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1.
边缘无浆体MSP5蛋白基因的克隆及原核表达 总被引:2,自引:0,他引:2
参照已发表的边缘无浆体主要表面蛋白5(MSP5)基因的核苷酸序列,设计了1对特异性引物,以边缘无浆体基因组DNA为模板,采用PCR技术扩增获得了MSP5蛋白基因。将其克隆到pGEM-T Easy载体,并进行测序分析。结果表明,克隆的MSP5基因与GenBank上登录的Florida株MSP5蛋白基因的序列同源性达98.6%,编码氨基酸的同源性为99.0%,并且该序列包含有完整的开放阅读框,大小为633 bp。将该基因亚克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,构建了重组原核表达载体。将其转化到DH5α宿主菌中,用IPTG进行诱导表达,实现了融合表达,表达产物的分子质量为45 ku。Western-blot分析表明,此表达产物能够被抗边缘无浆体阳性血清所识别。 相似文献
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为了解非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)解旋酶pQ706L的功能,通过生物信息学方法对GenBank中公布的不同基因型的ASFV解旋酶Q706L基因序列进行分析,运用在线软件ExPASy、GOR4、SWISS-MODEL对该蛋白的理化性质及结构进行了预测分析,并进一步构建原核表达载体进行诱导表达及纯化鉴定。结果显示:Q706L基因长度为2 121 bp,在不同毒株和基因型间高度保守;经ExPASy预测,pQ706L蛋白的分子式为C6440H10761N2121O2643S502,属于疏水性蛋白,稳定性差;GOR4预测的二级结构显示,α螺旋是其主要结构形式,占比为42.07%;三级结构预测报告QMQE值为0.38,覆盖率为66%。以ASFV-CN/SC/2019毒株基因组为模板,成功构建了原核表达质粒pET-30a-Q706L,进行诱导表达及SDS-PAGE分析,得到78.3 ku的蛋白。纯化后经Western-blot鉴定,获得了纯度较... 相似文献
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从我国半饱血微小牛蜱雌性成蜱肠道和唾液腺中提取总RNA;参照GenBank中已发表的微小牛蜱Bin91基因的核苷酸序列,设计了1对特异性引物.采用RT-PCR技术扩增Bm91基因,测序正确后将其亚克隆到巴斯德毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K的EcoR I酶切位点,构建重组表达载体pPIC9K-Bm91.再次测序正确后将其用Sac Ⅰ内切酶线性化,电转化毕赤酵母GS115并经G418抗性筛选高拷贝重组菌株后用甲醇诱导表达.表达产物经SDS-PAGE和Western-blot分析,结果显示,Bm91基因获得了成功表达,诱导表达的培养上清液中表达出具有反应活性的83 ku的重组Bm91蛋白. 相似文献
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一、基本案情1 996年 2月 1 7日 ,李某在楼上玩耍时不慎坠地受伤 ,被送入 A医院抢救治疗。在该院住院抢救治疗期间 ,输 C血站供全血 40 0 ml(为三名献血员血液 )。因治疗效果不佳 ,后转入其他医院治疗 ,同年 3月 1 2日出院。同年 3月 2 8日 ,李某以“发热 5天 ,皮肤黄染 3天”为由再次到 A医院就诊 ,儿科以“黄疸肝炎”收住院 ,3月 2 9日、30日 ,其父为其输血两次 ,共计 2 0 0 ml。3月 31日转 B医院传染科。4月 2日在给李某作血液检验时 ,发现李某艾滋病毒抗体初筛呈阳性 ,4月 3日 B医院对李某父母血液进行艾滋病毒抗体检测 ,结果均呈阴性… 相似文献
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