微波辐射电镜生物样品制备技术

微波辐射电镜生物样品制备技术常国权，刘畅，杨盛华（解放军农牧大学军事兽医研究所长春１３００６２）早在７０年代初期，Ｍａｙｅｒｓ基于微波高频产生的热效应，能加速组织内部极性分子及外部化学物质的运动和弥散，进而使组织的反应能力加强的原理，首先将微波辐射技...     

应用电镜技术快速诊断动物病毒病

应用电镜技术快速诊断动物病毒病李成（中国农业科学院哈尔滨兽医研究所１５０００１）电镜技术对诊断形态特征性强的动物病毒（如正粘和副粘病毒、正痘和副痘病毒、疱疹病毒、轮状病毒、弹状病毒、冠状病毒及腺病毒等）感染引起的动物病毒病，既快速又准确。尤其对混合感...     

应用电镜技术对猪瘟病毒的观察

应用电子显微镜技术早期观察猪瘟病毒,由于该病毒不能在体外增殖而受到了限制,另一方面,由于感染猪本身的组织和血清被其它病原体污染也妨碍了研究,Reagan和他的同事们在感染猪血清中发现病毒粒子为22～30nm(平均为27nm),Ageev在感染该病毒猪红细胞表面上和血清中检出直径为20～44nm球形粒子,经组织培养分离猪瘟病毒的早期报告为20～80nm,但以后对生长在组织培养物上的纯化了的猪瘟病毒报告是球形的,直径为37～67nm,并带有囊膜粒子,偶尔在病毒囊膜上石到呈不规则排列的纤突。     

应用免疫电镜技术观察羊流产衣原体

本实验应用免疫电镜技术(IEM)吸附法、装饰法、吸附和装饰结合法以及沉淀法检测羊流产衣原体,并以直接法做对照。实验结果表明,这4种方法适用于检测羊流产衣原体,处理的样品在电镜下均较直接法处理的样品清晰,对于观察羊流产衣原体的形态以及对本病的诊断都有较高的实用价值。(一)材料和方法1.材料:羊流产衣原体(黄株)鸡胚卵黄囊培养物磨碎稀释经差速离心提纯,制成衣原体悬液。羊衣原体阳性血清批号8806,补体结合效价为1:256。阴性血清。上述材料均由我所羊衣原体研究课题组提供。     

免疫电镜技术在动物病毒感染诊断中的应用

光学显微镜的出现为人类打开了微观世界的大门 ,但由于受到光波波长的限制 ,其最高分辨率只能接近于 2 0 0 0ｎｍ。电子显微镜是以电子束作为光源 ,电子波长是可见波长的 10万分之一左右 ,分辨率极高。自从 1932年第一台电子显微镜在德国诞生以来 ,其分辨率已达到 1.5～ 2 .0ｎｍ ,为生命科学研究提供了一个更加有用的工具。随着电子显微镜性能的不断提高 ,生物超微结构的研究从单纯形态描述进入了成分分析 ,从静态描述进入了动态观察 ,从二维平面进入了三维立体图形的观察与重组。同时 ,免疫学技术也得到了突飞猛进的发展 ,电镜技术与免疫…     

应用胶体金免疫电镜技术检测犬传染性肝炎病毒

用胶体金免疫电镜技术检测了犬传染性肝炎病毒(ICHV),证明此方法可作为快速鉴定动物病毒的常规方法。     

应用离子交换捕捉电镜技术观察动物类冠病毒

(一)材料和方法 1.样品处理:把采自腹泻牛、猪及貉子的粪便,制成10～20％悬液,低速离心,将其上清液直接滴附在碳-福尔马(Formvar)膜或取其上清液1ml,加4滴磷酸氢钙饱和液吸附,低速离心,弃上清,取沉淀,加1μl乙二胺四乙酸二钠(EDTA)饱和液,使磷酸氢钙溶解,将其溶解液滴附在碳-福尔马膜上,用2％磷钨酸(PTA)负染,电镜观察。     

改良菌落原位杂交技术快速筛选NDVF基因阳性克隆株

应用从表达型质粒载体构建的ＮＤＶＦ基因文库中筛选阳性克隆株的改良融合蛋白质抗体蛋白质原位杂交技术，可使菌落在硝酸纤维素薄膜上增殖，经适当处理后，即可用特异性抗体探针进行原位筛选，获得含目的基因编码的特异抗原蛋白的阳性克隆株。     

应用胶体金标记免疫电镜技术观察牛白血病病毒

(一) 材料和方法 1. 材料:从国外引进的牛白血病病毒(BLV)感染的羊胎肾细胞(FLK)的初期培养物,羊抗牛BLV血清,兔抗羊IgG(以上原材料均由本所BL研究室惠赠);胶体金由本试验室制备。 2. 5nm粒径胶体金的制备:用鞣酸一枸橼酸三钠还原法制取。所得A液与B液的混合溶液呈亮红色。 3. 胶体金抗体(抗体包被胶体金)的制备:将胶体金的pH值用0.1M K_2CO_3液调到9.0,然后找出胶体金和第二抗体(兔抗羊IgG)最适结合比例,即用50μl(第二抗体含量     

应用电镜技术对某些动物病毒的快速检出

目前,动物病毒病越来越多,无论对人或对畜禽都构成了较大的危害。为了迅速扑灭这些疾病,首先要确定某种感染症的病原。确定病原,通常是采取生物学试验以及病原分离等方法,但这需要较长时间,花费很多人力、物力。因此,探讨快速诊断方法,是诊断学中的重要课题。一般来说,快速诊断是比较困难的,尤其对新发生的和未知病因的传染性疾病更难确诊。因为病原不清,查找书刊上的资料,也往往不     

黑熊胆囊结石电镜扫描观察

黑熊胆囊结石电镜扫描观察王强华张翊华马新武李明（西北农业大学动物医学系陕西杨凌７１２１００）徐振武任文凯（陕西省野生动物保护站）宝鸡市人民公园在给一黑熊做第４次手术中，从胆囊取出长２．５ｃｍ、直径１．３５ｃｍ、重２．５ｇ游离而完整的胆囊结石，对其进行...     

