脑心肌炎病毒VP1结构蛋白的可溶性表达及鉴定

为获得可溶性表达的脑心肌炎病毒(EMCV)结构蛋白VP1片段,将EMCV VP1基因克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中,并转化大肠杆菌BL21(DE3)表达菌中。采用不同温度、不同IPTG浓度及不同诱导时间诱导目的蛋白表达,以筛选VP1融合蛋白可溶性表达的最佳条件,并通过Western-blotting检测最佳条件下表达蛋白的免疫活性。PCR、酶切鉴定及测序结果表明,VP1基因已克隆入pGEX-4T-1质粒。经优化,确定VP1融合蛋白可溶性表达的最佳条件为:当D600nm值为0.4～0.6时,以0.25mmol/L IPTG于25℃条件下诱导表达12h。Western-blotting结果显示,诱导表达的蛋白具有免疫活性。     

防火墙的网络安全技术

本文分析了当前网络安全所面临的严峻问题,分析了网络攻击的主要手段,并就此提出了采用防火墙来实现网络安全的方法,叙述了防火墙的原理及体系结构,以及构建防火墙的几种方案。     

让爱国主义教育生动起来

“不读史无以爱其国家”,爱国主义教育是历史教学的永恒主题。中华民族曾经创造了令人无比自豪的辉煌灿烂的文化,也曾在遭受欺凌屈辱的过程中涌现出无数捍卫祖国尊严、追求民族独立的仁人志士、民族英雄,这些充满爱国主义内容的历史知识,是爱国主义教育的重要源泉。如何将这些内容在教与学的实践中变得更为生动具体,     

建设民族文化先进旗

<正>苏尼特右旗位于锡林郭勒草原深处,全旗总面积2.234万平方公里,人口6.8万,下设3个苏木3个镇。该旗有着丰厚的文化底蕴和丰富的文化资源,全国第一支乌兰牧骑队伍就诞生在这里。2005年,旗委、政府提出并确定了"建设民族文化先进旗"的目标,把民族文化工作提到了新的高     

脑心肌炎病毒环介导等温扩增快速检测方法的建立及初步应用

为建立快速检测脑心肌炎病毒(EMCV)的环介导等温扩增方法(LAMP),参照GenBank中EMCV基因组序列(X74312.1),针对EMCV的3D基因保守区域设计并合成了4条引物,对建立的反应体系进行条件优化,并进行特异性、敏感性试验及临床样本的检测。结果显示,成功建立了EMCV LAMP检测方法,且当内、外引物浓度比例为5∶1(即内、外引物浓度分别为50μmol/L、10μmol/L),反应温度为64℃,反应时间为60min时反应体系可达最佳。特异性和敏感性试验表明,该方法能够特异性地检测EMCV,且敏感性比常规RT-PCR法高10倍。分别用建立的LAMP法与ELISA法对临床样本进行检测,结果二者的符合率为97%。表明建立的LAMP方法特异性强、敏感性高,可适用于EMCV临床样本的快速检测。     

微博:中国协商民主发展的加速器

21世纪互联网与通信技术的快速发展,催生了新媒体的快速崛起。新媒体微博正以流动的、迷你的、瞬时的、扁平化的传播方式窜红中国,其开放、自由、个性化的姿态,深深吸引着国人,国人通过微博参与政治,"近似地"实践协商民主的理想,创造了虚拟的民主神话。本文以微博为研究视角,探讨微博与协商民主的关系、微博的优势以及微博对中国协商民主发展的积极影响。     

“药家鑫故意杀人案”引发的心理学思考

"药家鑫故意杀人案"引起社会各界的极大关注,我们从中可以得到很多的警示与启迪。文章从家庭教育方式的简单粗暴,底线教育的缺失,珍爱生命的人性教育的盲区,心理健康教育的忽视等方面进行了心理学分析与思考,并结合当前社会现状提出了改进建议。     

铿锵军魂铸就正义天平——记孝义市人民法院党组副书记、副院长李爱奎

他曾经是一名军人，如今是一名法官，他脱下了绿色的军装，穿上了黑色的法官服，他是领导眼中的好助手，他是干警眼中的好兄长，他是群众眼中的好公仆。他叫李爱奎，1959年5月出生于山西省左权县，1976年3月应征入伍，在北京军区炮兵十六师服役。1985年5月选调到孝义县武装部工作，历任政工科干事、秘书、军事科副科长、办公室主任。1996年3月从部队转业后被安排到孝义市人民法院工作，先后担任院长助理、纪检组长、副院长等职。     

盖他病毒重组E2蛋白间接ELISA检测方法的建立

参照GenBank中盖他病毒株E2蛋白氨基酸序列并进行密码子优化后,人工合成该基因,并将其定向克隆到表达载体pGEX-4T-1中,经酶切及测序鉴定均正确后,转化宿主菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达。以该表达蛋白作为诊断抗原,建立了检测猪盖他病毒抗体的E2-ELISA方法,并对临床血清样品进行检测。结果显示,重组表达的E2蛋白具有良好的抗原性和特异性。用建立的间接ELISA检测471份临床血清样品,检出抗体阳性119份,阳性率为25.27%。结果表明,本研究制备的重组E2蛋白具有良好的免疫原性,可应用于ELISA等相关检测方法的建立。     

鼠源VCAM-1基因TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立

为建立一种鼠源VCAM-1基因TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,以期为鼠源VCAM-1基因的动态检测提供有效的试验手段。根据GenBank中登录的鼠源VCAM-1基因序列,设计1对荧光定量PCR引物及1条探针,建立一种快速检测鼠源VCAM-1基因的实时荧光定量PCR方法,并对建立的方法进行条件优化与评价。结果显示,建立的实时荧光定量PCR方法线性关系较好,以质粒标准品构建的标准曲线相关系数r2为0.998;灵敏性、重复性及特异性均较高。可用于鼠源细胞中VCAM-1基因的定性鉴别和含量测定。结果表明,成功建立了一种快速准确检测鼠源VCAM-1基因的TaqMan实时荧光定量PCR法。