H5N1亚型禽流感病毒NS1基因的克隆及表达

利用RT-PCR扩增了2株H5N1亚型禽流感病毒NS1基因,并将其克隆到pMD 18-T载体上,进行序列分析。结果显示,这2株禽流感病毒NS1基因核苷酸序列的同源性为70.2%,分别属于NS等位基因群A和等位基因群B。再将克隆的NS1基因插入到pET-28a质粒中构建原核表达载体,将其转化到DH5α大肠埃希氏菌感受态细胞中,经双酶切鉴定及序列分析,表明获得了重组质粒pET-52NS1和pET-174NS1。经SDS-PAGE分析,重组质粒转化BL21(DE3)(pLysS)感受态细胞后,经IPTG诱导,获得了分子质量约为30 ku的NS1融合蛋白。用AIV多克隆血清做Western-blotting分析,发现来自2个等位基因群的NS1蛋白都具有较好的抗原活性。     

HPLC—ESI—MS／MS法测定全血中溴敌隆

目的建立全血中测定溴敌隆的高效液相色谱-电喷雾-质谱联用检测方法。方法血液样品经乙醚提取后，采用Ultra Cl8柱（150mm×2．1mm×5μm）；柱温：23℃；流动相：甲醇；流速：200μl／min；在负离子模式下，通过电喷雾电离（ESI），多反应监测（MRM）测定，外标法定量分析溴敌隆。结果在0．1-50mg／1范围内两者均呈良好的线性关系。溴敌隆的回收率为94．34％（RSD=7．3％），考察了方法的基质抑制作用（matrix effect，ME）（％）=B／A×100％=91．86％（RSD=4．78％）定量检出限为0．028ng。结论本方法简便、灵敏度高、定性定量准确，可以作为检验全血中溴敌隆检验的一种手段。     

中小企业的政府金融支持创新研究

市场经济体制确立以后,我国的中小企业有了迅猛的发展,在国民经济发展中作出了重要的贡献。但是,目前融资难已严重地阻碍着中小企业的发展,影响了其作用的进一步发挥,暴露出政府现有的金融支持已明显滞后于中小企业发展的需求,因而迫切需要政府金融支持创新。因此,政府应创新对中小企业的金融支持,成立中小企业管理机构,建立国家政策性中小企业银行,实施税收利率等方面的优惠措施,建立健全各级政府信用担保和再担保体系,发展中小企业风险投资基金,通过政府采购支持中小企业资金回收等,都是政府金融支持的创新。     

台湾义工组织发展的法律分析与制度借鉴

发展现代义工组织对构建和谐社会具有重要的作用。文章用法律的视角剖析台湾地区义工组织的发展特点和模式,提出在制度和组织运作方面应借鉴和学习台湾地区义工组织的先进经验,以期进一步完善大陆义工组织的发展思路。     

中国特色社会主义执政党建设理论

在建设中国特色社会主义中必须始终坚持党的领导,同时要结合新的历史条件的变化,切实加强党的执政能力建设和先进性建设,认真解决提高领导水平和执政水平、增强拒腐防变和抵御风险的能力两大历史性课题,以改革创新精神全面推进党的建设新的伟大工程.这是保证中国特色社会主义事业取得成功的关键.     

高三学生的心理压力及缓解途径

高三学生是一个特殊的群体，处在人生发展的重要阶段。在高考大背景下，在家长的期待目光中，在社会“金榜题名”光环的渲染中，他们背负着巨大的心理压力，表现出紧张、焦虑、抑郁等症状，有的出现严重的心理障碍。高三学生心理压力产生，是内因和外因共同作用的结果。家长、社会、学校和教师应共同努力，把握高三学生心理压力的成因及规律，积极探讨缓解高三学生心理压力的措施，提高高三学生自身的心理承受能力和调适能力。     

改革开放以来我国乡镇企业的发展历程及启示——以1978—1992年江苏乡镇企业发展为例

党的十一届三中全会之后,我国乡镇企业的前身——社队企业历经曲折.异军突起.成为生机蓬勃的经济新生力量,更名为乡镇企业.1984年经济体制改革后,乡镇企业开始突破所有制形式和经营行业的限制,形成多种产业同时并举的格局,进入了全面发展的新阶段.从1989年起,国家开始治理整顿,乡镇企业平稳度过三年调整时期,并不断取得新成就.江苏乡镇企业迅猛发展积累的经验主要是:解放思想,实事求是,尊重农民的首创精神;善抓机遇,有序发展;以工补农,协调发展.这些经验说明,发展乡镇企业是解决农民就业、增加农民收入的重要渠道,是反哺农业的重要力量.也是培养造就新型农民的重要途径,对当前的社会主义新农村建设有着重要的启示.     

新城疫病毒F蛋白免疫活性片段的原核表达

利用已构建的新城疫病毒F基因重组质粒,通过氨基酸序列分析和InsightⅡ基因工作站的MODELER程序和同源模建技术,预测了试验株F蛋白的表面抗原分布位置.设计引物扩增了2段含有多个抗原位点的多肽片段,通过双酶切定向克隆到原核表达载体pET32a,获得了重组质粒pET32a-F1和pET32a-F2以及2个片段串联起来后克隆的重组质粒pET32a-F3.重组质粒经诱导表达并取产物进行分析,结果显示,F1、F2、F3片段均获得了融合表达.Western-blotting证实,表达产物F1、F2和F3与NDV阳性血清均具有免疫反应性.用表达的重组蛋白加免疫佐剂经皮下接种免疫鸡,免疫2次后产生较高的抗体水平,用100 LD50的超强毒株GD-05-2攻击,重组蛋白免疫组鸡可达到约70%的保护率,并可显著抑制排毒.     

自觉坚持马克思主义一元化

<正>随着改革开放和社会主义现代化建设的深入发展,在我国思想理论界不时出现一些违反四项基本原则的错误思想政治观点。否定马列主义、毛泽东思想、邓小平理论在我国的指导地位,鼓吹"指导思想多元化",就是其中颇有代表性的一例。在这一事关政治方向和根本原则的问题上,我们必须旗帜鲜明、理直气壮地进行积极的思想斗争。     

论行政执法中的诱惑调查——上海“钓鱼执法”事件的理性思考

上海的“钓鱼执法”事件引发社会广泛关注。“钓鱼执法”违反依法行政的基本要求，违背基本行政伦理，也蚕食了社会信任。行政执法中的诱惑调查虽缺乏法律依据但具有合理性，诱惑侦查的理论和实践对探讨诱惑调查具有启示和借鉴意义。我国应完善行政执法中诱惑调查的立法规定：确立行政执法中的诱惑调查的合法性，并对实施的实体要件和程序要件予以制度化；明确行政主体对诱惑调查的合法性承担证明义务；非法诱惑调查的口供和物证应适用非法证据排除规则，不能仅凭非法诱惑调查获得证据对违法行为予以行政处罚。