用蛋白A胶体金免疫电镜技术观察绵羊进行性肺炎病毒

本实验应用蛋白A胶体金免疫电镜技术与IEM、DEM、SPA-SPIEM比较观察了OPP-CMV_(40)-1株和CMV-33AN株。蛋白A胶体金方法所制备的样品在透射电镜下可观察到抗原—抗体复合物形成的抗体桥,在抗体桥上可看到病毒粒子。胶体金通过抗体桥分布在病毒颗粒的周围,胶体金周围还有多量病毒粒子。病毒颗粒呈球形,直径为80～100nm、外有一层囊膜,囊膜上有长约8nm的纤突。     

应用免疫金电镜技术检测犬的两种副粘病毒免疫球蛋白

应用免疫金电镜技术检测犬瘟热病毒(CDV)和犬副流感病毒(CPIV)免疫球蛋白(Ig).结果证明驴所产生的Ig与CDV、CPIV具有较强的特异性反应.     

应用SPA—扫描免疫电镜技术诊断鸡传染性法氏囊病

目前,免疫电镜技术已广泛用于病毒检测、病毒分型和临床诊断。为了克服免疫电镜技术存在前带效应的影响。Katz等(1980)应用金黄色葡萄球菌作为固相,成功地建立了一种固相免疫电镜技术。此法具有简便、快速、敏感等特点。我们应用此法诊断鸡传染性法氏囊病(IBL),收到了较好的效果。 (一)材料与方法 1.金黄色葡萄球菌Cowan I株:购自中国兽药监察所,固体培养基培养。在制备葡萄球菌A蛋白(SPA)菌体稳定液前,间隔12小时传1代,连传12代。     

用SPA-固相免疫电镜技术诊断犬细小病毒性肠炎

(一)材料与方法 1.被检粪样和肠内容物处理:新疆某警犬所出现呕吐、血样腹泻的病犬5只,采其粪样或病死犬肠内容物,分别编号为1、2、3、4、5号,按1/2(V/V)量加入0.01MpH7.6的PBS,充分振摇,冻融2次,再加入等量氯仿充分振荡后,3000rpm离心30分钟,吸取水相待检。 2.抗体:①西德产Magioban,该制品为含有犬瘟热、犬腺病毒肝炎、犬钩体、犬细小病毒的狗免疫球蛋白,批号为23795。②猫泛白细胞减少症阳性血清、南京农大蔡宝祥教授惠赠。     

酶标免疫电镜技术在牛白血病病毒形态学研究中的应用

迄今,国内外对于牛白血病病毒的酶标免疫电镜观察尚无报道。我们首先将该项技术应用到对牛白血病病毒的形态学研究上,从而进一步明确了此病毒在宿主细胞内的分布、抗原定位以及该病毒粒子的形态特征。 (一)材料 1.牛白血病病毒感染的羊胎肺细胞(FLL)初期培养物;2.羊抗牛白血病病毒血清。以上两种原材料均由牛白血病防制课题组提供。3.健康羊胎肺细胞培养物,由魏仁山先生提供。4.冻干酶联葡萄球菌A蛋白纯品,由上海生物制品研究所购入。     

电镜观察禽流感A型病毒

禽流感病毒是引起家禽、野鸟的一种烈性传染病的病原,该病多年来许多地区均有报导,严重危害养禽业。该病毒最早发现于1900年,Contanni等人报道了鸡瘟;相继在1956年Blaskovic等人报道了鸭体病毒;1961年Becker报道了燕鸥体内的病毒;1963年Lang、Wellsc报道了火鸡体内的病毒;1965年Rinaldi、Pereira报道了鹌鹑体内的病毒。由于国际上纷纷报道及其危害性日益加大、引起人们高度     

病毒电镜负染色条件试验

近年来,电镜负染色技术广泛应用于病毒学研究,对于观察病毒的形态结构和病毒性疾病的临床诊断有重要意义。为改善负染色方法制备样品的稳定性,提高成像效果,我们在应用电镜负染色法观察病毒的过程中对影响负染色效果的诸因素进行了试验。     

电镜样品的快速包埋方法

我们认为目前所采用的超薄切片样品制备仍不够完美,如生物材料制备的整个工序竟长达3～4天,有的甚至需1周,太费时间,因而对科研急用材料的处理远不能满足要求。为了更好地为科研和生产服务,用国产环氧树脂和进口Epon 812等研制出了适用于口岸动物检疫和临床快速诊断病毒的快速包埋方法,操作过程如下:     

马属动物血小板电镜形态观察

用电镜对马属动物血小板形态结构的研究国内未见报道,本实验用扫描电镜和透射电镜,观察了正常马属动物血小板的形态特点,从而提供了认识血小板功能的形态学基础资料。 (一)材料和方法 1.血样:为临床检查健康的马、驴、骡静脉血。 2.方法:用普通注射器抽取15ml静脉血,等分,分别迅速注入三支离心管中(每支离心管中分别加入3.8％枸橼酸钠、草酸钠、肝素抗凝)混均,1000～500转/分离心10分钟,吸取上层富含血小板血浆(PRP),加等量0.2％戊二醛液混均,静置10分钟,2500转/分离