免疫组织化学检测MMP-11鉴定月经血

目的建立用自制兔抗人基质金属蛋白酶-11（matrix metalloproteinase-11,MMP-11）多克隆抗体鉴定月经血的免疫组化方法,探讨MMP-11蛋白酶的细胞定位。方法运用链霉卵白素-碱性磷酸酶（SAP）免疫组化法检测人月经血及外周静脉血涂片、阴道液涂片、子宫内膜石蜡切片和陈旧月经血痕涂片中的MMP-11。结果MMP-11存在于子宫内膜上皮细胞和间质细胞内;外周静脉血和阴道液涂片未见有MMP-11染色;陈旧月经血痕涂片罕见完整子宫内膜细胞,但能检测到微弱特异信号。结论用自制抗MMP-11多克隆抗体采用免疫组化技术能有效地检测MMP-11,区分月经血和静脉血。     

利用朴素贝叶斯和多元logistic回归构建月经血mRNA标志分析模型

目的 利用月经血特异性mRNA标志检测技术结合统计学方法,建立基于朴素贝叶斯和多元logistic回归方法的月经血鉴定模型,以定量区分月经血与其他体液。方法 采集86份月经血、48份外周血、48份阴道分泌物、24份精液和24份唾液样本,经试剂盒提取样本RNA、反转录后得到cDNA,对5种月经血特异性标志,包括基质金属蛋白酶（matrixmetalloproteinase,MMP）家族的成员MMP3、MMP7、MMP11,孕激素相关子宫内膜蛋白（progestogensassociatedendometrialprotein,PAEP）和斯钙素-1(stanniocalcin-1,STC1)进行扩增和电泳检测分析。采用朴素贝叶斯和多元logistic回归对检测结果进行分析。结果 朴素贝叶斯和多元logistic回归法构建的分类模型对月经血归类的准确率达88.37%和91.86%。在非月经血体液中,对外周血、唾液和精液的区分准确率普遍高于90%,分辨阴道分泌物时准确率较低,分别为16.67%和33.33%。结论mRNA检测技术结合统计学方法可对月经血建立分类判别模型,可用于区分月经血和其他...     

MMP-11多克隆抗体的制备及其法医学意义

目的制备兔抗人基质金属蛋白酶-11(MMP-11)多克隆抗体,建立用MMP-11抗体检测月经血的可行方法,探讨其法医学意义。方法将用基因工程制备的人MMP-11融合蛋白免疫新西兰白兔,饱和硫酸铵法进行抗体纯化。运用蛋白印迹法检测月经血痕、外周血痕、阴道液斑、精液斑、唾液斑和尿液斑,盲测验证该方法的可靠性。结果高效价的兔抗人MMP-11多克隆抗体检测月经血MMP-11蛋白的阳性率为90.48%(93/105),而外周血痕、精液斑、唾液斑、尿液斑和阴道液斑均未检出MMP-11。结论用自制的抗MMP-11多克隆抗体所建立的蛋白印迹法检测月经血中的MMP-11特异性好,灵敏有效,可用于月经血及外周血的鉴别。     

细胞mRNA检测鉴别外周血和月经血

目的探讨鉴别月经血和外周血的一种新方法。方法采集月经血和外周血样本,试剂盒提取样本RNA,反转录试剂盒反转录后得到cDNA,利用挑选的引物进行PCR扩增,检测若干个特定基因mRNA的表达情况。结果发现在外周血中可检测到SPTB(β-血影蛋白)、PBGD(卟胆原脱氨酶)基因mRNA,但检测不到MMP-7(基质金属蛋白酶-7)基因mRNA;而在月经血中三种基因mRNA都可以检测到。结论检测SPTB mRNA、PBGD mRNA、MMP-7 mRNA的表达有可能鉴别外周血和月经血。     

基质金属蛋白酶3研究进展及其法医学意义

基质金属蛋白酶3是基质金属蛋白酶家族的重要成员,能够降解多种细胞外基质成分,参与组织形态发生、损伤修复、炎症反应等一系列生理、病理过程,并在风湿性关节炎、动脉粥样硬化、乳腺癌等疾病和肿瘤的发生及进展中发挥重要作用。新近的研究表明基质金属蛋白酶3可能是凋亡神经元与小胶质细胞间一种重要的信号传导分子,它通过激活小胶质细胞加剧阿耳茨海默病、帕金森病中神经元变性。此外基质金属蛋白酶3基因启动子区域5A/6A多态性与心肌梗死的发生风险相关,且血浆中基质金属蛋白酶3的浓度在心肌梗死前后存在差异,有望成为法医学鉴定中诊断心肌梗死的辅助指标。脑损伤后基质金属蛋白酶3的表达发生改变,提示其在神经组织修复、突触发生过程中具有重要作用,阐明脑损伤后基质金属蛋白酶3表达变化规律,可能提供一种推断脑损伤时间的新指标。     

