猪瘟病毒NS3蛋白的重组表达及其单克隆抗体的制备

以含有猪瘟病毒(CSFV)石门株全长cDNA的重组质粒pOKShimen为模板,经PCR扩增获得NS3基因,利用原核表达载体pMAL-c2X、pET32a以及杆状病毒表达载体pFastBacH T B表达CSFV石门株NS3基因,获得3种重组蛋白:MBP-NS3、His-NS3和rNS3。Western-blot分析及间接免疫荧光试验证实,这3种不同载体表达的NS3蛋白均能被猪瘟阳性血清所识别。利用直链淀粉树脂柱对重组蛋白MBP-NS3进行纯化后,用其免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,用间接ELISA筛选,获得2株能稳定传代并分泌针对抗CSFVNS3蛋白单克隆抗体的细胞株,命名为1D10和1H10。Western-blot分析及间接免疫荧光试验结果证明,这2株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体均可识别CSFVNS3蛋白。     

旋毛虫TsP53抗原基因的原核表达及抗原性分析

应用RT-PCR方法从旋毛虫肌幼虫总RNA中获得TsP53基因片段,限制性酶切后连接到表达质粒pET30a中,转化大肠杆菌DH5α。筛选阳性克隆,经限制性酶切、PCR分析及测序鉴定后,将重组表达质粒pET30a-TsP53转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导表达。SDS-PAGE分析表达产物,对表达产物纯化后通过间接ELISA鉴定重组蛋白的抗原性。结果显示,成功构建了重组表达质粒pET30a-TsP53,测序结果表明插入片段为1 176 bp,编码391个氨基酸残基,与旋毛虫P53抗原基因序列(U25127)有99%的同源性,开放阅读框正确。含有pET30a-TsP53重组表达质粒的大肠杆菌BL21(DE3)诱导后得到了高效表达,SDS-PAGE显示表达产物分子质量约为50 ku,主要以包涵体形式存在。间接ELISA结果表明,重组抗原可以被旋毛虫感染不同时期的猪血清特异性识别,有望用于旋毛虫病的免疫诊断。     

地方政府如何推动农业发展：日本Oita市的政策及经验解读

日本是通过宏观政策的引导使农业迅速实现现代化的典型国家。以往对日本农业政策的研究多集中于中央政策方面,本文以日本Oita市为个案,详细解读发达国家地方政府推动现代农业发展的政策举措及发展绩效,并在总结Oita市农业政策成功做法的基础上,得出发达国家成功经验对我国地方政府推动现代农业发展的借鉴意义。     

China’s Strategic Choices

A number of significant events in 2008-2009, such as the Russia-Georgia conflict, the Beijing Olympics, the global financial crisis, the continuing threat of international terrorism and the worldwide spread of the H1N1 virus, may herald the close of the post-Cold War era. A new epoch is dawning, characterized by the collective rise of emerging powers and by increased global cooperation in response to the common concerns of the planet. America, Europe, Japan, Russia, India, Australia and other world powers are contemplating new strategic options to meet these changing circumstances. As a major driving force behind this phenomenon, China faces pressures for self-change and global change at the same time. It is obviously a task more formidable than that confronting the rest of the world. It requires China to redefine its role in the new era and make its strategic choices more rational and multi-directional in nature.     

爆炸案件中故意伤害罪和故意杀人罪界定探析

在爆炸案件审理的司法实践中,故意伤害罪和故意杀人罪的界定存在一定难度。司法机关工作人员不仅应该以犯罪行为人的主观故意为主要依据,还必须考虑爆炸手段、爆炸结果等客观方面的内容。     

论工会在促进和保障残疾人就业中的作用

目前残疾人就业形势十分严峻,残疾人就业面临着就业总量不足、就业层次低、结构不合理等问题.工会作为职工的群众组织是参与解决残疾人就业问题的重要社会力量.     

从反核威慑战略到最低核威慑战略:中国核战略演进之路

当前学者们对中国核战略的争论焦点在于,没有任何一种现有核战略定义能够完全涵盖中国核政策的特点。本文认为,正确理解中国核战略,需要摆脱现有核战略理论概念体系的束缚。只有从中国核战略产生和发展的具体时代背景中寻找线索,才能认识到,中国核战略经历了从反核威慑战略到最低核威慑战略的巨大转变,而中国长期大规模备战核战争遗留下来的物质遗产和思想基础,仍然对中国核战略产生着巨大的影响力。中国学者应从中国核战略实践出发,参与构建主流话语体系,为核战略学科建设做出自己的贡献。     

我国地方政府治理理论研究评析

地方政府治理在我国学术界是一个较新的概念,其发展与地方治理的发展过程一脉相承、紧密相联。本文简要梳理了我国地方政府治理研究的国夕卜根源,理论的引进、传播与形成过程,对我国当下地方政府治理研究现状作了简要的评析。     

论金融危机下高校思想政治教育工作的内容取向

国际金融危机不仅给我国经济社会发展带来严峻挑战,而且也给高校党建工作特别是思想政治教育工作带来新的挑战。高校思想政治教育工作是党建工作的重要组成部分,它的特殊主体是当代大学生。努力做好金融危机大背景下的高校思想政治教育工作,对加强大学生党建工作有重要意义。金融危机下高校思想政治教育工作,从内容取向方面来说,除了继续坚持对大学生进行原有的世界观、人生观和价值观教育以外,主要点可以概括为正确认识金融危机的本质、注重化解学生的心理危机、树立战胜金融危机的信心、拓宽知识结构和提高实践能力等几个方面。     

冷战初期日本南海政策及东南亚战略取向

冷战使日本在美国的全球战略中作用提升,成为反共"防波堤",其具有政治目的性的东南亚"经济外交"呈现出明显的海洋战略取向,且影响至今。因地缘利益、东南亚战略,日本南海政策的基本出发点自冷战开始后始终没变,即追随美国遏制中国政策,对南海诸岛归属问题上采取模糊态度和立场,这为后来南海周边某些国家侵占南海岛礁留下所谓借口。此时日本还曾插足于南海诸岛,由于海峡两岸对南海权益的维护使其非法行为无法为继,但随着经济的发展,日本越来越依赖南海航道和加大南海石油资源的开发,这决定其"关心"南海问题就是势所必然了。