad trends that can be discernedfrom the literature, in rethinking peacebuilding and in bridgingthe chasm between the concept and practices undertaken in itsname.     

大肠埃希氏菌耐热性肠毒素的研究进展

产肠毒素性大肠埃希氏菌 (ＥｎｔｅｒｏｔｏｘｉｇｅｎｉｃＥｓ ｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ ,ＥＴＥＣ)是引起幼畜腹泻的主要病原菌。ＥＴＥＣ具有两类致病因子 :一类为肠毒素 ,另一类为黏着素 (或称定居因子 ) ,已知的黏着素有Ｋ88、Ｋ99、Ｆ4 1、Ｆ4 2 和 987Ｐ等。ＥＴＥＣ借助这些黏着素定居于宿主肠道黏膜的上皮细胞上 ,从而大量繁殖 ,产生大量肠毒素 ,由肠毒素造成肠黏膜上皮细胞的病理性变化 ,导致幼畜腹泻[1] 。ＥＴＥＣ产生两种肠毒素 :一种为耐热性肠毒素(ＳＴ) ,根据抗原性及宿主差异 ,ＳＴ又分为ＳＴ1(ＳＴａ)和ＳＴ2 (ＳＴｂ)…