基质金属蛋白酶与心血管疾病及其法医学意义

在心血管疾病发病机制中起重要作用的蛋白质大分子,对于心脏性猝死的发生及确诊具有十分重要的意义。基质金属蛋白酶(Matrixmetalloproteinases,MMPs)是一类锌依赖的金属内肽酶的总称,是降解心肌细胞外基质最重要的蛋白水解酶类。本文就基质金属蛋白酶生物学特性、功能在心血管疾病发生发展中的作用和在法医病理学中的意义作一介绍。     

基于miR-451a/miR-21-5p的表达量关系鉴别月经血与外周血

目的 建立一种高效、准确的鉴别月经血与外周血的方法体系并探究该体系的应用能力。方法 设计miR-451a、miR-21-5p的引物、探针,建立并优化基于TaqMan技术的qPCR检测体系;对58份样本（20份月经血、20份外周血、6份唾液、6份精液、6份阴道分泌液）中miR-451a与miR-21-5p的表达情况进行检测,探索候选miRNA分子在5种体液中的表达规律;最终建立区分目标体液的鉴别方法并用模拟案件样本对其准确性进行验证。结果 本研究所建立体系及方法可实现血液与非血液、月经血与外周血100%准确区分。结论 本研究基于TaqMan qPCR技术成功建立了运用miR-451a/miR-21-5p表达量比值鉴别月经血与外周血的方法体系,该体系鉴别能力良好,有望应用于实际法医案件中。     

血痕特异性mRNA标记研究

血痕是案发现场尤其是命案中比较常见的生物物证,而血痕的正确组织来源推断是当前鉴定工作中急需解决的问题。随着法医物证学的不断发展,以mRNA(messenger RNA)为基础的体液斑迹组织来源鉴定技术作为一种不同于传统血痕免疫学检测的新型方法,已经越加显示其独特的优越性。在该技术的基础上,实现共同提取生物物证的RNA与DNA的目标,建立体液斑迹鉴定与DNA分型兼容的方法,有利于现场重建,提高生物物证的证据效力,完善证据链。本研究建立了一个包括血痕总RNA提取、逆转录、荧光特异引物扩增、遗传分析仪电泳检测分析等步骤的血痕来源推断技术平台。实验共采集制备了40份的中国人群(女性)外周血、16份月经血样本,筛选了5个外周血标记:HBA、HBB、GYPA、SPTB、ALAS2,2个月经血标记:MMP7、MMP11,构建了一个囊括外周血、月经血特异标记的荧光复合扩增体系。结果显示mRNA技术为基础的鉴定血痕来源的方法是可行的,并且建立了血痕RNA检验的遗传分析仪结果判读方法。     

体液法医学鉴定miRNA检测方法的建立与应用

目的建立针对体液特异性miRNA的SYBR Green检测方法,用于体液鉴定,探究法医实践中体液鉴定新方法。方法根据文献选出6条miRNAs为靶点,以合成的标准miRNA作为模板进行体系构建,再对实际样本进行验证,检测6条miRNAs在外周血、月经血、唾液、精液中的相对表达量。结果 miRNAs205在不同体液间表达差异不明显;miRNAs451、miRNAs144可明显的区分血与非血;miRNAs214可鉴定月经血;miRNAs888、miRNAs891在精液中高表达。结论建立的针对miRNAs的SYBR Green检测方法合理有效,可用于法医实践中体液鉴定。     

mRNA在体液斑迹鉴定与组织来源推断中的应用

体液斑迹鉴定及其组织来源推断一直是法医学研究的重要方向之一,其传统的检验方法存在诸如假阳性率高、检材易破坏等缺陷,亟需更高效的确证实验。高度分化的体细胞表达特异的m RNA分子,可推断其来源:外周血、月经血、精液、唾液、阴道分泌物、接触斑等,且灵敏度、特异度及保存时间相对较为理想,是未来用于体液斑迹鉴别的理想遗传标记。本文对m RNA在体液斑迹鉴定和组织来源推断方面的应用及其前景进行综述。     

Identification of menstrual blood by real time RT-PCR: technical improvements and the practical value of negative test results

The identification of body fluids can be of crucial importance in forensic casework. Recently we have shown that the detection of cell- and tissue-specific mRNAs is a suitable technique to identify menstrual blood and semen. In this paper we present an improved method using real time-PCR and the menstrual blood marker MMP-7 which increases sensitivity and specificity. We furthermore demonstrate case examples described showing that the correct identification of samples as non-menstrual is likely to be in the focus of criminal investigations. Although negative test results may have a number of other reasons, the new technique provides quantitative results thus allowing a cut-off value for the control marker GAPDH to be defined, below which negative results for the menstrual blood marker MMP-7 allow the conclusion that the sample was indeed not menstrual blood. Using these data, it is possible to apply the molecular identification of menstrual blood to forensic casework considering both the limitations and the capabilities of the method.     

