猪瘟兔化弱毒牛肾细胞疫苗的研究——带毒细胞传代及其适应能力的观察

前报试验结果表明:猪瘟病毒在牛肾细胞上培养,能大量释放病毒,收液含毒滴度的高低与种毒的质量和用量有密切关系,接入大量良好的种毒,毒价可稳定地达到20000～50000倍合格的要求,降低种毒质量和用量,毒价随之下降,毒价的起伏,似乎又说明猪瘟病毒在牛肾细胞上培养,并未完全适应。为了了解病毒在牛肾细胞上的适应情况,提高病毒的适应能力,我们试图通过带毒细胞传代进行观察,同时探索带毒细胞培养及产毒能力。鉴于8305批等几批细胞经过长期离体培养和多次接毒、收毒,仍能正常繁殖,所以选用8305批细胞(以下简8305)进行了上述试验观察,其结果报告如下。     

猪传染性水泡病传代细胞甲醛灭能苗的研究

一、材料和方法 (一)病毒(强毒):本强毒是1974年采自漯河冷冻厂病猪水泡皮,磨碎接种乳鼠,用鼠毒五代接种传代细胞。细胞病变明显,且有规律。 (二)供生产病毒的细胞培养:我们的试验都是用IB-RS-2系猪肾传代细胞进行的。引自农林部兽医药品监察所。 1.培养液:以Hanks液加0.5％乳蛋白水解物为基础液,另加N_(16)液8％、牛血清10％、青霉素每毫升含100单位,链霉索含100微克,用灭菌碳酸氢钠调整pH为7.0左右。维持液含牛血清3％,pH为7.4左右,其他相同。     

弓形体滋养体在传代细胞上的适应性及其增殖能力

弓形体是一种负于细胞内的寄生虫,除了无核细胞外,它有广泛宿主细胞的易感性。为了研究动物弓形体病的需要,我们于1978年用PTPM和RTPM两个虫株对BHK_(-21)、PK_(-15)、IB-RS-2和Vero四种传代细胞做了适应性及其增殖性的观察,并对病原性进行了探讨,回顾了弓形体体外培养的历史资料,以资共同工作着的参考和评价其结果为:弓形体进入细胞3小时后就已开始进行二分裂,6小时钻入细胞的能力基本结束;两个虫株都能适应上述四种传代细胞,在72小时内可增殖大量的虫体,收集抗原;实验证明这两个虫株都是强毒株,细胞培养66天19代不失其病原性。     

聚合酶链反应在猪伪狂犬病临床诊断中的应用

应用ＰＣＲ技术对２４个猪场送检的３１４头新生仔猪和断奶仔猪病料进行伪狂犬病病毒ＤＮＡ片段检测，检出阳性猪场２１个，占受检猪场的８８．０％；检出阳性病料１５２头份，阳性率为４８．４％。另对怀疑为伪狂犬病的１５９头猪鼻拭子样品进行检测，检出阳性猪１２０头，阳性率达７５．０％。     

应用细胞传代毒制备水貂阿留申病CIE冻干抗原的研究

水貂阿留申病(Aleutian Disease)是由阿留申病毒引起的慢性进行性传染病。其特点是:潜伏期长,呈慢性经过,可垂直感染,严重侵害肾脏和肝脏,血液中浆细胞增多,丙种球蛋白异常增高,故又称浆细胞增多症。本病广泛流行于欧、美、亚洲等养貂发达的国家,我国养貂地区普遍发生,感染率较高。黑龙江省某貂场(1973)检查1234只貂,碘反应阳性率为22.8％。北京某貂场(1979)患阿留申病的貂占49.65％。严重影响着养貂业的发展。 阿留申病无中和抗体,为自家免疫病、免疫问题至今未获成功。因此,各国普遍采用定     

