微小隐孢子虫类钙调蛋白基因真核表达质粒的构建及在Hela细胞中的表达

为了构建微小隐孢子虫类钙调蛋白(calmodulin-like protein,CML)基因的真核表达质粒,并在Hela细胞中实现表达,以微小隐孢子虫卵囊cDNA为模板,通过PCR扩增CML基因,插入到克隆载体pMD18-T中。对经鉴定的pMD-CML重组质粒进行双酶切,将目的基因连接到经同样内切酶双酶切的真核表达载体pVAX1上。重组质粒经双酶切分析和测序鉴定后,用FuGENE HD转染试剂介导的方法,将重组表达质粒转染Hela细胞,用Western-blot技术和间接免疫荧光法检测外源基因的表达。结果显示,成功构建了微小隐孢子虫CML基因的真核表达质粒pVAX-CML,重组质粒在Hela细胞中实现了表达,表达产物具有良好的反应原性,为研究CML的特性和功能、寻找新的防控技术奠定了基础。     

弓形虫烯醇化酶2基因的原核表达与鉴定

为深入研究弓形虫烯醇化酶的生物学功能,根据已发表的eno2基因序列设计引物,通过RTPCR方法扩增弓形虫RH株的eno2基因。将eno2克隆到载体pET-28a(+)中后,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达并优化表达条件,SDS-PAGE分析表达情况,并通过Western-blot和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定其免疫活性。结果显示,eno2基因全长1 353bp,编码444个氨基酸,与GenBank中登录的弓形虫烯醇化酶基因的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列的同源性均高达99.8%,与其他物种的烯醇化酶的同源性较低。在pH7.5、28℃和IPTG终浓度0.1mmol/L条件下,重组蛋白ENO2得到高效可溶性表达,分子质量约为55ku。Western-blot结果显示,重组蛋白能被感染弓形虫的犬阳性血清识别,说明ENO2具有较好的反应原性,可以作为血清学诊断抗原。IFA表明,NO2在弓形虫的细胞质和细胞核中均有分布。结果表明,本研究成功获得了可溶性、具有良好免疫活性的弓形虫重组蛋白ENO2,为深入研究其生物学功能奠定了基础。     

急性乙醇中毒和外伤在蛛网膜下腔出血致死机制中的作用

目的研究人脑在急性乙醇中毒状态下tPA、MMP-2、MMP-9及AEG-1表达水平与乙醇浓度的关系,分析乙醇与外伤在蛛网膜下腔出血死亡机制中的作用。方法选取15例实际案例,提取脑组织进行组织病理学检查、心血进行乙醇浓度检测,用免疫组织化学法观察人脑干、大脑、小脑tPA、MMP-2、MMP-9及AEG-1表达水平。结果急性乙醇中毒外伤组和急性乙醇中毒组的脑组织肿胀。除小脑tPA外,tPA、MMP-2、MMP-9及AEG-1表达水平在饮酒者较未饮酒者在脑干、大脑、小脑均有升高(P0.05),MMP-2、MMP-9和AEG-1表达水平与心血乙醇浓度存在正相关(P0.05,r0.6)。结论急性乙醇中毒状态下人脑tPA、MMP-2、MMP-9、AEG-1表达较未饮酒者均显著增强,MMP-2、MMP-9及AEG-1表达水平与乙醇浓度存在相关性,乙醇对脑细胞有毒性作用。     

数字录音真实性司法鉴定研究现状

随着数字录音设备的普及,以及音频编辑技术的大众化趋势,传统的检验方法和技术在当前数字录音真实性司法鉴定实践中面临着极大的挑战。模式识别和人工智能等领域的最新进展为数字录音真实性鉴定提供了有效的检验角度。通过分析和总结当前机器学习和模式识别等研究领域在数字录音真实性研究方面的前沿探索性成果,结合对当前录音真实性司法鉴定实践应用中的关键技术和方法的论述,分析和探讨数字录音真实性司法鉴定领域研究所面临的问题、挑战及未来发展趋势。指出专家经验判断分析技术和统计量化检验方法的协作并存是数字录音真实性鉴定的必然趋势和高效解决方案。     

中国文化在经济全球化时代的定位

在经济全球化时代 ,中国文化必须找准自己在世界大格局中的定位。首先应当看到中国文化有巨大的生命活力 ,它绵延五千年不断发展演变。振兴中华 ,最重要的是弘扬和培育民族精神 ,焕发民族的自尊心、自信心和自豪感。对中国文化要进行反思 ,确立新的文化取向。要重视民族文化的科学含量 ,在学习先进文化的同时 ,努力创新 ,在科学技术上作出新的贡献。     

私营企业制度法律问题研究

我国目前已形成私营企业的基本法律框架,而建立在所有制基础上的私营企业的概念已不符合市场经济的发展需求,现行立法上存在着诸多对私营企业的不平等待遇,应调整私营企业有关立法并加以完善。     

习近平关于加强党的政治建设的理论探析——基于《摆脱贫困》的研究

习近平在宁德地区工作期间大力推进闽东地区经济发展、脱贫致富,同时也十分重视抓党的政治建设,强调必须坚持马克思主义的指导地位,增强为人民服务的党性观念;加强党的政治领导,充分发挥党组织的核心作用;从严治党,清廉从政,把廉政建设引向深入;坚持走群众路线,练好密切联系群众这个基本功。习近平在宁德期间关于党的政治建设的理论思考,对于当前中国共产党加强党的政治建设具有十分重要的时代价值。     

以共同育儿为业:跨越儿童抚育的家庭边界——以一个城市社区的“抱团养娃”实践为例

本文聚焦于城市化背景下的"抱团养娃"实践,深入探讨在抚育职责被"家庭化"的当下,抚育实践如何在一定程度上重新跨越"家庭"的边界。以社区共育为基点,妈妈们的努力既从私人层面上为在陌生城市中资源不足的小家庭找到更多社会支持,又在公共层面上带动孩子们以温度和情感重塑社区认同、黏合社会转型带来的制度缝隙,体现出独特的现实意义与支持力量。"以共同育儿为业"背后,是女性试图在既有的结构约束下找到被私人化的抚育照料重担与公共生活之间的连接点,在本研究中体现为共育支持网络的形成、共育友好空间的营造、亲子活动内容的生产和共育文化的建构四个方面。这为思考如何将"社会"重新带回抚育实践中提供了想象,也拓宽了对女性主体性的理解。     

我国全能型政府职能的历史成因与改革方向

我国是一个通过渐进改革建立社会主义市场经济的国家,正经历着从计划经济体制下的全能型政府向社会主义市场经济体制下的服务型政府的转变。我国政府类型的选择及其职能的转换,同我国现代化(工业化)的发展阶段及其诉求紧密相连。结合我国国情和国外经验,我国政府职能转变的未来之路必须继续深化行政体制改革,理顺政府与市场、与社会的关系,既要发挥市场在资源配置中的决定性作用,也要更好地发挥政府作用。