D-dimer assays for the identification of menstrual blood

A method to reliably distinguish menstrual blood from blood in the normal circulation (peripheral blood) would be of considerable use in the forensic analysis and interpretation of evidence in sexual offence investigations. Previous attempts to address this issue have explored microscopy, lactate dehydrogenase isozyme identification, mRNA and miRNA profiling, and identification of the products of fibrinolysis. Here, four assays for D-dimer, a terminal degradation product of fibrinolysis, are evaluated for their specificity and sensitivity in detection of menstrual blood. In addition the effect of exercise, and sample storage upon D-dimer detection was investigated. Comparison of different assays revealed significant differences in results given. Nevertheless, no positive results for D-dimer were obtained using peripheral blood, mixtures of peripheral blood with semen, or peripheral blood taken from donors after moderate exercise. D-dimer was found to be detectable in 100% of menstrual blood samples after 1 week at room temperature and also in samples stored long-term (>3 years) at -20 °C. D-dimer may be an effective, simple to use tool for the presumptive identification of menstrual blood identification.     

基于miRNA相对表达量自动判别月经血和外周血

目的探索有效区分月经血和外周血的miRNA最优标记组合及最佳分类模型,并构建简便快速的自动化判别软件。方法对10种miRNA(miR-451a、miR-205-5p、miR-203a-3p、miR-214-3p、miR-144-3p、miR144-5p、miR-654-5p、miR-888-5p、miR-891a-5p、miR-124-3p)在200余份月经血和外周血样本中的相对表达量以实时荧光定量PCR检测,并以7种算法模型(核密度估计、K-最近邻、逻辑回归、线性判别分析、支持向量机、神经网络、随机森林)进行数据分析,选出鉴别效果最好的标记组合及算法模型,进而构建自动判别软件。结果月经血和外周血中差别最大的三种miRNA为miR-205-5p、miR-203a-3p和miR-214-3p,使用miR144-5p与上述miRNA中的一种或两种组合可达较好区分效果,其中基于miR-144-5p、miR-203a-3p和miR205-5p所形成的“最优特征项组合一”稳健性最强。7种算法模型中最佳分类模型为核密度估计模型,其次为逻辑回归模型。结论本研究建立的自动判别软件界面友好、使用简单,适合辅助法医检验关于月经血和/或外周血判别分析的计算,便利于法医物证工作,有较大的推广应用价值。     

影像医学在法医学中的应用

个体识别在法庭科学调查中一直是重要的工作,它包括:性别、身高、年龄的推断等。在法庭科学领域中利用影像医学技术进行个体识别,在准确性、实用性方面有特别的意义。本文目的旨在通过广泛系统地回顾国内外法庭科学中的影像学应用,了解现有医学影像技术在法庭科学应用中的优点和不足之处,为进一步完善医学影像学在法庭科学中的应用提供参考。     

用引物Y_3,Y_4和DNA扩增技术作血液(痕)和毛根性别鉴定的研究

作者用引物Y_3、Y_4和DNA聚合酶链式反应(PCR)作微量人类血液(痕)和毛根的性别鉴定。扩增的靶序列位于Y染色体DNA特异3.4kb重复序列中,扩增产物为460bp。检材用量为:新鲜血液0.5μl、血痕纱纤维1mm、毛根单个。20例保存4个月的血痕与2例保存6年半的血痕性别判定结果均正确,无性别记载的保存9～11年的3例血痕显现了清晰的460bpY特异DNA扩增带。15例保存20天的自然脱落毛根性别判定结果均正确。本法省略了检材处理中的酚-氯仿抽提DNA等纯化步骤,既简化了实验操作,又减少了检验过程中外源DNA的污染机会和样品DNA的损耗,使这一性别鉴定方法更符合法医学实践的需要。     

干生物基质点微样技术及其在法医毒物学中的应用

干生物基质点(Dried Matrix Spot,DMS)微样技术是通过将微量生物液体(如血液、尿液和唾液等)收集于卡纸上并干燥后形成的样本采集和储存形式.干生物基质点微样技术较传统的采样方法有明显的优势:取样量小,样品处理简单,储存运输方便,目前已应用于流行病学调查、毒药物监测、药代动力学研究和毒代动力学研究等领域....     

用间接免疫酶组化法检测“502”胶显现人指纹ABO血型的研究

本文研究应用间接免疫酶组化法检测“502”胶显现人指纹的ABO血型.结果显示69例个体中,检出65例指纹的ABO血型,检出率为94.2%.该方法具有特异性好、准确灵敏、结果可靠、重复性好等特点,为法医物证检验个人识别提供了一种新的手段.