狂犬病病毒核蛋白基因在大肠杆菌中的高效表达

为获得狂犬病病毒(RV)核蛋白抗原,采用RT-PCR方法从狂犬病病毒ERA株中扩增了RV核蛋白基因,分别亚克隆到原核表达载体pET-28a(+)和pET-32a(+)中,经PCR和双酶切鉴定以及序列测定,重组质粒构建成功。将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,表达的核蛋白再经Ni2+-NTA亲和层析纯化。结果显示,核蛋白在pET-32a(+)中的表达量(30.4%)高于在pET-28a(+)中的表达量(19.4%),培养物中的高纯度核蛋白产量分别为13.6和8.45 mg/L。经Western-blotting检测,不同载体表达的核蛋白均可被兔抗RV多克隆抗体特异识别,表明核蛋白具有良好的反应原性。     

寡糖益生素在罗曼蛋鸡生产中的应用效果

寡糖益生素是由有益微生物与寡糖类物质有机结合而成,具有促进动物生长,调理肠道内环境,维持畜禽体内正常有益菌群平衡,增强机体免疫力,提高饲料利用率及畜禽生产性能,改善动物产品质量,消除粪便异味等多种功能。本试验旨在进一步验证寡糖益生素在蛋鸡生产中的应用效果。1　材料与方法1.1　寡糖益生素　系陕西省宝鸡市星星协力生物有限公司利用现代酶工程技术生产的新型饲料添加剂,主要由异麦芽糖、潘糖、异麦芽3～8糖、果聚寡糖等非消化性糖和芽孢杆菌、双歧杆菌、乳酸菌、酵母菌、光含菌等有益菌组成。1.2　试验鸡及日粮　选择健康、大小…     

B超妊娠诊断技术在绵羊生产中的应用

在绵羊生产中 ,实现母羊早期妊娠诊断 ,使空怀母羊及时接受重新配种或胚胎移植 ,妊娠母羊适时得到优化饲养管理 ,对于降低饲养成本、预防产科疾病和提高羔羊成活率具有重要意义。自从 1976年Lindahl首次将B型超声诊断仪 (以下简称B超 )用于绵羊妊娠诊断以来 ,国内外畜牧兽医工作者纷纷进行了这方面的探索和研究。他们普遍认为 ,B超实时扫描是最快速、最安全、最有效的绵羊早期妊娠诊断方法。为了获得经验 ,笔者结合生产实际 ,应用B超通过腹壁探查对接受胚胎移植的小尾寒羊受体群进行了快速早期妊娠诊断。1　材料与方法1.1　试验仪器与动物…     

细胞动力学及其在医学上的应用

(一)细胞动力学的概念 细胞动力学(Cytokinetics,Cell Dynamics)是定量研究细胞(群体)繁殖过程中其形态结构和生理特征在一定时间和空间中的动态变化的学科。它是随着电子显微镜的发展、组织化学、显微细胞分光光度计、放射自显影术的应用,以及分子生物学的发展,而于50年代以后才逐渐发展起来的新学科。这一新学科,在帮助我们深     

狂犬病病毒糖蛋白膜外区基因在大肠埃希氏菌中的高效表达

为获得狂犬病病毒(RV)糖蛋白抗原,采用RT-PCR方法从狂犬病病毒ERA株中扩增了编码RV糖蛋白的全长基因,将其克隆于pMD18-T载体,再经PCR扩增出糖蛋白全长基因和膜外区基因,将其分别亚克隆至原核表达载体pET-28a( )、pET-32a( )和pGEX-4T-1中,经PCR 和双酶切鉴定以及序列分析,表明已成功构建了重组质粒。将重组质粒转化到大肠埃希氏菌BL21 (DE3)中进行表达,结果显示,克隆到pET-32a( )的糖蛋白膜外区基因表达量最高,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的45．4％。经Western-blotting检测,不同载体表达的糖蛋白膜外区产物均可与兔抗RV多抗发生特异性反应,表明,重组蛋白具有良好的反应原性。     

