边缘无浆体MSP5蛋白基因的克隆及原核表达

参照已发表的边缘无浆体主要表面蛋白5(MSP5)基因的核苷酸序列,设计了1对特异性引物,以边缘无浆体基因组DNA为模板,采用PCR技术扩增获得了MSP5蛋白基因。将其克隆到pGEM-T Easy载体,并进行测序分析。结果表明,克隆的MSP5基因与GenBank上登录的Florida株MSP5蛋白基因的序列同源性达98.6%,编码氨基酸的同源性为99.0%,并且该序列包含有完整的开放阅读框,大小为633 bp。将该基因亚克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,构建了重组原核表达载体。将其转化到DH5α宿主菌中,用IPTG进行诱导表达,实现了融合表达,表达产物的分子质量为45 ku。Western-blot分析表明,此表达产物能够被抗边缘无浆体阳性血清所识别。     

残缘璃眼蜱人工培育及对环形泰勒虫的实验性传播

将采自内蒙古自治区的残缘璃眼蜱(Hyalomma detritum)饲喂于牛体,观察了成虫、幼虫、若虫在实验室饲喂条件下的生活周期及滞育现象;通过蜱传播试验证实,残缘璃眼蜱饥饿幼虫、若虫吸入病原,其蜕化之若虫、成虫能将环形泰勒虫(Theileria annulata)传播给敏感动物,而幼虫阶段吸入病原,如若虫阶段在兔体饱血,所蜕化产生的饥饿成虫不传播该病.     

山羊边虫病的研究——抗原制作及补体结合试验

用绵羊边虫感染除脾山羊,可使虫体迅速大量繁殖,红细胞染虫率达71％。用蒸馏水崩解红细胞,将移出的边虫用高速离心机沉淀,并以超声波粉碎,制作了特异性和敏感性良好的补反抗原。对人工感染和自然感染边虫的山羊进行补反检查,其检出率为100％。同时做了人工感染山羊抗体消长情况的检测,用含边虫血液接种山羊后,第5天即可检出补反抗体,15～45天补反抗体的滴度达到高峰,110天后仍可产生阳性反应。其结果证明:该法可作为口岸检疫、流行病学调查和免疫监测的试验方法,广泛应用。     

非洲猪瘟病毒解旋酶Q706L基因的生物信息学分析及原核表达

为了解非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)解旋酶pQ706L的功能,通过生物信息学方法对GenBank中公布的不同基因型的ASFV解旋酶Q706L基因序列进行分析,运用在线软件ExPASy、GOR4、SWISS-MODEL对该蛋白的理化性质及结构进行了预测分析,并进一步构建原核表达载体进行诱导表达及纯化鉴定。结果显示：Q706L基因长度为2 121 bp,在不同毒株和基因型间高度保守;经ExPASy预测,pQ706L蛋白的分子式为C₆₄₄₀H₁₀₇₆₁N₂₁₂₁O₂₆₄₃S₅₀₂,属于疏水性蛋白,稳定性差;GOR4预测的二级结构显示,α螺旋是其主要结构形式,占比为42.07%;三级结构预测报告QMQE值为0.38,覆盖率为66%。以ASFV-CN/SC/2019毒株基因组为模板,成功构建了原核表达质粒pET-30a-Q706L,进行诱导表达及SDS-PAGE分析,得到78.3 ku的蛋白。纯化后经Western-blot鉴定,获得了纯度较...     

羊泰勒虫病人工感染试验

在实验室条件下用采自甘肃省临潭县的青海血蜱饥饿成蜱人工叮咬绵羊,使其感染泰勒虫并发病,观察其虫血症、临床表现、血液学变化及病理剖检变化.结果,试验羊普遍出现稽留热、贫血、体表淋巴结肿胀等症状;血红蛋白含量从85 g/L降到40 g/L,红细胞总数从12.0×1012降到1.5×1012;内脏器官有不同程度地肿胀、出血;本病的潜伏期为22-28 d,红细胞染虫率最高可达39%.     

牛羊边虫和焦虫的冷冻保存试验

为便于人工感染和制作诊断抗原,笔者对牛的大巴贝西虫(Babesia major)、双芽巴贝西虫(B.bjgemina)、环形泰勒焦虫(Thcileria annulata)、环形泰勒裂殖体(Schizont)、牛边缘边虫(Anaplasma mairginale)和绵羊边虫(A.ovis)进行了超低温冷藏试验,获得了满意的结果     

微小牛蜱Bm91基因的克隆及在毕赤酵母中的表达

从我国半饱血微小牛蜱雌性成蜱肠道和唾液腺中提取总RNA;参照GenBank中已发表的微小牛蜱Bin91基因的核苷酸序列,设计了1对特异性引物.采用RT-PCR技术扩增Bm91基因,测序正确后将其亚克隆到巴斯德毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K的EcoR I酶切位点,构建重组表达载体pPIC9K-Bm91.再次测序正确后将其用Sac Ⅰ内切酶线性化,电转化毕赤酵母GS115并经G418抗性筛选高拷贝重组菌株后用甲醇诱导表达.表达产物经SDS-PAGE和Western-blot分析,结果显示,Bm91基因获得了成功表达,诱导表达的培养上清液中表达出具有反应活性的83 ku的重组Bm91蛋白.     

甘肃省张家川县羊泰勒虫病流行病学调查

采用访问调查、血片镜检等方法查出甘肃省张家川县东部、中部地区为羊泰勒虫病流行区.3～6月流行区内绵羊、山羊的当年羔羊,1岁和2岁以上羊的感染率分别为98.50%、6.87%和5.36%;发病率分别为96.50%、4.32%和3.21%;病死率分别为71.73%、38.18%和31.11%.     

甘肃省部分地区牛皮蝇蛆病的流行病学调查

为掌握牛皮蝇蛆病在甘肃地区的流行动态,2003～2005年在甘肃省玛曲县、天祝县、平凉市崆峒区的3个屠宰场剖检1 827头牛.结果发现,这3个县(区)均有牛皮蝇蛆病的感染,其中,玛曲县、平凉市崆峒区的皮蝇2期幼虫在牛食管的寄生率以10月份为最高,分别为48.5%和7.8%.表明,药物防治的最佳时间为10月份.     

青海血蜱成蜱cDNA表达文库的免疫学筛选及阳性克隆分析

采用兔抗青海血蜱幼蜱阳性血清,对青海血蜱成蜱cDNA表达文库进行免疫学筛选,并对获得的阳性克隆进行序列测定及同源性分析.结果显示,共获得9个新cDNA序列,其中3个新基因序列已被GenBank接受,并获得序列接受号.表明,从青海血蜱成蜱cDNA表达文库筛选到一批新基因,为青海血蜱保护性抗原的筛选奠定了基础.