鸡新城疫和鸡支气管炎弱毒在同一鸡胚内培养生产二联苗的研究

目前国内外生产鸡新城疫(ND)、支气管炎(IB)二联苗的方法,是将两种弱毒分别在鸡胚尿囊内培养、收毒,然后再按1:1比例配制成二联苗。此法存在生产工序复杂、增加鸡胚和疫苗瓶用量的缺点。目前国内生产用鸡股大部分是用鸡新城疫免疫母鸡所产的蛋孵化的,接种NDV Lasota株等弱毒后,很少引起死亡,只能收取96小时活胚毒;而IBVH_(52) (或H_(120))株在接种鸡胚后则要求在30小时左右收取活胚毒。能否根据这两种病毒增     

蜂胶在兽医中的应用

蜂胶是蜜蜂从植物幼芽和树杆采集的树脂混合其上颚腺分泌物、蜂蜡和花粉加工而成的一种蜜蜂产品。蜂胶的理化性质和医药应用国内外已进行了一系列有成效的研究。国外兽医界研究应用蜂胶也取得了良好效果,现就文献综述如下。     

高新技术在养禽业中的应用

高新技术在养禽业中的应用甘孟侯，黄瑜（北京农业大学兽医学院１０００９４）当今科学技术层出不穷、迅猛更新，不断向组合化、多域化和产业化的方向发展。对于应用性、实用性甚强的兽医科学，一些现代高新技术已成为科研和临床诊断的有力手段，其初步应用已显示出广阔的...     

牛轮状病毒VP7基因在昆虫细胞中的表达

利用PCR方法扩增出牛轮状病毒外衣壳蛋白VP7基因,经BamHⅠ+PstⅠ特异性酶切后,连接于昆虫杆状病毒表达载体pFastBacHTA中,成功构建了重组质粒pFastBacHTA-VP7。该重组质粒转化含有杆状病毒穿梭载体的DH10BAC感受态细胞,经抗生素筛选和PCR筛选,获得转座的杆粒Bacmid-VP7。在脂质体介导下转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒,再感染细胞,收获目的蛋白,对表达的蛋白进行SDS-PAGE分析和Western-blot分析。结果显示,成功扩增了VP7基因,大小为981bp,所表达的重组蛋白大小为40.4ku,与预期值相符,该蛋白能与牛轮状病毒阳性血清发生特异性反应,具有较好的反应原性。此研究结果为进一步研发牛轮状病毒ELISA检测试剂盒奠定了物质基础。     

犬干扰素α4在CHO细胞中的稳定表达

为制备高活性的犬干扰素α4(CaIFN-α4),将犬IFN-α4和绿色荧光蛋白(GFP)基因用2个GGGGS五肽柔性肽连接,获得犬IFN-α4和GFP的融合基因(CaIFN-α4-GFP)。将该融合基因与真核表达载体pLeGFP连接,构建重组表达质粒pL-CaIFN-α4-GFP,并与其他3种慢病毒质粒(pC-Gp,pR-Rev和pC-VsvG)共同转染293FT细胞,包装获得重组慢病毒(vCaIFN-α4-GFP)。用获得的重组慢病毒感染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,经杀稻瘟菌素筛选、流式细胞仪分选和有限稀释法克隆转染细胞,获得表达CaIFN-α4-GFP的CHO细胞。用荧光显微镜观察构建的CHO细胞呈现绿色荧光,用MDCK与MDB K细胞检测CHO细胞培养上清液具有抗水疱性口炎病毒活性,活性分别为1.39×105和2.19×104U/m L。本研究成功地利用CHO细胞表达了具有活性的犬干扰素α4,为进一步研制高活性的犬IFN-α4生产系统奠定了试验基础。     

绵羊睾丸支持细胞的分离鉴定及其在山羊痘病毒疫苗株培养中的应用

为研究绵羊睾丸支持细胞对山羊痘病毒的增殖特性,采用胶原酶Ⅳ和胰酶两步法分离绵羊睾丸支持细胞,通过倒置显微镜进行形态学观察、细胞染色鉴定以及特异性表达ABP蛋白鉴定,然后接种山羊痘病毒疫苗株。结果显示,分离的原代细胞24 h可长满单层,用0.05%的胰酶消化处理3次可得到纯度约为80%的睾丸支持细胞;油红O染色可观察到绵羊睾丸支持细胞的细胞质含有大量脂肪滴,细胞核可见双极小体;HE染色后细胞核为蓝色,细胞质呈红色或粉红色。ABP蛋白间接免疫荧光可观察到在绵羊睾丸支持细胞的细胞质和细胞核周围有绿色荧光,经显微镜下计数其纯度达80%以上。接种山羊痘病毒疫苗株后第4天有90%细胞产生病变,细胞变圆,细胞聚集成簇状,细胞收缩、细胞核出现空泡化。qPCR扩增Ct值为18.81,Ct值低于其他细胞传代数值。结论,本研究成功分离培养了绵羊睾丸支持细胞,该细胞能较好地培养山羊痘病毒疫苗株,对羊痘疫苗的生产有一定的现实意义。     

生物芯片及其在疾病诊断中的应用

1991年Fodor等[1] 提出DNA芯片的概念后 ,近年来以DNA为代表的生物芯片 (biochip)技术得到了迅猛的发展。目前 ,已有多种不同功用的生物芯片问世 ,这将为生命科学的研究、疾病诊断和治疗、新药的开发、司法鉴定、食品卫生监督和航天航空等领域带来一场革命[2 ] ,特别是在遗传病、肿瘤病、感染性疾病及其他一些疑难疾病的诊断中取得重大突破。1　生物芯片简介生物芯片技术是将生物分子 (寡聚核苷酸、cDNA、基因组DNA、多肽、抗原、抗体等 )固定于硅片、玻璃片、塑料片、凝胶和尼龙膜等固相介质上形成的生物分子点阵 ,在待分析样品中的…     

基因工程在寄生虫病研究中的应用

迄今为止,从分子学水平上研究寄生虫病的报道较少。其主要原因是:没有大量能够用于纯化和定性的寄生虫及其抗原不稳定,所以对宿主保护性免疫反应尤为重要的蛋白质的研究与鉴定方面工作就更缓慢了。     

食醋在畜禽养殖中的应用

食醋味酸 ,性温、微苦咸 ,有下气消胀、和胃助消化、散淤消肿排毒之功效。现代医学认为醋含丰富的有机酸、游离氨基酸及维生素等多种营养物质 ,具有调味、助消化、补营养、杀菌、消炎、解毒等作用 ,用于畜禽生产和疾病防治效果甚佳。提高生产性能　牛 :每日给乳牛喂用苹果汁酿制的醋 5 0ｍＬ ,可提高产奶量 12 %左右 ;给肉用牛每日喂 5 0— 80ｍＬ醋 ,增肉率可提高 11.9% ;母牛产后 1月不发情时用 10 0ｍＬ醋加水至 10 0 0ｍＬ早晚 2次供牛饮用 ,连用 10ｄ即可发情。猪 :猪喜欢吃带酸味饲料 ,每 1ｋｇ饲料中加 5— 10ｍＬ醋 ,能提高采食量、…     

生物芯片技术在生物医学中的应用

生物芯片 (ｂｉｏｃｈｉｐ)技术是 80年代发展起来的一门新兴技术 ,是指基于玻璃、硅片、陶瓷等材料 ,运用微处理加工技术制成的可用于生物化学分析的薄型载体 ,其作用对象可以是基因、蛋白质和活体细胞等。实质是在面积不大的芯片表面上有序地点阵排列了一系列固定于一定位置的可寻址的识别分子 ,在相同条件下反应后观察结果。反应结果可用同位素法、化学荧光法、化学发光法或酶标法显示 ,然后用精密的扫描仪或ＣＣＤ摄像技术记录 ,最后通过计算机软件进行数据处理以得到综合的信息。生物芯片的特点是可以在小小的面积上 ,通过平行的反应带…